高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（J XA1-R株）免疫后病毒血癥和抗體消長(zhǎng)規(guī)律

魏園園，顧貴波，申冠男，趙　培，李井春，王　冰，楊本勇

（遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 遼寧省動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110164）

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（J XA1-R株）免疫后病毒血癥和抗體消長(zhǎng)規(guī)律

魏園園，顧貴波，申冠男，趙培，李井春，王冰，楊本勇

（遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 遼寧省動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110164）

應(yīng)用高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）對(duì)28-30日齡的仔豬進(jìn)行免疫，前8周每周采血，8周后每2周采血進(jìn)行疫苗毒核酸檢測(cè)和抗體水平檢測(cè)，直至免疫后第16周。結(jié)果表明，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）在血清中存在的最長(zhǎng)時(shí)間大約為6周；抗體從免疫后第2周開始轉(zhuǎn)陽(yáng)，至第3周時(shí)全部為陽(yáng)性，并且抗體水平不斷上升，至免疫后第10周時(shí)平均抗體水平達(dá)到最高。

仔豬；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）；免疫；存在時(shí)間

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（High pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HP-PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）變異株引起的一種急性高致死性疫病。發(fā)病主要特征為懷孕母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、木乃伊胎等，母豬流產(chǎn)率可達(dá)30%以上；仔豬出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸道癥狀，感染率可達(dá)100%，死亡率在50%以上。目前我國(guó)使用的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗均為活疫苗，據(jù)報(bào)道活疫苗免疫后可在動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制并持續(xù)存在。為摸清高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后在豬體內(nèi)的存在時(shí)間，我們進(jìn)行了本試驗(yàn)，報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)豬在某豬場(chǎng)選擇28～30日齡、未進(jìn)行高致病性豬繁殖與呼吸綜合征免疫的健康仔豬20頭，編號(hào)為A1～A20。

1.2疫苗高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株），中牧實(shí)業(yè)股份有限公司成都藥械廠生產(chǎn)，批號(hào)：1302027-1。

1.3高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司［1］，批號(hào)：JR20131106P。

1.4豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京天之泰生物科技有限公司，法國(guó)LSI公司生產(chǎn)。

1.5核酸提取試劑核酸提取試劑盒（磁珠法），購(gòu)自西安天隆生物科技有限公司。

1.6試驗(yàn)器材eppendorf微量移液器，ABI 7500Fast熒光PCR儀，西安天隆生物科技有限公司，NP968核酸提取儀，伯樂iMark酶標(biāo)儀。

1.7免疫注射按疫苗說明書提供的免疫劑量和注射部位對(duì)實(shí)驗(yàn)豬進(jìn)行免疫注射。

1.8采血免疫后每隔1周采血1次，連續(xù)采8周；以后每隔2周采血1次，一直采到免疫后第16周。無菌分離血清，進(jìn)行高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗毒（JXA1-R株）核酸檢測(cè)。

1.9高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）核酸檢測(cè)用熒光RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.9.1核酸提取在96孔核酸提取板的第1及第7列孔中分別加入200 μL血清，10 μL Proteinase K，4 μL Acryl Carrier，然后將板放入核酸提取儀中，按說明書程序進(jìn)行自動(dòng)化提取。

1.9.2熒光PCR檢測(cè)取2.5 μL模板RNA、6.6 μL DEPC水、13.9 μL RT-PCR反應(yīng)液、1.0 μL酶混合液、1.0 μL熒光探針放入熒光PCR反應(yīng)管中，總體積25 μL。在熒光PCR儀上按以下程序進(jìn)行反應(yīng)：42℃ 5 min，95℃ 10 s；95℃ 5 s，60℃35 s，45個(gè)循環(huán)，在每次循環(huán)第二步（60℃35 s）收集熒光信號(hào)。判定標(biāo)準(zhǔn)：Ct值≤38.0為陽(yáng)性，Ct值＞38.0或無Ct值為陰性。

1.10豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)按試劑說明書的步驟和要求操作。阻斷率（IRPC）大于20%為抗體陽(yáng)性，阻斷率越大，抗體水平越高。

2　結(jié)果與分析

2.1JXA1-R株疫苗核酸檢測(cè)結(jié)果見表1。由表1可以看出，在免疫后1周時(shí)所有試驗(yàn)豬疫苗毒核酸均為陽(yáng)性，陽(yáng)性率100%，從免疫后第2周開始有1頭豬疫苗毒核酸已經(jīng)轉(zhuǎn)陰，此后陽(yáng)性率開始下降，至免疫后第6周時(shí)降為40%，至第7周時(shí)降為0%，并一直持續(xù)到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的免疫后第16周。表明，JXA1-R株高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗毒的病毒血癥時(shí)間最短為1周，最長(zhǎng)為6周。

