應(yīng)用依賴解旋酶DNA擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆

章晶晶，王 贊，張翠俠，馬超峰，周 巍,2,，張 巖（.河北省食品檢驗(yàn)研究院，河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 05007；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，河北 保定 07000）

應(yīng)用依賴解旋酶DNA擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆

章晶晶1，王 贊1，張翠俠1，馬超峰1，周 巍1,2,*，張 巖1
（1.河北省食品檢驗(yàn)研究院，河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050071；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，河北 保定 071000）

目的：基于依賴解旋酶DNA恒溫?cái)U(kuò)增（helicase-dependent isothermal DNA amplifi cation，HDA）技術(shù)，建立快速檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的方法。方法：采用以CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS 3 種外源基因和內(nèi)源基因Lectin（大豆凝集素基因）為目的片段設(shè)計(jì)4 對(duì)特異引物，建立反應(yīng)體系，通過HDA方法對(duì)內(nèi)源基因和3 種外源基因的檢測(cè)特異性和靈敏度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行同源性分析。結(jié)果：建立了轉(zhuǎn)基因大豆HDA檢測(cè)法，檢測(cè)特異性良好，3 種外源基因的檢出限為0.2%。結(jié)論：轉(zhuǎn)基因大豆的HDA檢測(cè)方法具有普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的特異、靈敏等特點(diǎn)，并且對(duì)儀器要求更低，極適合基層實(shí)驗(yàn)室使用，具有廣闊的應(yīng)用前景。

依賴解旋酶DNA擴(kuò)增；轉(zhuǎn)基因大豆；檢測(cè)

隨著現(xiàn)代科技在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用，轉(zhuǎn)基因作物近年來得到迅速發(fā)展。轉(zhuǎn)基因食品在傳統(tǒng)食品市場(chǎng)中份額不斷加大并進(jìn)入了食物鏈。轉(zhuǎn)基因大豆是較早商業(yè)化生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因作物之一，與非轉(zhuǎn)基因大豆相比，轉(zhuǎn)基因大豆在提高產(chǎn)量、抗逆能力、品質(zhì)改良、解決人類面臨的環(huán)境污染、溫飽問題及資源短缺等方面日益顯出巨大作用。同時(shí)，轉(zhuǎn)基因作物的安全性也逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)，具體包括食用安全性和生態(tài)安全性[1-2]。由于轉(zhuǎn)基因食品的安全性短時(shí)間內(nèi)難以確定，各國(guó)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品使用標(biāo)簽制度進(jìn)行管理[3]，所以急需建立一套準(zhǔn)確、快速檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品的方法。

目前，對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)包括基于核酸的檢測(cè)技術(shù)主要有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）方法[4]和基于PCR原理的其他檢測(cè)方法如實(shí)時(shí)熒光PCR[5-7]、多重PCR[8]、巢式PCR[9-10]、等溫環(huán)介導(dǎo)PCR[11-12]，這些方法檢測(cè)速度快，特異性高，但需要特定儀器，難以普及應(yīng)用并且檢測(cè)費(fèi)用昂貴?；诘鞍讬z測(cè)的方法主要是酶聯(lián)免疫法[13]，此方法需要的抗體和抗原制備較為困難，價(jià)格昂貴。

近年來，一種新型核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)依賴解旋酶DNA恒溫?cái)U(kuò)增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）技術(shù)因其操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、反應(yīng)靈敏、無需特殊儀器、便于普及而廣泛受到關(guān)注。HDA技術(shù)是核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的一種，主要利用解旋酶在恒溫條件下解開DNA雙鏈，同時(shí)DNA單鏈結(jié)合蛋白穩(wěn)定解開的單鏈為引物提供結(jié)合的模板，之后由DNA聚合酶催化合成互補(bǔ)鏈。新合成的雙鏈在解旋酶作用下又解成單鏈，并作為下一輪合成的模板進(jìn)入上述循環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)，最終實(shí)現(xiàn)靶序列的指數(shù)式增長(zhǎng)[14]。HDA法目前已經(jīng)應(yīng)用于一些致病菌的檢測(cè)[15-19]以及轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)[20]，本研究擬采用以35S啟動(dòng)子（cauliflower mosaic virus 35S，CaMV35S）、NOS終止子（nopaline synthase，NOS）、5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶（5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase，CP4-EPSPS）3 種外源基因和內(nèi)標(biāo)基因Lectin為目的片段設(shè)計(jì)4 對(duì)特異引物，建立快速檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的新方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

