北五味子乙素對大鼠離體心肌缺血再灌注損傷的保護作用及分子機制

孫紅霞，陳建光*

（北華大學藥學院，吉林 吉林 132013）

北五味子乙素對大鼠離體心肌缺血再灌注損傷的保護作用及分子機制

孫紅霞，陳建光*

（北華大學藥學院，吉林 吉林 132013）

目的：觀察北五味子乙素（schisandrin B，SchB）對缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）大鼠離體心臟功能、梗死面積、乳酸脫氫酶及相關(guān)蛋白表達的影響，探討其對I/R損傷的保護作用及分子機制。方法：Wistar大鼠50 只，隨機分為5 組：空白對照組（CON）、缺血再灌注組（I/R）、SchB預(yù)保護組（SchB）、PI3K抑制劑組（I/R+SchB+LY）、腺苷酸活化的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）抑制劑組（I/R+SchB+CC）。采用Langendorff法建立離體大鼠心臟I/R模型，心肌缺血2 h，再灌注5、15、30、60 min。觀察I/R期間室內(nèi)壓最大上升速率（+dp/dtmax）、室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dtmax）、左心室舒張末壓、冠脈流量和心率；測定心臟灌流液中乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）含量，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyltertrazolium chloride，TTC）染色測定各組心肌梗死面積；免疫印跡檢測心肌中總蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）、磷酸化Akt（p-Akt）、總糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthease kinase-3β，GSK-3β）、磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白表達。結(jié)果：SchB可顯著改善I/R所致的心肌功能損傷，減少梗死面積，提高心肌中p-Akt和p-GSK-3β蛋白表達。結(jié)論：SchB對大鼠離體心臟I/R損傷具有一定保護作用，其機制可能與激活A(yù)MPK和PI3K/Akt信號通路有關(guān)。

北五味子乙素；心肌缺血再灌注；損傷；分子機制

孫紅霞， 陳建光. 北五味子乙素對大鼠離體心肌缺血再灌注損傷的保護作用及分子機制［J］. 食品科學， 2016， 37（15）: 237-241. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615040. http://www.spkx.net.cn

SUN Hongxia， CHEN Jianguang. Protective effect of schisandrin B on the isolated rat heart against myocardial ischemia/ reperfusion injury and its molecular mechanism［J］. Food Science， 2016， 37（15）: 237-241. （in Chinese with English abstract）

近年來隨著溶栓療法、經(jīng)皮冠脈介入療法、冠狀動脈旁路搭橋術(shù)（coronary artery bypass graft，CABG）及心臟移植術(shù)等廣泛用于臨床，心臟病的治療進入再灌注時期。再灌注期間，大量活化的中性粒細胞聚集在心肌微血管內(nèi)并浸潤到心肌組織中，通過釋放細胞炎性物質(zhì)、氧自由基、蛋白酶等物質(zhì)引起心肌損傷［1-5］。心肌缺血/再灌注損傷（myocardial ischemia/reperfusion injury，MI/RI）發(fā)病機制復(fù)雜，至今尚未完全闡明。近幾年研究表明五味子具有保護心肌作用，但其保護心肌的活性成分及作用機制目前尚未明確［6］。本實驗前期研究已證實北五味子乙素對大鼠對在體MI/RI具有保護作用，本實驗采用Langendorff法觀察大鼠離體心臟缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）模型，觀察北五味子乙素（schisandrin B，SchB）對離體心臟I/R損傷的保護作用，探討其體外作用及其機制，為進一步闡述其對心肌缺血再灌注損傷保護作用及其分子機制提供參考。

1　材料與方法

1.1試劑、動物與儀器

北五味子乙素（SchB），相對分子質(zhì)量400.46，分子式：C23H28O6，高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）檢測其純度＞97.0%，五味子乙素是在中藥北五味子中含量最高的聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素，由中國藥品生物制品檢定所提供，藥物在實驗時用任氏液（Krebs-Henseleit，K-H液）配成所需濃度；乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）試劑盒 南京建成生物工程研究所；2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyl tertrazolium chloride，TTC）美國Sigma公司；磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol-3 kinase，PI3K）抑制劑LY294002（簡稱LY）、腺苷酸活化的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）抑制劑復(fù)合物C（簡稱CC）、兔抗大鼠Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthease kinase-3β，GSK-3β）、磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）抗體美國Cell Signaling公司。

