蓮子紅衣多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)表征

高 航，高延芬，徐 虹，*

（1.北京工商大學(xué) 北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心，北京食品營養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心，北京 100048；2.深圳市農(nóng)科集團(tuán)有限公司，廣東 深圳 518040）

蓮子紅衣多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)表征

高 航1，高延芬2，徐 虹1，*

（1.北京工商大學(xué) 北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心，北京食品營養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心，北京 100048；2.深圳市農(nóng)科集團(tuán)有限公司，廣東 深圳 518040）

以蓮子紅衣為實驗對象，將其中的多糖進(jìn)行分離、純化并表征結(jié)構(gòu)。采用酶提醇析法提取蓮子紅衣粗多糖，選擇DEAE-C陰離子交換樹脂和Sephadex G-25凝膠柱層析，從蓮子紅衣粗多糖中分離純化得到中性多糖和酸性多糖兩種組分。經(jīng)凝膠滲透色譜測定，中性和酸性多糖的重均分子質(zhì)量分別為3.78×104D和4.94×104D，純度分別為91.16%和90.24%。中性多糖組分由葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖4 種單糖組成；酸性多糖組分由葡萄糖、木糖、半乳糖、巖藻糖、阿拉伯糖5 種單糖組成。紅外光譜證明兩種多糖中均含有糖類特征吸收峰，且為α構(gòu)型的吡喃型多糖。核磁共振氫譜檢測又進(jìn)一步證實了兩種多糖均為α構(gòu)型。

蓮子紅衣；多糖；分離純化；結(jié)構(gòu)表征

高航， 高延芬， 徐虹. 蓮子紅衣多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)表征［J］. 食品科學(xué)， 2016， 37（15）: 94-99. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615016. http://www.spkx.net.cn

GAO Hang， GAO Yanfen， XU Hong. Separation， purification and structural characteristics of polysaccharides from red skin of lotus seeds［J］. Food Science， 2016， 37（15）: 94-99. （in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615016. http://www.spkx.net.cn

蓮子又名水芝丹，屬睡蓮科蓮屬（Nympheaceae nelumbo Adans），是水生蔬菜栽培中的特種挻水宿根經(jīng)濟(jì)植物。蓮子是中國傳統(tǒng)的滋補(bǔ)佳品，具有多種保健功效［1-2］。蓮子的加工通常經(jīng)過干燥、分級、去殼、去皮心等工序，一般采用手工和機(jī)械磨皮兩種方式，但是在加工過程中會產(chǎn)生大量蓮子殼、蓮子紅衣等副產(chǎn)物［3］。經(jīng)測定，蓮子紅衣中營養(yǎng)成分和活性物質(zhì)的含量較高［3-6］，但并未得到有效利用，造成了資源浪費(fèi)及環(huán)境污染。多糖是由單糖聚合形成的糖類，是自然界中分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜的一類高分子化合物，廣泛存在于動物和植物中，它是維持生命機(jī)體正常運(yùn)轉(zhuǎn)的物質(zhì)之一。植物、海洋生物及菌類等來源的多糖已作為具有生物活性的天然產(chǎn)物中的一個重要類型出現(xiàn)，各種多糖所具有的抗腫瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已相繼被發(fā)現(xiàn)［7-9］。據(jù)報道，香菇多糖、苦瓜多糖、茶多糖等天然植物多糖表現(xiàn)出了很好的功能性［10-12］，具有極高的開發(fā)前景和應(yīng)用價值。然而到目前為止，雖然國內(nèi)外對多糖的研究日益重視，但就其研究的層次和水平來說，與蛋白質(zhì)和核酸相比還有很大的差距。因此，對多糖結(jié)構(gòu)的深入研究將為探討發(fā)展多糖類藥物及功能性食品奠定基礎(chǔ)。

本研究擬以蓮子紅衣為原材料，提取蓮子紅衣多糖，分離純化后對其分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，以為日后深入探索植物多糖的分子修飾、構(gòu)效關(guān)系以及功能性食品的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)，同時可為蓮子紅衣的開發(fā)利用提供科學(xué)指導(dǎo)，使蓮子加工副產(chǎn)物得到充分利用，從而減少資源浪費(fèi)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

