重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核病布魯菌病的調(diào)查

李前勇,，張德志，曹立亭，熊仲良，吳柏青，左福元

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)醫(yī)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市動(dòng)物疫病防控中心，重慶 渝北 401120；3.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)科系，重慶 榮昌 402460）

重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核病布魯菌病的調(diào)查

李前勇1,，張德志1，曹立亭1，熊仲良2，吳柏青1，左福元3

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)醫(yī)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市動(dòng)物疫病防控中心，重慶 渝北 401120；3.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)科系，重慶 榮昌 402460）

采用牛提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)結(jié)合γ-干擾素試驗(yàn)、虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝結(jié)試驗(yàn)及ELISA法分別對(duì)重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病進(jìn)行了抽樣檢測(cè)。結(jié)果顯示，該區(qū)域肉牛結(jié)核病陽性檢出率為1.2%，布魯菌病陽性檢出率為1.04%。其中，庫(kù)區(qū)東北部區(qū)縣肉牛結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，分別為1.83%、1.14%；3種肉牛養(yǎng)殖規(guī)模條件下，個(gè)體散養(yǎng)農(nóng)戶牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，分別為2.21%、2.94%；所調(diào)查的3個(gè)年齡段牛群中，19月齡以上牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率最高，分別為2.91%、4.85%。

重慶三峽庫(kù)區(qū)；肉牛；結(jié)核?。徊剪斁?/p>

牛結(jié)核病和布魯菌病是由牛結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium bovis）、布魯菌屬細(xì)菌（Genus Brucella）所引起的兩種重要人畜共患傳染病，流行較廣，在世界各地均有分布，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)生產(chǎn)和人類健康均構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，是世界衛(wèi)生組織（OIE）列為強(qiáng)制通報(bào)的疾病，我國(guó)列為B類動(dòng)物疫?。?-3］。牛結(jié)核病、布魯菌病在我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)生產(chǎn)中較易發(fā)生，每年都有相關(guān)報(bào)道，但多偏向于奶牛，而對(duì)于肉牛結(jié)核病、布魯菌病的報(bào)道卻很少。我國(guó)是世界第4大養(yǎng)牛國(guó)，牛肉年產(chǎn)量達(dá)679.5萬噸，近年來肉牛養(yǎng)殖發(fā)展勢(shì)頭較好［1］；重慶三峽庫(kù)區(qū)位于我國(guó)西南肉牛主要產(chǎn)區(qū)，可利用草資源豐富，2001年市政府實(shí)施了草食牲畜百萬工程項(xiàng)目，促進(jìn)了該市肉牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，據(jù)報(bào)道，2010年重慶市肉牛存欄量已達(dá)140余萬頭［2］，但尚未見我市肉牛結(jié)核病、布魯菌病的調(diào)查報(bào)道。為此，我們于2012-2013年對(duì)重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核、布魯菌的感染情況進(jìn)行了調(diào)查，以期為該區(qū)域肉牛結(jié)核病、布魯菌病制定科學(xué)的防制對(duì)策提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1調(diào)查牛只以重慶三峽庫(kù)區(qū)巫山、奉節(jié)、云陽、開縣、萬州、梁平、忠縣、石柱、墊江、豐都、長(zhǎng)壽、涪陵、渝北、巴南、江津等15區(qū)縣肉牛為調(diào)查對(duì)象，按規(guī)?；?chǎng)（存欄牛＞500頭）、肉牛養(yǎng)殖專業(yè)戶及個(gè)體散養(yǎng)農(nóng)戶3種養(yǎng)殖方式，豐都、云陽、石柱3個(gè)肉牛養(yǎng)殖優(yōu)勢(shì)區(qū)縣各選擇規(guī)模場(chǎng)2個(gè)、養(yǎng)殖專業(yè)戶5個(gè)、散養(yǎng)農(nóng)戶5個(gè)，其余區(qū)縣各選擇養(yǎng)殖專業(yè)戶5個(gè)、散養(yǎng)農(nóng)戶5個(gè)，按抽樣比例5%確定調(diào)查牛只，共得1 249頭牛只作為調(diào)查試驗(yàn)對(duì)象。