健康雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量180～220 g，購于長春高新醫(yī)學實驗動物研究中心，許可證號：SCXK-（吉）20013-0001。于清潔級飼料室飼養(yǎng)，定時喂食，飲水不限。

MP-72橋式放大器 美國AD Instrument公司。

1.2方法

1.2.1大鼠離體心肌缺血再灌注損傷模型制備

大鼠腹腔注射3%戊巴比妥30 mg/kg，肝素500 IU/kg，麻醉后迅速開胸取出心臟，放入盛有4 ℃ K-H液的玻璃皿中，修剪主動脈根部周圍組織，游離主動脈，懸掛于改良Langendorff心臟灌流裝置上［7-8］，結(jié)扎固定，恒壓灌流，剪開肺動脈圓錐以開放冠脈流出道，剪開左心耳，將與壓力傳感器連接的乳膠水囊經(jīng)左心房通過二尖瓣置于左心室，通過張力換能器連接生物信號采集處理系統(tǒng)，然后將心臟置于37 ℃保溫缸內(nèi)，向球囊內(nèi)緩慢注入生理鹽水，調(diào)節(jié)乳膠水囊壓力，使左心室舒張末壓（left ventricular end-diastolic pressure，LVEDP）維持在8～10 mmHg。各組均由主動脈恒壓灌注預(yù)先升溫至37 ℃，并用體積分數(shù)95% O2與5% CO2混合氣體持續(xù)充氣平衡30 min的K-H液，灌注壓力為90 cm H2O。30 min后分別用相應(yīng)25 ℃心臟停搏液誘導(dǎo)心臟停搏，灌注流量為15 mL/kg，灌注壓為90 cm H2O，每30 min灌注一次。停播期間各組心臟分別浸泡在相應(yīng)的25 ℃恒溫的停搏液中，120 min后以K-H液恢復(fù)灌流60 min。

1.2.2實驗分組及處理

Wistar大鼠50 只，隨機分為5 組：空白對照組（CON）、模型組（I/R）、SchB預(yù)處理組（530 μmol/L，I/R+SchB）、PI3K抑制劑組（I/R+SchB+LY）、AMPK抑制劑組（I/R+SchB+CC），每組10 只。空白對照組：在心臟正常跳動之后，用K-H液灌注心臟3 h，不作其他任何處理，其余各組離體心臟均平穩(wěn)后，停灌120 min，再灌注60 min。SchB處理：先用正常K-H液灌流心臟30 min，待各相關(guān)監(jiān)測指標穩(wěn)定后，分別對不同各組進行預(yù)處理。將LY294002 15 μmol/L和CC 1 μmol/L灌流20 min后加入SchB 50 μmol/L灌流20 min，再進行I/R過程。記錄觀察數(shù)據(jù)，采集相關(guān)實驗數(shù)據(jù)進行分析。

1.2.3心功能指標測定

參照文獻［7］方法，選取心率（heart rate，HR）、冠脈流速（coronary flow，CF）、LVEDP、左 室收縮壓最大上升/下降速率（+dp/dtmax和-dp/dtmax）作為心功能觀察指標。具體方法是將實驗檢測到的CF和壓力信號經(jīng)橋式放大器放大后傳導(dǎo)至數(shù)模轉(zhuǎn)換器，將數(shù)字信號轉(zhuǎn)換成形態(tài)圖像顯示在計算機上，后經(jīng)系統(tǒng)自帶軟件測量、采集和保存數(shù)據(jù)，供分析使用。