蓮子紅衣 湖南三湘貿(mào)易有限公司。

DEAE-C 上海金穗生物科技有限公司；Sephadex G-25 美國法瑪西亞公司；透析袋 美國GE公司；α-淀粉酶 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；溴化鉀、單糖標(biāo)準(zhǔn)品 上海源葉生物科技公司；苯酚 汕頭市西隴化工廠有限公司；硫酸、鹽酸、乙醇 北京化工廠；氫氧化鈉 天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司；三氯乙酸國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；所有試劑均為分析純。

1.2儀器與設(shè)備

R-3型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 瑞士Büchi公司；FreeZone-12L美國Labconco公司；層析柱（50 cm×2.6 cm、120 cm×1.6 cm）、DBS-100電腦全自動部分收集器上海滬西分析儀器廠有限公司；Synergy H1全功能酶標(biāo)儀 美國BioTek公司；高效凝膠色譜分析系統(tǒng)日本島津公司；DAWN HELEOS-II 型激光多角度散射檢測器、Optilab rex示差檢測器 美國Wyatt公司；Shodex SB-806M高效凝膠色譜柱 日本Shodex公司；Bruker AV 600核磁共振儀 德國Bruker公司。

1.3方法

1.3.1蓮子紅衣多糖的提取

稱取一定量過80 目篩的蓮子紅衣粉，按一定比例加入蒸餾水，充分?jǐn)嚢韬笥诤銣厮″佒屑訜?。待加熱?5 ℃時按0.1 mg/g比例加入α-淀粉酶酶解（即每克蓮子紅衣粉加入0.1 g α-淀粉酶），酶解一定時間后，用電磁爐煮沸10 min，以終止酶繼續(xù)反應(yīng)，冷卻后抽濾，取濾液加入6%三氯乙酸，在4 000 r/min的條件下離心15 min。取上清液加入5 倍體積的95%乙醇沉降過夜。次日，在4 000 r/min條件下離心15 min，取沉淀物先在-20 ℃預(yù)凍，之后冷凍干燥48 h，即得蓮子紅衣粗多糖。

1.3.2DEAE-C樹脂的預(yù)處理

稱取所需DEAE-C，用蒸餾水浸泡過夜，每5 h換水一次，且去除上層細(xì)小漂浮物，去離子水洗至泡沫很少時為止，濾干，先用0.05 mol/L HCl溶液浸泡過夜，用無離子水漂洗，再改用0.05 mol/L NaOH溶液浸泡過夜，用無離子水洗凈，pH試紙檢測中性即可使用。

1.3.3蓮子紅衣中性和酸性多糖的分離

DEAE-C預(yù)處理后上柱。配制8 mg/mL的粗多糖溶液100 mL，濾過0.45 μm濾膜，以2 mL/min速率進(jìn)樣，待上樣完畢后，先用去離子水洗脫，使未與陰離子交換劑結(jié)合部分流出，即得到中性多糖；后改為0.1 mol/L NaCl 溶液洗脫，使與陰離子交換劑結(jié)合部分流出，得到酸性多糖。此后，再分別進(jìn)行0.3、0.5、0.7、0.9 mol/L NaCl梯度洗脫，但是幾乎不再有峰出現(xiàn)，當(dāng)采用0.1 mol/L的NaOH洗脫時，其對DEAE-C填料的穩(wěn)定性有影響。因此，僅用0.1 mol/L NaCl溶液進(jìn)行洗脫。每管洗脫液取200 μL，加入9%的苯酚溶液和硫酸（體積比1∶5），沸水浴20 min，于490 nm波長處測吸光度。繪制管數(shù)與吸光度曲線，并按峰型合并陽性部分。

1.3.4蓮子紅衣中性多糖的純化

采用Sephadex G-25層析柱純化，根據(jù)多糖分子質(zhì)量的不同，可對蓮子紅衣中性多糖進(jìn)一步純化。首先，分別進(jìn)行流速和上樣量的最佳條件選定，然后根據(jù)最佳純化條件進(jìn)行純化。將中性多糖溶于1 mL去離子水中，得到30 mg/mL的多糖溶液，用滴管小心加入層析柱中，用去離子水洗脫，流速為0.25 mL/min，同時每5 min收集1 管流出液，根據(jù)苯酚-硫酸法繪制洗脫曲線，并按峰型合并洗脫液。