1.2試驗(yàn)試劑牛提純結(jié)核菌素（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，批號(hào)：201007）；牛結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素檢測(cè)試劑盒（瑞士進(jìn)口分裝，北京測(cè)迪科技有限公司）；牛布魯菌病陽性、陰性血清（中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)：201104）；虎紅平板凝集診斷抗原、試管凝集診斷抗原（中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)：201110）；牛布魯菌病ELISA檢測(cè)試劑盒（美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品，P04130-2）。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1結(jié)核病的檢測(cè)按照《動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)（GB/T18645-2002）》，采用提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)對(duì)參試肉牛進(jìn)行檢測(cè)，依據(jù)國(guó)標(biāo)規(guī)定進(jìn)行陽性判斷。對(duì)陽性病牛再用γ-干擾素試驗(yàn)［3］進(jìn)行復(fù)檢。

1.3.2布魯菌病的檢測(cè)依據(jù)《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)（GB/T 18646-2002）》，對(duì)參試肉牛先采用虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行初篩，再用試管凝結(jié)試驗(yàn)對(duì)初篩陽性樣本進(jìn)行復(fù)檢；對(duì)凝集試驗(yàn)呈現(xiàn)陽性、可疑樣本運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)［4］進(jìn)行最終檢測(cè)。

2　結(jié)果

2.1重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病檢出情況1 249頭參試肉牛結(jié)核病分別采用提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)（PPD皮內(nèi)注射試驗(yàn)）、γ-干擾素試驗(yàn)的檢出情況，見表1。PPD皮內(nèi)注射試驗(yàn)與γ-干擾素試驗(yàn)檢出牛只的陽性符合率為78.95%。

表1　重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核病調(diào)查結(jié)果

參試肉牛布魯菌病分別采用血清虎紅平板試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的檢出情況，見表2。比較3種檢測(cè)方法，試管凝集試驗(yàn)與虎紅平板試驗(yàn)的陽性符合率為81.25%，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法與試管凝集試驗(yàn)法的陽性符合率為100%。

2.2不同飼養(yǎng)規(guī)模下，肉牛結(jié)核病、布魯菌病陽性情況結(jié)果表明，不同飼養(yǎng)規(guī)模下，重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率表現(xiàn)為散養(yǎng)農(nóng)戶牛群＞專業(yè)養(yǎng)殖戶牛群＞規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)，見表3。

表2　重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛布魯菌病調(diào)查結(jié)果

表3　重慶三峽庫(kù)區(qū)三種飼養(yǎng)規(guī)模下牛結(jié)核病、布魯菌病調(diào)查結(jié)果

2.3不同年齡肉牛群結(jié)核病、布魯菌病陽性情況結(jié)果表明，重慶三峽庫(kù)區(qū)19月齡以上牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，6月齡以下犢牛群所檢兩種病的陽性率最低，其中布魯菌病陽性率為0。見表4。

表4　重慶三峽庫(kù)區(qū)不同年齡肉牛結(jié)核病、布魯菌病調(diào)查結(jié)果

2.4不同地理區(qū)域牛群結(jié)核病、布魯菌病陽性情況對(duì)重慶三峽庫(kù)區(qū)東北部（包括巫山、奉節(jié)、云陽、開縣、萬州、梁平）、庫(kù)區(qū)中部（墊江、忠縣、石柱、豐都、涪陵）及庫(kù)區(qū)西南部（有江津、渝北、巴南、長(zhǎng)壽）肉牛結(jié)核病、布魯菌病調(diào)查結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果表明，庫(kù)區(qū)東北部區(qū)縣肉牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性率為最高，庫(kù)區(qū)西南部肉牛結(jié)核病未檢出，但該區(qū)域布魯菌病陽性卻高于庫(kù)區(qū)中部。見表5。