1.2.4心肌梗死面積的測定

再灌注60 min后，將心臟放入-20 ℃冰箱中速凍20 min左右便于切片，一般切成5～6 片，每隔2 mm切一片，將切片置于1% TTC染色液中，用錫箔紙蓋住后，放入37 ℃溫箱15～30 min，不時翻動切片，使其均勻接觸到染色液，置中性甲醛中固定24 h拍照，結(jié)合計算機多功能顯微圖像分析系統(tǒng)計算梗死面積。染色后效果：正常組織呈現(xiàn)紅色，缺血組織呈現(xiàn)白色（梗死）。

1.2.5心肌組織LDH活力測定

收集再灌注后5、15、30、60 min的灌流液檢測心臟灌流漏出液中LDH的活性。設(shè)置標準品和樣本孔，標準品孔加入不同濃度標準品50 mL，待測樣本孔先加樣本10 μL，再加樣本稀釋液40 μL。隨后標準品孔和樣本孔中加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的待檢抗體100 μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，恒溫箱孵育60 min，棄去液體，吸干。加洗滌液靜置1 min，甩去洗滌液，吸干，如此重復(fù)5 次。加入底物50 μL，37 ℃避光孵育15 min，加入終止液50 μL，15 min內(nèi)，在450 nm波長處測定各孔光密度（OD）值。

1.2.6免疫印跡法檢測心肌組織中Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表達

取藥物處理后的心肌組織，用組織裂解液抽提蛋白，將蛋白進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis，SDS-PAGE）、蛋白轉(zhuǎn)膜、免疫反應(yīng)、化學顯影和定影，比較各組差異進行分析。

1.3統(tǒng)計學分析

2　結(jié)果與分析

2.1各組心功能變化的比較

方差分析顯示，心功能指標在各組大鼠之間存在明顯統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。兩兩比較結(jié)果表明，表1中與CON組相比，I/R組HR在灌注不同時間內(nèi)減慢（P＜0.01），與I/R組比較，SchB預(yù)保護作用增加了HR（P＜0.01），與I/R+SchB組比較，I/R+SchB+CC組HR減慢（P＜0.01）；表2中，灌注后I/R組LVEDP升高，與I/R組相比，SchB預(yù)保護作用降低LVEDP，I/R+SchB+CC組中LVEDP比缺血前有所增加；表3、4中+dp/dtmax及-dp/dtmax經(jīng)缺血再灌注后均明顯降低，I/R+SchB組+dp/dtmax及-dp/dtmax與I/R組相比增加，I/R+SchB+CC組和I/R+SchB+LY組使+dp/dtmax及-dp/dtmax比I/R+SchB組有所下降；表5中，與CON組比較，I/R組CF明顯降低（P＜0.01），I/R+SchB組CF比I/R組有所提高，I/R+SchB+LY和I/R+SchB+CC組與I/R+SchB組相比不同程度降低CF；表6中，與CON組相比，各組的LDH活性均明顯升高（P＜0.01），與I/R組相比，I/R+SchB組的LDH活力降低，與I/R+SchB組相比，I/R+SchB+LY組和I/R+SchB+CC組的LDH活力升高。

表1　北五味子乙素對大鼠離體心臟心肌缺血再灌注損傷心率的影響Table 1 Effect of SchB on heart rate of isolated hearts from rats with myocardial ischemia and reperfusion

表1　北五味子乙素對大鼠離體心臟心肌缺血再灌注損傷心率的影響Table 1 Effect of SchB on heart rate of isolated hearts from rats with myocardial ischemia and reperfusion

注：#. 與CON組比較，差異顯著（P＜0.01）；※. 與I/R組比較，差異顯著（P＜0.01）；△. 與I/R+SchB組比較，差異顯著（P＜0.01）。下同。

組別 缺血前心率/（次/min）5 min15 min30 min60 min CON206±28192±28192±32196±40204±36 I/R194±2089±29#104±34#101±41#98±30#I/R+SchB183±24125±29 150±37※130±27※141±29※I/R+SchB+LY185±25113±26134±34112±28132±27 I/R+SchB+CC189±1997±21△143±27 100±26△126±23