1.3.5純度及重均分子質(zhì)量的檢測

采用最佳的洗脫流速和上樣量進(jìn)行分離純化，隔管通過苯酚-硫酸法測定吸光度并繪制洗脫曲線，按照峰型合并陽性部分，冷凍干燥即得到純化后的多糖組分。采用凝膠色譜示差檢測器和激光多角度散射器檢測多糖的純度和重均分子質(zhì)量。

凝膠滲透色譜條件：色譜柱為Shodex SB-806M（7.8 mm×300 mm）；流動相為0.1 mol/L硝酸鈉溶液；流速為0.5 mL/min；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣體積為200 ?L；檢測器為示差器及激光多角度散射檢測器。

1.3.6蓮子紅衣多糖的單糖組成分析［13-15］

分別移取7 種標(biāo)準(zhǔn)單糖溶液與NaOH溶液混合均勻。取混合后的溶液100 μL于5 mL的具塞試管中，加0.5 mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液漩渦式混勻，在75 ℃的恒溫鼓風(fēng)干燥箱中反應(yīng)2 h，取出后冷卻至室溫。隨后加入0.3 mol/L的鹽酸溶液10 mL中和，蒸干。加入氯仿和水各2 mL，混合搖勻，待分層后棄去氯仿層，重復(fù)萃取3 次后即可進(jìn)樣。

移取100 μL質(zhì)量濃度為2 mg/mL的多糖樣品，加入100 μL三氟乙酸，充氮?dú)夥夤?，在恒溫鼓風(fēng)干燥箱中110 ℃水解2 h，冷卻至室溫后加200 μL甲醇溶液后旋轉(zhuǎn)蒸干，重復(fù)操作以去除三氟乙酸，之后加入NaOH溶液將殘渣充分溶解，然后再加入100 μL的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液，在恒溫鼓風(fēng)干燥箱中70 ℃反應(yīng)2 h，冷卻后完成中和、萃取操作即可進(jìn)樣。

高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）檢測條件：Shodex SB-230色譜柱（8.0 mm×300 mm）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；流動相A：高純水，流動相B：乙腈，流動相A與B（83∶17，V/V）；進(jìn)樣量：10 μL。

1.3.7蓮子紅衣多糖的紅外光譜分析

分別稱取分離純化后得到的中性多糖及酸性多糖，各按質(zhì)量比1∶100的比例與干燥的KBr混勻，在瑪瑙研缽中研磨5～10 min?；旌蠅耗?，測定波數(shù)在4 000～400 cm-1的紅外光譜，實驗中均采用干燥的KBr作為背景。

1.3.8蓮子紅衣多糖的核磁共振氫譜分析

將一定量的兩個多糖純品分別溶于D2O中，在293 K溫度下進(jìn)行600 Hz的核磁共振儀分析。

2　結(jié)果與分析

2.1蓮子紅衣中性和酸性多糖的分離結(jié)果

圖1　蓮子紅衣中性多糖（Ⅰ）和酸性多糖（Ⅱ）在DEAEE--CC樹脂上的洗脫曲線Fig. 1 Elution curve of water-soluble crude polysaccharides on DEAE-C column

按照1.3.3節(jié)方法將蓮子紅衣粗多糖經(jīng)DEAE-C離子交換層析分離后，采用苯酚-硫酸法隔管測定糖含量并作與所對應(yīng)管號的曲線圖。由圖1可知，7～27 管內(nèi)的多糖是未與陰離子交換劑結(jié)合的部分，經(jīng)合并，凍干，為中性多糖，得到28 mg；59～75 管為0.1 mol/L NaCl洗脫部分，經(jīng)合并，攪拌透析48 h，中間換水一次，凍干，為酸性多糖，得到25 mg，所得中性多糖的提取率為13.56%，酸性多糖的提取率為8.49%。