表5　重慶三峽庫(kù)區(qū)不同區(qū)域牛群結(jié)核病、布魯菌病調(diào)查結(jié)果

3　討論

據(jù)記載，牛結(jié)核病于1955年在我國(guó)牛群中的檢出率高達(dá)36.4%［5］，1952-1982年間，我國(guó)牛羊布魯菌病的血清陽性率高約41.27%［6］。以后，我國(guó)獸醫(yī)科技人員對(duì)上述兩種疾病均有較多報(bào)道。重慶三峽庫(kù)區(qū)是我國(guó)牛業(yè)生產(chǎn)的主要區(qū)域之一，進(jìn)入21世紀(jì)以來，在市政府實(shí)施“草食牲畜百萬工程”項(xiàng)目的帶動(dòng)下，庫(kù)區(qū)肉牛養(yǎng)殖業(yè)進(jìn)入了快速發(fā)展時(shí)期，截止目前，該區(qū)域年存欄肉牛已達(dá)到180萬頭，但尚未見肉牛結(jié)核病、布魯菌病流行病學(xué)的報(bào)道。本試驗(yàn)對(duì)重慶三峽庫(kù)區(qū)15區(qū)縣肉牛群進(jìn)行了牛結(jié)核病、布魯菌病的隨機(jī)抽樣調(diào)查，結(jié)果表明，結(jié)核病的陽性檢測(cè)率為1.2%，布魯菌病的陽性檢出率為1.04%。本調(diào)查結(jié)果比新疆［7］、青海湟中地區(qū)［8］、陜西［9］等我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)優(yōu)勢(shì)省區(qū)奶牛結(jié)核病感染率的報(bào)道略高，但卻顯著低于郭開彬［5］對(duì)四川某縣奶牛場(chǎng)結(jié)核病的陽性檢出率（25.57%）、程振濤等［10］對(duì)貴州省某種牛場(chǎng)牛結(jié)核病感染率（9.32%）和布魯菌病感染率（2.48%）的報(bào)道。我國(guó)《動(dòng)物布魯菌病控制技術(shù)規(guī)范》（NY/T907-2004）及《牛結(jié)核菌病防治技術(shù)規(guī)范》（2009）規(guī)定，牛魯桿菌病省級(jí)控制標(biāo)準(zhǔn)為牛群布魯菌病的陽性率應(yīng)低于1.0%（試管凝結(jié)法）；牛結(jié)核病省級(jí)控制、凈化標(biāo)準(zhǔn)為牛群的陽性率應(yīng)低于0.05%（PPD法），由此說明，重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病的防控未達(dá)到國(guó)家規(guī)定的控制或凈化標(biāo)準(zhǔn)。

我國(guó)動(dòng)物結(jié)核菌病診斷技術(shù)（GB/T 18645-2002）規(guī)定，牛結(jié)核病的檢測(cè)應(yīng)使用牛結(jié)核分支桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)進(jìn)行。然而，采用牛結(jié)核分支桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)檢查牛結(jié)核病存在檢出假陽性［12］，γ-干擾素試驗(yàn)法是一種新型的牛結(jié)核病診斷方法，已被OIE認(rèn)定為惟一的輔助診斷試驗(yàn)，該法檢測(cè)牛結(jié)核病具有特異性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)［11］。本試驗(yàn)過程中，采用了γ-干擾素試驗(yàn)法對(duì)PPD法檢出陽性牛進(jìn)行再次檢測(cè)，共剔除假陽性牛4頭，PPD皮內(nèi)注射試驗(yàn)與γ-干擾素試驗(yàn)檢出牛只的陽性符合率為78.95%。這一結(jié)果與陳祥等［3］的報(bào)道基本一致。動(dòng)物布魯菌病診斷技術(shù)（GB/T 18646-2002）規(guī)定，牛布魯菌病應(yīng)使用虎紅平板凝集結(jié)合試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)；但是，目前研究認(rèn)為，這種方法存在特異性、敏感性不高的缺點(diǎn)［12］，牛布魯菌病酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)法是OIE2002年列為用于牛布魯菌病檢測(cè)的一種新方法，該法具有快速、方便、特異、敏感等特點(diǎn)［4］，并有逐漸代替?zhèn)鹘y(tǒng)經(jīng)典的虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)的趨勢(shì)。本研究在試驗(yàn)過程中，對(duì)試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)出的陽性牛血清樣本，采用美國(guó)IDEXX公司出品的牛布魯菌病ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行了再次檢測(cè)，結(jié)果該法與試管凝集試驗(yàn)檢查的陽性符合率為100%，這一結(jié)果與宮曉煒等［4］的報(bào)道一致。