表2　北五味子乙素對大鼠離體心臟心肌缺血再灌注損傷左心舒張末期壓力的影響TTaabbllee 22 EEffffeeccttss ooff SScchhBB oonn LLVVEEDDPP ooff iissoollaatteedd hheeaarrttss ffrroomm rraattss wwiitthh myocardial ischemia and reperfusion

表2　北五味子乙素對大鼠離體心臟心肌缺血再灌注損傷左心舒張末期壓力的影響TTaabbllee 22 EEffffeeccttss ooff SScchhBB oonn LLVVEEDDPP ooff iissoollaatteedd hheeaarrttss ffrroomm rraattss wwiitthh myocardial ischemia and reperfusion

組別缺血前LVEDP/mmHg 5 min15 min30 min60 min CON6.2±0.86.4±0.96.9±0.86.6±0.76.3±0.6 I/R6.2±0.7 10.3±0.8#11.9±1.2#12.5±1.1#13.9±1.2#I/R+SchB6.2±0.8 7.5±0.7※8.4±1.2※7.8±0.9※7.9±0.9※I/R+SchB+LY7.5±1.17.4±0.9 9.8±0.9△8.0±0.87.8±1.1 I/R+SchB+CC6.9±0.87.2±1.1 9.2±1.2△7.0±0.9△7.6±0.8

表3　北五味子乙素對大鼠離體心肌缺血再灌注后左室收縮壓最大上升速率的影響Table 2 Effects of SchB on LVEDP of isolated hearts from rats with myocardial ischemia and reperfusion （x

表3　北五味子乙素對大鼠離體心肌缺血再灌注后左室收縮壓最大上升速率的影響Table 2 Effects of SchB on LVEDP of isolated hearts from rats with myocardial ischemia and reperfusion （x

組別缺血前+dp/dtmax/（mmHg/s）5 min15 min30 min60 min CON5 012±1885 016±2215 120±2204 995±2234 895±230 I/R5 003±268 3 186±322#2 248±320#2 013±350#1 940±332#I/R+SchB5 026±308 4 018±332※3 746±303※3 215±327※3 024±328※I/R+SchB+LY5 045±3803 987±3213 550±3183 002±345 2 042±321△I/R+SchB+CC5 012±2784 001±318 2 780±305△2 500±234△2 237±315△

表4　北五味子乙素對大鼠離體心肌缺血再灌注后左室舒張壓最大下降速率的影響（Table 4 Effect of SchB on left ventricular diastolic blood pressure（-d /d max） in isolated rat hearts

表4　北五味子乙素對大鼠離體心肌缺血再灌注后左室舒張壓最大下降速率的影響（Table 4 Effect of SchB on left ventricular diastolic blood pressure（-d /d max） in isolated rat hearts

組別缺血前-dp/dtmax/（mmHg/s）5 min15 min30 min60 min CON4 560±188 4 572±245 4 512±220 4 589±223 4 563±230 I/R4 580±168 3 162±222#3 001±220#2 980±250#2 787±232#I/R+SchB4 566±208 3 518±232※3 646±203※3 715±227 3 924±228 I/R+SchB+LY4 578±280 3 687±221 3 550±218 3 002±245△2 742±221△I/R+SchB+CC4 596±278 3 535±218 3 280±205 3 200±234△3 037±215△

表5　北五味子乙素對大鼠離體心臟冠脈流速的影響TTaabbllee 55 EEffffeecctt ooff SScchhBB oonn ccoorroonnaarryy ffllooww rraattee （CCFF） iinn iissoollaatteedd rraatt hearrttss

表5　北五味子乙素對大鼠離體心臟冠脈流速的影響TTaabbllee 55 EEffffeecctt ooff SScchhBB oonn ccoorroonnaarryy ffllooww rraattee （CCFF） iinn iissoollaatteedd rraatt hearrttss