2.2凝膠柱層析的純化結(jié)果

2.2.1洗脫流速的選擇

以葡聚糖凝膠Sephadex G-25為分離介質(zhì)，上樣1 mL，在30 mg/mL恒定上樣量條件下，選擇0.1、0.25、0.4 mL/min這3 種流速以確定純化中性多糖的最佳分離條件。從圖2可以看出，在選定的3 個流速下均能使陽性部分分離開來。但在0.10 mL/min的流速下，分離時間較長；0.25 mL/min能將時間縮短近一半，且分離效果較好；0.40 mL/min流速下，可在較短時間內(nèi)完成分離，但是陽性部分出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。因此最終選擇流速為0.25 mL/min進(jìn)行純化。

圖2　不同流速的洗脫曲線Fig. 2 Elution curves of the neutral polysaccharide at different flow rates

2.2.2上樣量的選擇

以葡聚糖凝膠Sephadex G-25為分離介質(zhì)，在0.25 mL/min的恒定流速下，選擇15、30、45 mg/mL這3 種上樣量以確定最佳分離條件。由圖3可知，3 種上樣量均可使中性多糖完全分離，但當(dāng)上樣量為15 mg/mL時，為達(dá)到目標(biāo)樣品量，所需純化次數(shù)較多，耗時較長。當(dāng)上樣量為45 mg/mL時，與其他峰間隔較小，且有輕微的拖尾現(xiàn)象。為保證實驗重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性，最終選定30 mg/mL為最佳上樣量。

圖3　不同上樣量的洗脫曲線Fig. 3 Elution curves of the neutral polysaccharide at different sample loading amounts

2.3高效凝膠柱層析的純化結(jié)果

圖4　蓮子紅衣中性多糖（a）和酸性多糖（b）的高效滲透凝膠圖譜Fig. 4 GPC chromatograms of the neutral （a） and acidic （b） polysaccharides

如圖4可知，曲線Ⅰ顯示的是DAWN HELEOS-Ⅱ型激光多角度散射檢測器的信號，測定的是各個組分分子質(zhì)量的大??；曲線Ⅱ顯示的是Optilab rex示差檢測器的信號，測定各個組分質(zhì)量濃度。中性多糖（圖4a）包含兩種分子質(zhì)量組分，保留時間分別為15 min和20 min。但從曲線Ⅱ得知，保留時間為15 min的物質(zhì)，分子質(zhì)量較大，但含量極少；而保留時間為20 min的物質(zhì)，含量極高。酸性多糖（圖4b）中也存在大分子物質(zhì)，但含量較低。此外，通過示差信號顯示出的兩種多糖的圖譜分別為單一對稱峰，進(jìn)一步說明了均一性良好。通過曲線積分面積分別計算得出中性及酸性多糖的純度分別為91.16%和90.24%。由激光信號測得重均分子質(zhì)量分別為3.78×104D和4.94×104D，分散系數(shù)為1.12，均一性較好。

2.4蓮子紅衣中性和酸性多糖的單糖組成分析

從化學(xué)結(jié)構(gòu)上分析，酸性多糖鏈除了含酸性基團(tuán)外，可能還含有中性單糖或堿性單糖。至于酸性多糖中酸性基團(tuán)和比例或者其酸度目前都沒有明確規(guī)定，文獻(xiàn)［16］中一般把含有酸性基團(tuán)的多糖都稱為酸性多糖。由圖5及表1可知，酸性多糖較中性多糖來說，成分較為復(fù)雜，而酸性多糖中含有的阿拉伯糖等也均為酸性糖，中性多糖中則以葡萄糖為主，而酸性多糖以木糖為主，同時葡萄糖所占比例也較高。

圖5　蓮子紅衣中性多糖（a）和酸性多糖（b）的單糖組成色譜圖Fig. 5 Monosaccharide composition analysis of the neutral （a） and acidic （b） polysaccharides

表1　蓮子紅衣中性和酸性多糖的單糖組成及含量Table 1 Monosaccharide compositions of the neutral and acidic polysaccharidesrides mg/g

2.5蓮子紅衣中性和酸性多糖的紅外光譜分析

圖6　蓮子紅衣中性多糖（a）和酸性多糖（b）的紅外光譜Fig. 6 Infrared absorption spectra of the neutral （a） and acidic （b）polysaccharides