非轉(zhuǎn)基因大豆、轉(zhuǎn)基因大豆 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

十六烷三甲基溴化銨（hexadecyltrimethylammonium bromide，CTAB） 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；三羥甲基氨基甲烷（tirs hydroxymethyl aminomethane，Tris） 天津市博迪化工有限公司；乙二胺四乙酸二鈉（ethylene diaminetetraacetic acid disodium，Na2EDTA）北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；三氯甲烷、異戊醇、無水乙醇、氯化鈉（均為分析純） 天津市永大化學(xué)試劑有限公司；大腸桿菌解旋酶Ⅱ（UvrD） 上海富眾生物科學(xué)有限公司；MutL蛋白、T4噬菌體基因32編碼蛋白（T4 gp 32）、Bst聚合酶 美國(guó)NEB公司；dNTP，100 bp DNA Ladder Marker、三磷酸腺苷 大連寶生物技術(shù)公司。

1.2 儀器與設(shè)備

DXY-33A型電泳儀 北京市六一廠；Gel Doc XR凝膠成像系統(tǒng) 美國(guó)伯樂公司；6400型恒溫金屬浴 上海東升儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 大豆DNA的提取

將大豆研磨成粉末狀，稱取100 mg大豆粉末，加入2 mL離心管中；加入1 000 μL CTAB提取液和2 μL RNase酶溶液，充分混勻，65 ℃孵育30 min，不時(shí)振蕩；12 000 r/min室溫離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一干凈的2 mL離心管中；加入三氯甲烷-異戊醇（24∶1，V/V）溶液，輕緩顛倒數(shù)次后室溫靜置5 min，12 000 r/min室溫離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一干凈的1.5 mL離心管中；加入2 倍體積CTAB沉淀液，顛倒混勻后，室溫靜置1 h；加入400 μL 1 mol/L氯化鈉溶解沉淀，56 ℃孵育15 min，期間輕搖離心管數(shù)次助溶，加入800 μL經(jīng)－20 ℃預(yù)冷的無水乙醇，顛倒混勻后－20 ℃靜置 1 h，15 000 r/min，室溫離心10 min，小心棄去上清液；體積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液洗滌沉淀2～3 次，干燥DNA；50 μL 0.1×TE溶解沉淀，4 ℃保存?zhèn)溆肹21]。

1.3.2 引物設(shè)計(jì)

根據(jù)抗除草劑草甘膦的轉(zhuǎn)基因大豆，轉(zhuǎn)入外源基因有CaMV35S、NOS和CP4-EPSPS基因，以此類基因?yàn)闄z測(cè)目的片段，以Lectin基因作為內(nèi)源基因檢測(cè)DNA的提取質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)就轉(zhuǎn)基因成分的引物設(shè)計(jì)一般遵循目的靶序列較小控制在100～200 bp，一定程度上克服了深加工食品高溫蒸煮等加工工藝對(duì)檢測(cè)方法的限制。根據(jù)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心公布的外源基因和內(nèi)源基因的準(zhǔn)確序列，使用Primer Premier 5.0引物設(shè)計(jì)軟件，并進(jìn)行BLAST比對(duì)，設(shè)計(jì)4 對(duì)特異性擴(kuò)增引物如表1所示。

表1 引物序列與目的擴(kuò)增產(chǎn)物大小Table 1 Primer sequences and corresponding lengths of PCR products