組別缺血前CF/（mL/min）5 min15 min 30 min60 min CON10.2±1.29.4±0.99.9±1.29.6±1.78.8±1.2 I/R10.4±0.74.3±0.8#4.9±1.2#3.5±1.1#3.9±1.2#I/R+SchB10.1±0.87.5±0.7※7.4±0.7※6.8±0.9※5.9±0.9※I/R+SchB+LY10.3±1.15.4±0.9△5.8±0.9△4.2±0.8△3.8±1.1△I/R+SchB+CC10.2±0.86.2±1.16.2±1.2△5.4±0.94.6±0.8△

表6　北五味子乙素對大鼠離體再灌注灌流液中乳酸脫氫酶活性的影響Table 6 Effect of SchB on LDH activity in isolated rat hearts

表6　北五味子乙素對大鼠離體再灌注灌流液中乳酸脫氫酶活性的影響Table 6 Effect of SchB on LDH activity in isolated rat hearts

組別缺血前LDH活力/（U/L）5 min15 min30 min60 min CON12.34±4.87 14.21±4.81 12.15±4.25 12.24±5.1714.37±5.27 I/R11.24±2.62 58.02±7.94#67.04±8.45#71.01±14.11#98.73±10.21#I/R+SchB11.43±2.45 35.54±5.95※48.28±7.78※43.42±8.72※44.26±5.95※I/R+SchB+LY 11.26±3.57 53.78±7.65△63.41±10.4868.02±9.84△82.35±10.77△I/R+SchB+CC 12.34±4.97 48.36±6.14△60.14±7.65△60.32±8.65△80.45±8.34△

2.2各組心肌梗死面積（infarct size，IS）

圖1　實驗各組心肌梗塞面積的變化Fig. 1 Change in myocardial infarction size in control and experimental groups

由圖1可知，與CON組相比，I/R組IS顯著增加（P＜0.01），經(jīng)SchB預(yù)保護作用后，與I/R組相比，IS明顯減輕（P＜0.01）；與I/R+SchB組比較，I/R+SchB+LY組與I/R+SchB+CC組IS均增加（P＜0.01）。

2.3免疫印跡檢測各組蛋白表達變化

由圖2、3可知，與CON組相比，I/R組p-Akt和p-GSK-3β蛋白表達雖有增加，但無統(tǒng)計學差異。與I/R組比較，I/R+SchB組的p-Akt和p-GSK-3β表達明顯增加（P＜0.01）；與I/R+SchB組相比，I/R+ SchB+LY組與I/R+SchB+CC組p-Akt和p-GSK-3β蛋白表達明顯減少（P＜0.01）。各組總Akt和總GSK-3β均無明顯改變。

圖2　免疫印跡檢測實驗各組p-Akt蛋白的表達Fig. 2 The expression of p-Akt and total Akt protein in each myocardial tissue examined by Western blotting

圖3　免疫印跡檢測實驗各組p-GSKK--33β蛋白的表達（Fig. 3 The expression of p-GSK-3β and total GSK-3β protein in each myocardial tissue examined by Western blotting

3　討 論

缺血/再灌注時，在恢復(fù)血流的不同時間里，會導(dǎo)致心室肌收縮和舒張功能發(fā)生障礙，表現(xiàn)為心室肌靜息張力的增加和發(fā)展張力的下降，LVEDP升高；LVEDP下降以及心室內(nèi)壓最大變化速率（左室收縮壓最大上升速率（+dp/dtmax））降低［9］。心功能是反映I/R損傷嚴重程度的指標，LVDP（上升速率（+dp/dtmax））反映左心室的收縮功能，左室收縮壓最大下降速率（-dp/dtmax）反映左心室的舒張功能，當心肌損傷程度越重，梗死面積越大，上述水平越低。心肌I/R時心肌細胞膜損傷，破壞了膜的完整性，導(dǎo)致膜通透性增加，大量的心肌酶外漏。心肌酶LDH被認為是心肌細胞受損程度的重要標志酶［10］。本實驗結(jié)果表明，SchB可改善心肌功能，減少梗死面積，抑制HR、CF、±dp/dtmax的下降，降低LVEDP，抑制I/R大鼠心肌組織中LDH活性的升高，因此SchB可以減少I/R對心肌細胞的破壞作用，保護心肌組織。