由圖6可知，3 300 cm-1左右出現(xiàn)的寬峰為糖類物質(zhì)O—H的伸縮振動（γOH）；2 900 cm-1左右出現(xiàn)的峰為烷基中C—H鍵的伸縮振動（γCH），1 360 cm-1附近出現(xiàn)C—H的彎曲振動峰（δCH）為旁證，而酸性多糖中未出現(xiàn)該峰，說明不存在亞甲基或甲基；在1 400～1 200 cm-1

范圍內(nèi)所看到的不太尖的吸收峰1 361.23 cm-1是C—H的變角振動；1 640 cm-1附近的峰為酯羰基中C—O鍵的伸縮振動峰（γCO）；1 148、1 076、997 cm-1左右出現(xiàn)了較強(qiáng)的3 個吸收峰，在1 100～1 000 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)3 個強(qiáng)峰為吡喃環(huán)的特征吸收峰，其中1 077 cm-1和997 cm-1為吡喃糖環(huán)的醚鍵（C—O—C）伸縮振動和羥基（C—O—H）的吸收峰；928 cm-1附近的吸收峰也進(jìn)一步證實了吡喃糖中糖苷鍵C—O—C為非對稱環(huán)；紅外光譜在890 cm-1附近無吸收峰，而在848 cm-1有吸收峰，這也是存在α-D-吡喃糖的旁證。另外，在875 cm-1和810 cm-1無吸收峰，表明不含甘露吡喃糖和半乳吡喃糖。而759 cm-1的吸收峰也再次證實了其結(jié)構(gòu)中含有吡喃糖。

2.6蓮子紅衣中性和酸性多糖的核磁共振氫譜分析

圖7　蓮子紅衣中性多糖（a）和酸性多糖（b）的核磁共振氫譜Fig. 71H-NMR spectra of the neutral （a） and acidic （b） polysaccharides

核磁共振波譜法是利用自旋原子核在外磁場作用下的核自旋能級間躍遷所吸收的電磁波譜來研究化合物結(jié)構(gòu)與組成的分析方法。核磁共振氫譜主要解決多糖結(jié)構(gòu)中糖苷鍵構(gòu)型及結(jié)構(gòu)中氫個數(shù)比的問題，但是由于非異頭質(zhì)子化學(xué)位移δ相近，且有部分重疊現(xiàn)象，使多數(shù)質(zhì)子信號較難解析。一般來說，α構(gòu)型糖苷的異頭質(zhì)子的化學(xué)位移δ大于5.0，而β構(gòu)型的異頭質(zhì)子的化學(xué)位移δ小于5.0［17］，由圖7可知，中性和酸性多糖組分為α構(gòu)型。

3　討 論

本實驗采用的多糖分離純化方法簡單可靠，中性多糖提取率為13.56%，酸性多糖提取率為8.49%。由于中性及酸性多糖具有不同的功能性，因而眾多學(xué)者將其進(jìn)行分離純化。芮海云等［18］研究顯示白芨中性多糖能有效清除羥自由基（·OH），并呈量效關(guān)系；對D-半乳糖所致小鼠體質(zhì)量負(fù)增長和體內(nèi)超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性下降有顯著抑制作用。劉曉宇［19］的研究顯示，經(jīng)硫酸化和羧甲基化修飾的黃藥子中性多糖可以有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。酸性多糖由于含有糖醛酸這一特殊結(jié)構(gòu)，使得其具有特殊生理活性。另有研究顯示，酸性多糖具有明顯的抗炎活性、抗氧化活性等，且隨其糖醛酸含量的增加逐漸增強(qiáng)［20-21］。

對于多糖的純化步驟，木瓜蛋白酶-Sevag法效果最好，反應(yīng)較溫和，可同時實現(xiàn)高蛋白脫除率和低多糖損失率的目標(biāo)［18］，然而受到木瓜蛋白酶價格昂貴等多種因素影響，三氯乙酸法目前也成為脫除多糖中蛋白的常用方法［19］。本研究采用了DEAE-C柱層析將中性和酸性多糖分離出來，雖然純度有了一定的提高，但是仍存在一些雜質(zhì)。因而又使用葡聚糖凝膠Sephadex G-25凝膠柱進(jìn)行純化精制，純度可達(dá)到較高的水平。