對(duì)重慶三峽庫(kù)區(qū)不同飼養(yǎng)規(guī)模、不同年齡、不同區(qū)域肉牛群牛結(jié)核病、布魯菌病的檢出情況進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)庫(kù)區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病陽性檢出率均表現(xiàn)為散養(yǎng)農(nóng)戶牛群＞專業(yè)養(yǎng)殖戶牛群＞規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)；19月齡以上牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，6月齡以下犢牛群所檢兩種病的陽性率最低；庫(kù)區(qū)東北部區(qū)縣肉牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性率均為最高，庫(kù)區(qū)西南部肉牛結(jié)核病卻未檢出。造成這種現(xiàn)象的原因可能是庫(kù)區(qū)屬于高山地區(qū)，肉牛飼養(yǎng)個(gè)體農(nóng)戶分散，牛疫病防控知識(shí)傳遞不暢，開展結(jié)核病、布魯菌病檢測(cè)工作有實(shí)際困難；19月齡以上肉牛多為種牛和繁殖母牛，這些牛群經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，即使過去表現(xiàn)檢疫陽性，也因經(jīng)濟(jì)上的原因?qū)嵭刑蕴欣щy，同時(shí)該牛群飼喂時(shí)間長(zhǎng)，易與羊、豬等結(jié)核病、布魯菌病易感動(dòng)物接觸，致使感染幾率升高；庫(kù)區(qū)東北部是重慶市的偏遠(yuǎn)山區(qū)，信息到達(dá)不暢，養(yǎng)牛戶牛疫病防控意識(shí)淡薄，因而造成了該區(qū)域內(nèi)牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率最高的局面。

本結(jié)果表明，重慶三峽庫(kù)區(qū)肉牛群結(jié)核病、布魯菌病的防控均未達(dá)到國(guó)家規(guī)定的控制或凈化標(biāo)準(zhǔn)，并存在一定的疫病流行風(fēng)險(xiǎn)。建議當(dāng)?shù)貞?yīng)切實(shí)開展肉牛結(jié)核病、布魯菌病的檢疫，加大宣傳力度，搞好活畜的市場(chǎng)監(jiān)管，有效控制肉牛結(jié)核病、布魯菌病的蔓延。

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Investigation of Tuberculosis and Brucellosis in Beef Cattlefrom ThreeGorges Reservoir of Chongqing

LI Qian-yong1，ZHANG De-zhi1，CAO Li-ting1，XIONG Zhong-liang2，WU Bai-qing1，ZUO Fu-yuan3
（1.The Department of Veterinary Medicine，Southwest University Rongchang Campus，Chongqing 402460，China；2.Center for Animal Disease Control and Prevent of Chongqing，Chongqing 401120，China；3.The Department of Animal Science，Southwest University Rong-chang Campus，Chongqing 402460，China）

Detection of tuberculosis and brucellosis in beef cattle from three gorges reservoir of Chongqing was performed by methods including bovine purified tuberculin intradermal allergic combine gamma-interferon test，rose bengal precipitation test，standard tube agglutination test，and ELISA.Our results showed that the positive rate of tuberculosis was 1.2%，and brucellosis was 1.04%.The positive rates of tuberculosis and brucellosis in beef cattle from northeastern counties in the reservoir area were higher than that of libraries in Central and Southwest，which were 1.83%and 1.14%，respectively.The tuberculosis and brucellosis positive rates in individual backyard farm-raised cattles were the highest，which were 2.21%and 2.94%，respectively.The positive rate in cattle older than 19 months was also the highest，which were 2.91%and 4.85%，respectively.

Three Gorges Reservoir of Chongqing；Beef Cattle；Tuberculosis；Brucellosis

S858.23

A

0529-6005（2016）04-0003-03

2015-03-02

國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2011BAD36B01）；重慶市科技支撐示范工程項(xiàng)目（jcsf121-2012-01-1）

李前勇（1966-），男，副教授，博士，研究方向?yàn)槿馀＜膊》揽?，E-mail：qianyong_l@126.com