PI3K/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）/Akt信號通路作為細胞內(nèi)重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，通過影響下游多種效應(yīng)分子的活化狀態(tài)，在細胞內(nèi)發(fā)揮抗凋亡、促細胞生存等功能［11-15］。GSK-3β是蛋白激酶B的下游信號中主要的效應(yīng)分子，PKB位于PI3K的下游，PI3K/Akt信號通路通過調(diào)控GSK-3β的活性，減少線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mitoc hondrial permeability transition pore，mPTP）的開放，發(fā)揮保護心肌功能［16-20］。諸多研究已證實PI3K/Akt/ GSK-3β信號途徑在缺氧復(fù)氧、缺血再灌注損傷中發(fā)揮重要作用，表現(xiàn)為心肌梗死范圍減少、改善心臟收縮舒張功能、抑制細胞調(diào)亡。許多刺激因子通過PI3K/Akt傳導(dǎo)途徑的介導(dǎo)促使GSK-3β磷酸化，從而抑制GSK-3β的生物活性。GSK-3β的磷酸化能減輕心肌缺氧復(fù)氧損傷、減少細胞調(diào)亡，但詳細的機制尚未明確。

AMPK不僅是細胞內(nèi)能量代謝的重要調(diào)控因子，而且能通過抗氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、抑制凋亡、調(diào)節(jié)自噬、抗炎、參與缺血預(yù)處理或缺血后處理等心肌保護效應(yīng)減輕心肌缺血再灌注損傷，AMPK在防治心肌缺血再灌注損傷中發(fā)揮重要作用［21-25］。

與空白對照組相比，I/R組p-Akt和p-GSK-3β表達增加，但無統(tǒng)計學意義，說明I/R能夠啟動PI3K/Akt及下游的GSK-3β信號通路。本實驗體外I/R之前給予SchB預(yù)處理，總Akt和總GSK-3β蛋白在各組之間無明顯改變，心肌組織中p-Akt、p-GSK-3β蛋白表達增加，較I/R組比較有顯著差異（P＜0.01），說明SchB預(yù)處理激活了PI3K/Akt/GSK-3β通路和AMPK通路，減輕了心肌細胞調(diào)亡，減少心肌梗死范圍，心肌功能得到保護。預(yù)先給予PI3K的抑制劑LY294002阻斷PI3K/Akt/GSK-3β通路，給予AMPK抑制劑復(fù)合物C阻斷AMPK通路后，細胞調(diào)亡增加，心肌梗死面積加大，心肌組織中p-Akt、p-GSK-3β蛋白表達減少，與I/R+SchB組比較有顯著差異（P＜0.01），與I/R組比較無差異，即阻斷PI3K/Akt/GSK-3β通路和AMPK通路后SchB的保護作用消失，因此可以推斷SchB是通過同時激活PI3K/Akt/GSK-3β和AMPK兩條并行通路發(fā)揮對I/R心肌的保護作用，從而減輕心肌缺血再灌注期間的損傷。

［1］ 高夏青， 薛凌. 心肌缺血再灌注損傷相關(guān)細胞因子及細胞通路研究進展［J］. 中國動脈硬化雜志， 2013， 21（6）: 562-566.

［2］ 陳輝， 鄭敏， 葉華山. 心肌缺血再灌注損傷機制及治療研究進展［J］.湖北科技學院學報（醫(yī)學版）， 2015， 29（3）: 262-265.

［3］ 劉玲玲， 顏水進， 潘閩， 等. CD137與心肌缺血-再灌注損傷［J］. 南通大學學報（醫(yī)學版）， 2014（6）: 70-74.

［4］ 劉春偉， 叢洪良， 于雪芳， 等. PI3K-Akt， mito-KATP通道及mPTP在阿托伐他汀后處理減輕人鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用［J］. 天津醫(yī)藥， 2015， 43（1）: 49-53. DOI:10.3969/ j.issn.0253-9896.2015.01.012.