多糖的結(jié)構(gòu)檢測手段很多，本研究主要采用凝膠滲透色譜的方法分析了蓮子紅衣多糖的分子質(zhì)量及純度，通過本實驗方法得到的多糖均一性較好；紅外光譜及核磁共振分析了其糖鍵結(jié)構(gòu)，表明蓮子紅衣多糖具有糖類物質(zhì)的特征吸收峰且為α構(gòu)型；采用衍生的方法分析了其單糖組成，為蓮子紅衣多糖產(chǎn)品的開發(fā)和利用提供了理論依據(jù)。

目前對于多糖的研究多集中在其特征官能團(tuán)和單糖組成方面，但是對于多糖糖苷鍵構(gòu)型、連接方式等的研究上還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠［20］，這一原因主要是由于分析以上兩種結(jié)構(gòu)的步驟繁瑣，并且多糖甲基化方法分析糖苷鍵構(gòu)型中，多糖不能完全甲基化也是研究中的一個瓶頸問題。此外，受到不同研究者選用的原料不同、分離提取方法不同等因素的影響，得到的單糖組成及含量會有一定的差異［21-22］。對于多糖的純度檢測，由于目前尚未找到合適的標(biāo)準(zhǔn)品，因此通過各種檢測方法得到的多糖純度仍然是較為粗略的結(jié)果，日后也期待找到更加方便、重復(fù)性更高的方法以解決多糖的結(jié)構(gòu)解析。

［1］ 吳芳彤， 肖貴平. 蓮子的營養(yǎng)保健價值及其開發(fā)應(yīng)用［J］. 亞熱帶農(nóng)業(yè)研究， 2013， 8（4）: 274-278.

［2］ 李卓瓦. 蓮子的營養(yǎng)價值及加工利用［J］. 農(nóng)產(chǎn)品加工（學(xué)刊），2008（6）: 42-43. DOI:10.3969/j.issn.1671-9646-B.2008.06.013.

［3］ 曹楊， 徐虹， 王靜， 等. 蓮天然產(chǎn)物及其生物活性研究進(jìn)展［J］. 食品工業(yè)科技， 2012， 33（8）: 402-405.

［4］ 徐虹， 朱雨薇， 曹楊， 等. 蓮子紅皮多糖提取工藝研究［J］. 食品工業(yè)科技， 2011， 32（2）: 266-268.

［5］ 徐虹， 王馨儀， 曹楊， 等. 蓮子紅皮蛋白微波輔助鹽提工藝優(yōu)化［J］.食品科學(xué)， 2011， 32（4）: 87-91.

［6］ 高航， 高延芬， 徐虹. 蓮子紅衣醇提物的抗氧化和抗褐變活性［J］. 食品科學(xué)， 2013， 34（11）: 83-87.

［7］ 林俊， 李萍， 陳靠山. 近5 年多糖抗腫瘤活性研究進(jìn)展［J］. 中國中藥雜志， 2013， 38（8）: 1116-1125. DOI:10.4268/cjcmm20130802.

［8］ 申利紅， 王建森， 李雅， 等. 植物多糖的研究及應(yīng)用進(jìn)展［J］. 中國農(nóng)學(xué)通報， 2011， 27（2）: 349-352.

［9］ 齊素芬， 張華峰， 姚美， 等. 苯酚-硫酸法測定花椒葉多糖含量［J］. 食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報， 2014， 32（6）: 53-59. DOI:10.3969/j.issn.2095-6002.2015.04.008.

［10］ ZHANG Yangyang， LI Sheng， WANG Xiaohua， et al. Advances in lentinan: isolation， structure， chain conformation and bioactivities［J］. Food Hydrocolloids， 2011， 25（2）: 196-206. DOI:10.1016/ j.foodhyd.2010.02.001.

［11］ PANDA B C， MONDAL S， DEVI S P， et al. Pectic Polysaccharide from the green fruits of Momordica charantia （Karela）: structural characterization and study of immunoenhancing and antioxidant properties［J］. Carbohydrate Research， 2015， 401（4）: 24-31. DOI:10.1016/j.carres.2014.10.015.

［12］ XU Renjie， YE Hong， SUN Yi， et al. Preparation， preliminary characterization， antioxidant， hepatoprotective and antitumor activities of polysaccharides from the flower of tea plant （Camellia sinensis）［J］. Food and Chemical Toxicology， 2012， 50（7）: 2473-2480. DOI:10.1016/j.fct.2011.10.047.