1.3.3 HDA擴(kuò)增體系的建立

[22]優(yōu)化并建立反應(yīng)體系，反應(yīng)體系為50 μL，采用兩步法反應(yīng)。

反應(yīng)液Ⅰ：2 μL模板DNA，引物（10 μmol/L）各2 μL，用ddH2O補(bǔ)至25 μL。

反應(yīng)液Ⅱ：10×buffer（100 mmol/L 二硫蘇糖醇、350 mmol/L Tris-HAc、100 mmol/L MgSO4、1 mg/mL牛血清白蛋白）5 μL，dNTPs（10 mmol/L）4 μL，ATP（100 mmol/L）2 μL，Bst polymerase（8 000 U/mL）2 μL，UvrD helicase（100 mg/L）1 μL，MutL蛋白（600 mg/L）1 μL，T4 gp32（10 mg/mL）0.6 μL，海藻糖（5 mol/L）5 μL，用ddH2O補(bǔ)至25 μL。

反應(yīng)液Ⅰ在95 ℃水浴5 min然后于55 ℃水浴退火3 min，取出后于室溫將反應(yīng)液Ⅱ加入反應(yīng)液Ⅰ混勻，置65 ℃恒溫?cái)U(kuò)增90 min。質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%瓊脂糖凝膠電泳（100 V）45 min檢測(cè)產(chǎn)物。

1.3.4 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆特異性

利用表1所列外源基因CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS的3 組引物和內(nèi)源基因Lectin的一組引物，分別對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆進(jìn)行HDA法檢測(cè)。按照1.3.3節(jié)建立的HDA反應(yīng)體系進(jìn)行HDA法檢測(cè)，驗(yàn)證HDA法檢測(cè)的特異性。

1.3.5 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的產(chǎn)物分析

按照1.3.3節(jié)建立的HDA反應(yīng)體系，分別配制外源基因CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS和內(nèi)源基因Lectin的反應(yīng)體系進(jìn)行HDA擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化并送專業(yè)測(cè)序機(jī)構(gòu)測(cè)序，測(cè)序結(jié)果通過NCBI進(jìn)行在線BLAST從而驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的同源性。

1.3.6 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的檢出限

將非轉(zhuǎn)基因大豆和轉(zhuǎn)基因大豆按比例混合，混合后使轉(zhuǎn)基因大豆所占比例為100%、10%、5%、2.5%、1%、0.5%、0.2%、0.1%、0.01%，使用高速粉碎機(jī)從低濃度到高濃度粉碎大豆樣品，按照1.3.1節(jié)方法提取大豆基因組，并依據(jù)1.3.3節(jié)建立的HDA擴(kuò)增體系進(jìn)行PCR，確定非轉(zhuǎn)基因大豆和轉(zhuǎn)基因大豆混合樣的檢出限。

2 結(jié)果與分析

如圖1所示，由于內(nèi)源基因植物凝集素Lectin基因是大豆內(nèi)源基因，轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆均能夠擴(kuò)增出來409 bp的植物凝集素Lectin基因，符合理論要求，通過電泳結(jié)果證明與理論相符，因此，植物凝集素Lectin可以作為檢測(cè)大豆轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)的內(nèi)源參照基因，來達(dá)到檢測(cè)整個(gè)檢測(cè)體系是否正常運(yùn)行的目的。

只有轉(zhuǎn)基因大豆能夠擴(kuò)增出單一且清晰的191 bp的CaMV35S基因、101 bp的NOS基因、255 bp的CP4-EPSPS基因，而非轉(zhuǎn)基因大豆沒有擴(kuò)增出相應(yīng)的電泳條帶，并且電泳條帶清晰、無非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象，說明轉(zhuǎn)基因大豆根據(jù)CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS基因設(shè)計(jì)的引物特異性較強(qiáng)，可以用于轉(zhuǎn)基因大豆的轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)。

2.2 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆產(chǎn)物分析結(jié)果

擴(kuò)增產(chǎn)物由上海生物工程公司進(jìn)行測(cè)序，利用美國(guó)州立生物技術(shù)信息中心生物信息平臺(tái)進(jìn)行在線BLAST，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行同源性分析，結(jié)果均為100%，如表2所示，證明外源基因CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS和內(nèi)源基因Lectin的擴(kuò)增產(chǎn)物為符合轉(zhuǎn)基因大豆特異性要求的靶標(biāo)基因，符合檢測(cè)需要。