［5］ 于立明， 楊陽， 劉麗君， 等. 褪黑素減輕心肌缺血/再灌注損傷的作用及機制［J］. 心臟雜志， 2015， 27（3）: 255-258.

［6］ 孫瀟， 姜恩平， 陳建光. 北五味子總木脂素對高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其機制［J］. 吉林大學學報（醫(yī)學版），2009， 35（2）: 276-280.

［7］ WILLIAMS I A， XIAO X H， JU Y K， et al. The rise of ［Na+］ during ischemia and reperfusion in the rat heart- underlying mechanisms［J］. European Journal of Physiology， 2007， 454（6）: 903-912.

［8］ 張中亞， 李剛， 磚席芳， 等. 黃蘇試預(yù)處理對缺血再灌注大鼠心功能和心肌細胞游離鈣的影響［J］. 微循環(huán)學雜志， 2015， 25（1）: 18-22. DOI:10.3969/j.issn.1005-1740.2015.01.005.

［9］ 高嘯巍， 劉苑， 楊智承， 等. 毛茛總苷對大鼠離體心臟缺血&再灌注損傷的保護作用［J］. 中藥材， 2014， 37（8）: 1429-1433. DOI:10.13863/ j.issn1001-4454.2014.08.030.

［10］ 段忠心， 劉興奎， 喻田. 二氮嗪后處理對離體大鼠心功能及線粒體心磷脂的影響［J］. 中國病理生理雜志， 2015， 31（5）: 812-816. DOI:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.05.008.

［11］ 楊述亮， 韓燕， 李占清. PI3K/AKT/GSK 3β信號通路與心肌缺血/再灌注損傷的相關(guān)性研究［J］. 醫(yī)學綜述， 2015， 21（9）: 1571-1574. DOI:10.3969/j.issn.1006-2084.2015.09.013.

［12］ 蔡懷秋， 張改改， 尹新華. AMPK與心肌缺血氣再灌注損傷［J］. 國際心血管病雜志， 2013， 40（1）: 12-15. DOI:10.3969/j.issn.1673-6583.2013.01.005.

［13］ 武怡， 王雨稼， 韓向東. 中藥抗心肌細胞缺血再灌注損傷相關(guān)信號通路的實驗研究進展［J］. 上海中醫(yī)藥大學學報， 2015， 29（2）: 84-86.

［14］ 韓軍， 宣佳利， 胡浩然， 等. 金絲桃苷預(yù)處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷作用與PI3K/Akt信號通路的關(guān)系［J］. 中國中藥雜志， 2015，40（1）: 118-123. DOI:10.4268/cjcmm20150123.

［15］ 劉曉敏. 人參皂普Rb3及Rb2組合物對大鼠心肌缺血再灌汪損傷的保護作用及機制研究［D］. 長春: 吉林大學， 2014: 11.

［16］ XIE X， LI W， LAN T， et al. Berberine ameliorates hyperglycemia in alloxan-induced diabetic C57B1/6 mice through activation of Akt signaling pathway［J］. Endocrine Journal， 2011， 58（9）: 761-768. DOI:10.1155/2014/798093.

［17］ ANSLEY D M， WANG B. Oxidative stress and myocardial injury in the diabetic heart［J］. Journal of Pathology， 2013， 229（2）: 232-241. DOI:10.1002/path.4113.

［18］ HU J， CHAI Y， WANG Y， et al. PI3K p55γ promoter activity enhancement is involved in the anti-apoptotic effect of berberine against cerebral ischemia-reperfusion［J］. European Journal of Pharmacology，2012， 674（2/3）: 132-142. DOI:10.1016/j.ejphar.2011.11.014.

［19］ 薛凌. 丹酚酸B通過PI3K-Akt信號通路干預(yù)大鼠心肌缺血再灌注損傷的實驗研究［D］. 濟南: 山東大學， 2014: 10.