表1　血清中J XA1-R株疫苗毒核酸檢測(cè)

試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，有4頭豬（A11、A12、A13、A19）疫苗毒核酸轉(zhuǎn)陰后間隔1～3周又出現(xiàn)陽(yáng)性情況，表現(xiàn)為間歇性帶毒。

2.2豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)結(jié)果見表2。從表2可以看出，免疫前抗體均為陰性，免疫后1周時(shí)陽(yáng)性率為25%（5/20），免疫后2周時(shí)陽(yáng)性率70%（14/20），免疫后第3周時(shí)陽(yáng)性率達(dá)到100%（20/20），一直持續(xù)至第5周，第6周時(shí)陽(yáng)性率下降為80%（16/20），從第7周開始陽(yáng)性率又上升為100%（10/10），并一直持續(xù)至第16周。從中插彩版圖1中可以看出試驗(yàn)豬的抗體消長(zhǎng)變化規(guī)律。試驗(yàn)豬的平均抗體阻斷率也在不斷上升，一直上升至免疫后第10周達(dá)到最高值91.4%后，開始慢慢下降。

表2　豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)

3　討論

3.1從試驗(yàn)豬血清中高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗毒（JXA1-R株）存在時(shí)間的變化規(guī)律可以看出，疫苗毒在不同豬群、不同豬個(gè)體中存在時(shí)間差異較大，最短的只存在1周，最長(zhǎng)的可以達(dá)到免疫后第6周。即高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）免疫后病毒血癥持續(xù)時(shí)間為6周。

3.2本試驗(yàn)的抗體檢測(cè)結(jié)果表明，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗毒（JXA1-R株）免疫后第2周抗體開始轉(zhuǎn)陽(yáng)，至第3周時(shí)全部為陽(yáng)性，并且抗體水平不斷上升，至免疫后第10周時(shí)平均抗體水平達(dá)到最高。但從圖1中可以發(fā)現(xiàn)，不同豬群和不同豬只的抗體水平存在較大差異，并且抗體水平上升的過程并非是連續(xù)的，有的豬在上升過程中會(huì)有短暫的下降，這可能與疫病狀況、生物安全水平、飼養(yǎng)管理水平等因素有關(guān)。

3.3試驗(yàn)豬中A11、A12、A13、A19號(hào)豬疫苗毒轉(zhuǎn)陰后間隔1～3周又出現(xiàn)了轉(zhuǎn)陽(yáng)的情況，表現(xiàn)為間歇性攜帶疫苗毒，而從圖1抗體變化曲線中可以看出，這4頭豬的抗體在8周之前一直處于比較低的水平。因此筆者分析認(rèn)為，間歇性攜帶疫苗毒現(xiàn)象的出現(xiàn)可能與個(gè)別豬只免疫抗體水平低有關(guān)?；钜呙缑庖吆蟠碳?dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體，產(chǎn)生的抗體又不斷的將活疫苗毒中和，所以在動(dòng)物體內(nèi)疫苗毒與抗體處于一種相互斗爭(zhēng)的狀態(tài)［1-2］。隨著免疫時(shí)間的延長(zhǎng)，抗體水平進(jìn)一步提高，疫苗毒不斷的被中和，以致無法被檢測(cè)到，表現(xiàn)為病毒核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性。但是如果動(dòng)物感染了某些疫病或飼養(yǎng)管理方面出現(xiàn)問題，將會(huì)直接影響機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能，導(dǎo)致抗體水平較低，在與病毒的斗爭(zhēng)中處于一種此消彼長(zhǎng)和此長(zhǎng)彼消的狀態(tài)，表現(xiàn)為間歇性帶毒［3］。

［1］魏津，蔣卉，戴志紅，等.高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株）病毒含量熒光定量PCR方法的建立［J］.中國(guó)獸藥雜志，2013，47（10）：39-42.

［2］黃名英，傅安靜，劉平，等.高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染早期體內(nèi)增殖規(guī)律調(diào)查［J］.畜牧與獸醫(yī)，2013，45（2）：50-54.

［3］李明義，白志娟，王莉娟，等.豬瘟滅活疫苗抗體消長(zhǎng)規(guī)律動(dòng)態(tài)研究［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005，27（5）：385-388.

S858.28

A

0529-6005（2016）04-0044-02

2014-10-27

遼寧省重大科技攻關(guān)項(xiàng)目（2011214001）

魏園園（1983-），女，助理獸醫(yī)師，本科，主要從事動(dòng)物疫病防控、檢測(cè)、研究等工作，E-mail：21802661@qq.com

楊本勇，E-mail：benyong@tom.com