表2 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆擴(kuò)增片斷的比對(duì)結(jié)果Table 2 Homology analysis of HDA amplified fragments from genetically modified soybean by BLAST (basic local alignment search tool)

2.1 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的特異性

利用設(shè)計(jì)的針對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆中常見的CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS 3 種外源基因和大豆內(nèi)源基因植物凝集素Lectin基因的4 對(duì)特異性引物進(jìn)行HDA法檢測(cè)，以非轉(zhuǎn)基因大豆DNA作為陰性對(duì)照，檢測(cè)這4 對(duì)引物的特異性。

圖1 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的特異性Fig.1 Specificity of HDA for the detection of transgenetic soybean

2.3 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的檢出限

將已知的轉(zhuǎn)基因大豆和已知的非轉(zhuǎn)基因大豆按照不同比例混合，轉(zhuǎn)基因大豆所占的比例分別為100%、10%、5%、2.5%、1%、0.5%、0.2%、0.1%、0.01%，按照1.3.1節(jié)建立的大豆基因組DNA提取方法提取大豆基因組，并配以非轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)照和陰性對(duì)照，按1.3.3節(jié)建立的HDA擴(kuò)增體系進(jìn)行擴(kuò)增，確定大豆不同外源基因的檢出限。

圖2 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆外源基因CaMV35S（A）、NOS（B）、CP4 EPSPS（C）的檢出限Fig.2 Electrophorograms showing the detection limit of HDA for CaMV35S (A), NOS (B) and CP4-EPSPS (C) genes

表3 HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的最出限Table 3 The detection limit of HDA for genetically modified soybean

由圖2和表3可知，轉(zhuǎn)基因大豆含量在100%、10%、5%、2.5%、1%、0.5%、0.2%時(shí)，外源基因CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS均能夠產(chǎn)生單一、清晰的目的基因片段條帶，長(zhǎng)度分別約為191、101、255 bp，符合特異性引物設(shè)計(jì)目的，而轉(zhuǎn)基因大豆含量在0.1%、0.01%時(shí)則無清晰可見的目的電泳條帶產(chǎn)生，因此，可以證明HDA法檢測(cè)大豆不同外源基因的檢出限為0.2%。

3 討 論

目前轉(zhuǎn)基因大豆的檢測(cè)已經(jīng)有了許多相關(guān)研究，黃昆侖等[9]用巢式和半巢式對(duì)大豆中的內(nèi)源基因Lectin和轉(zhuǎn)基因大豆中的外源基因進(jìn)行了定量檢測(cè)；勵(lì)建榮等[4]通過設(shè)計(jì)特異性引物和探針對(duì)豆粕中外源基因CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS進(jìn)行了定性檢測(cè)；王華[5]、葉可萍[7]等采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，通過使用特異的引物和探針對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆外源基因進(jìn)行檢測(cè)；Thongsri等[23]使用巢式PCR針對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆顆粒中提取的DNA作為模板梯度稀釋成不同濃度梯度的DNA溶液進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，但經(jīng)典的半巢式PCR操作繁瑣，還需進(jìn)行兩輪PCR反應(yīng)，會(huì)大大增加污染的可能性；張秀豐等[8]建立了五重PCR反應(yīng)體系用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆；邵碧英等[11]據(jù)轉(zhuǎn)基因大豆A2704-12品系的特異序列設(shè)計(jì)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增引物建立了轉(zhuǎn)基因大豆A2704-12品系的LAMP檢測(cè)方法，袁瑛娜等[12]以CP4-EPSPS基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)內(nèi)、外引物和環(huán)引物通過采用改良環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆；曾有研究[24]報(bào)道使用HDA法可用于檢測(cè)人乳頭瘤病毒導(dǎo)致的宮頸癌；Zahradnik等[25]針對(duì)幾種常用等溫?cái)U(kuò)增方法在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因木薯方面進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)針對(duì)轉(zhuǎn)基因木薯的CaMV35S基因設(shè)計(jì)引物，使用HDA和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法并進(jìn)行檢測(cè)效果較好，并且HDA法檢測(cè)限可以達(dá)到0.5%[25]。