［13］ LI Jinwei， FAN Liuping， DING Shaodong. Isolation， purification and structure of a new water-soluble polysaccharide from Zizyphus jujuba cv. JinSiXiaoZao［J］. Carbohydrate Polymers， 2011， 83（2）: 477-482. DOI:10.1016/j.carbpol.2010.08.014.

［14］ 劉芳， 陳貴堂， 胡秋輝， 等. 金針菇鋅多糖分離純化及其結(jié)構(gòu)特征［J］.食品科學(xué)， 2014， 35（5）: 1-7. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201405001.

［15］ 王強(qiáng)， 李盛鈺， 楊帆， 等. 玉竹中性多糖的分離純化及單糖組成分析［J］.食品科學(xué)， 2010， 31（15）: 100-102.

［16］ 熊雙麗， 李安林. 酸性多糖的最新研究進(jìn)展［J］. 食品科技， 2010，35（5）: 80-83.

［17］ 劉微微， 劉旭， 曹學(xué)麗. 白背三七多糖的分離純化［J］. 食品科學(xué)，2011， 32（23）: 58-63.

［18］ 芮海云， 吳國榮， 陳景耀， 等. 白芨中性多糖抗氧化作用的實驗研究［J］.南京師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 2003， 27（4）: 94-98. DOI:10.3969/ j.issn.1001-4616.2003.04.020.

［19］ 劉曉宇. 黃藥子中性多糖的結(jié)構(gòu)分析及其抗腫瘤活性研究［D］. 長春: 東北師范大學(xué)， 2013.

［20］ 王瑩瑩， 熊雙麗， 史敏娟， 等. 夏枯草酸性多糖的理化性質(zhì)分析及活性分析［J］. 精細(xì)化工， 2012， 29（5）: 476-481.

［21］ 朱燕， 陳運(yùn)喜， 吳俊華， 等. 中華蘆薈酸性多糖的分離純化與抗炎活性［J］. 中國天然藥物， 2007， 5（3）: 197-200.

［22］ 朱泉， 韓永斌， 顧振新， 等. 百合多糖研究進(jìn)展［J］. 食品工業(yè)科技，2012， 33（11）: 370-374.

Separation， Purification and Structural Characteristics of Polysaccharides from Red Skin of Lotus Seeds

GAO Hang1， GAO Yanfen2， XU Hong1，*
（1. Beijing Advanced Innovation Center for Food Nutrition and Human Health， Beijing Engineering and Technology Research Center of Food Additives， Beijing Technology and Business University， Beijing 100048， China； 2. Shenzhen Nongke Group Co. Ltd.，Shenzhen 518040， China）

The crude polysaccharides isolated from the red skin of lotus seeds by enzymatic extraction and ethanol precipitation were separated into neutral and acidic polysaccharides by DEAE-C column chromatography and subsequent Sephadex G-25 gel column chromatography. Gel permeation chromatography （GPC） analysis showed that the molecular weights of the neutral and acidic polysaccharides were 3.78 × 104D and 4.94 × 104D with a purity of 91.16% and 90.24%，respectively. The neutral polysaccharide was composed of 4 monosaccharides including glucose and xylose， while the acidic polysaccharide was mainly composed of 5 monosaccharides including glucose， xylose and galactose. Infrared spectra preliminarily confirmed that both purified fractions were pyranoses with α configuration. This conclusion was further proved by nuclear magnetic resonance.

red skin of lotus seeds； polysaccharide； separation and purification； structural characterization

10.7506/spkx1002-6630-201615016

TS201.2

A

1002-6630（2016）15-0094-06

2015-09-20

北京市自然科學(xué)基金項目（6162003）；北京市屬高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊建設(shè)與教師職業(yè)發(fā)展計劃項目（IDHT20130506）作者簡介：高航（1992—），女，碩士研究生，研究方向為功能性食品。E-mail：gaohang0928@163.com

徐虹（1977—），女，副教授，博士，研究方向為食品營養(yǎng)與安全。E-mail：xuhong@th.btbu.edu.cn

引文格式：