［20］ 張靜， 馬翠麗， 土志國. 黃茂甲苷對大鼠心肌局部缺血再灌注損傷的改善作用及其對PI3K/Akt/mTOR信號通路的影響［J］. 吉林大學學報， 2014， 40（5）: 991-997. DOI:10.13481/j.1671-587x.20140517.

［21］ 李艷， 陳震. PI3K-Akt信號通路及β2-AR蛋白在外源性硫化氫后處理減輕大鼠離體心肌缺血再灌注損傷中的作用［J］. 中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志， 2014， 16（9）: 1-5. DOI:10.3969/j.issn.1672-9463.2014.09.001.

［22］ 陳克克. 小粟堿通過激活A(yù)MPK及PI3K/Akt減輕糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注損傷［D］. 西安: 第四軍醫(yī)大學， 2014: 5.

［23］ FROHLICH G M， MEIER P， WHITE S K， et al. Myocardial reperfusion injury: looking beyond primary PCI［J］. European Journal of Heart， 2013， 34（23）: 1714-1722. DOI:10.1093/eurheartj/eht090.

［24］ SONY G， OUYANG G， BAO S. The activation of Akt/PKB signaling pathway and cell survival［J］. Journal of Cell Molecular Medicine，2005， 9（1）: 59-71. DOI:10.1111/j.1582-4934.2005.tb00337.x.

［25］ 何東偉， 劉新偉， 龐勇， 等. 白藜蘆醇對人鼠缺血再灌注心肌細胞凋亡的抑制作用與PI3K-Akt信號通路的關(guān)系［J］. 中國中藥雜志， 2012，37（15）: 2323-2326. DOI:10.4268/cjcmm20121529.

Protective Effect of Schisandrin B on the Isolated Rat Heart against Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury and Its Molecular Mechanism

SUN Hongxia， CHEN Jianguang*
（Pharmaceutical College， Beihua University， Jilin 132013， China）

Objective: To observe the effect of schisandrin B （SchB） on cardiac function， infarct size， lactate dehydrogenase and related protein expression in the isolated heart from rats with myocardial ischemia/reperfusion （I/R） injury and consequently to explore its protective effect against I/R injury and the underlying molecular mechanism. Methods: Fifty Wistar rats were randomly divided into five groups: control group （Control）， ischemia/reperfusion group （I/R） and SchB preconditioning group （SchB）， PI3K inhibitor group （I/R + SchB + LY294002）， and AMPK inhibitor group （I/R + SchB + Compound C）. The Langendorff method was used to establish the isolated rat heart model of I/R injury， ischemia for 2 h， reperfusion for 5， 15， 30 and 60 min respectively. The +dp/dtmax， -dp/dtmax， left ventricular end-diastolic pressure（LVEDP）， coronary flow （CF）， heart rate （HR） and LDH activity in perfusion fluids were observed during I/R period. The myocardial infarct area was measured with TTC staining and myocardial total Akt， phosphorylation Akt， total GSK-3β and phosphorylation GSK-3β protein expression were evaluated by the Western blotting technique. Results: SchB significantly improved the myocardial damage caused by I/R injury， reduced infarct size， and increased the expression of p-Akt and p-GSK-3β. Conclusion: SchB has protective effects against I/R damage in isolated hearts from rats， which may be related to the activation of the AMPK and PI3K/Akt signaling pathways.

schisandrin B； myocardial ischemia/reperfusion； injury； molecular mechanism

10.7506/spkx1002-6630-201615040

R285.5

A

1002-6630（2016）15-0237-05

2015-09-18

吉林省衛(wèi)生計生科研計劃項目（20142084）

孫紅霞（1965—），女，教授，博士，主要從事心血管藥理學研究。E-mail：sunhongxiajl@126.com

陳建光（1962—），男，教授，博士，主要從事中藥開發(fā)及藥理學研究。E-mail：chenjg118@sohu.com

10.7506/spkx1002-6630-201615040. http://www.spkx.net.cn

引文格式：