目前常用的轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)方法是實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，通過在線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)并捕捉熒光信號(hào)強(qiáng)度來實(shí)現(xiàn)即時(shí)定量地檢測(cè)待檢樣品中轉(zhuǎn)基因成分，并且無需打開擴(kuò)增體系這樣封閉操作，也不會(huì)造成氣溶膠污染的潛在污染情況的發(fā)生，毫無疑問是檢測(cè)行業(yè)首推的檢測(cè)方法；環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)雖然也具備不需要昂貴的儀器設(shè)備這樣的優(yōu)勢(shì)，但因其引物的靈敏度極高很容易造成假陽性，因此實(shí)際檢測(cè)過程中也很難得到應(yīng)用。在檢測(cè)效率以及防止交叉污染方面，本研究建立HDA技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆方法無法與熒光定量PCR相媲美，但HDA技術(shù)因其不需要昂貴的PCR儀，引物設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單無需熒光探針，且操作簡(jiǎn)便，僅需要恒溫水浴槽就能進(jìn)行反應(yīng)，所以在很多條件受限的基層檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)還是有一定應(yīng)用前景[26]，同時(shí)HDA法假陽性率相對(duì)較低，很好地保證了檢測(cè)結(jié)果的可信性。隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因植物品系確實(shí)越來越多，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用HDA技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆成分只是針對(duì)CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS等外源基因的篩查檢測(cè)，無法做到品系鑒定，確實(shí)滯后于當(dāng)前轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展要求，相信通過篩查檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)積累和條件優(yōu)化摸索可以為實(shí)現(xiàn)品系鑒定打下一定的技術(shù)基礎(chǔ)。隨著轉(zhuǎn)基因作物種植面積的日益增加以及消費(fèi)者對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品關(guān)注度的日漸提高，使得轉(zhuǎn)基因的檢測(cè)任務(wù)也將日趨繁重，這就要求檢測(cè)方法具備高特異性、高靈敏度和操作簡(jiǎn)便，因此HDA法用于轉(zhuǎn)基因大豆的檢測(cè)工作將會(huì)有很廣泛的應(yīng)用前景。

4 結(jié) 論

針對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆外源調(diào)控序列CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS基因和目的基因Lectin序列設(shè)計(jì)引物，成功建立了檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆中轉(zhuǎn)基因成分的HDA方法。HDA法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的特異性強(qiáng)，無非特異性擴(kuò)增，方法檢測(cè)檢出限為0.2%。

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Detection of Genetically Modified Soybean by Helicase-Dependent Isothermal DNA Amplification Assay

ZHANG Jingjing1, WANG Zan1, ZHANG Cuixia1, MA Chaofeng1, ZHOU Wei1,2,*, ZHANG Yan1
(1. Hebei Food Safety Key Laboratory, Hebei Food Inspection and Research Institute, Shijiazhuang 050071, China; 2. College of Food Science and Technology, Agricultural University of Hebei, Baoding 071000, China)

Objective: To establish a new rapid method to detect genetically modifi ed soybean based on helicase-dependent isothermal DNA amplification (HDA). Methods: With four highly specific sets of primers synthesized to target genes including Lectin in soybean and CaMV35S, NOS and CP4-EPSPS foreign genes, PCR reaction system was established. The specifi city and sensitivity of the PCR method were tested based on HDA and homology analysis was performed. Results: The helicase-dependent isothermal DNA amplifi cation method for the rapid detection of genetically modifi ed soybean has been established. The detection limits of CaMV35S, NOS and CP4-EPSPS genes in genetically modifi ed soybeans by HDA were all 0.2%. Conclusion: HDA is a rapid, user-friendly, specifi c and sensitive method for the detection of genetically modifi ed soybean, and is very suitable for use in grassroots laboratories with a broad prospect.

helicase-dependent isothermal DNA amplifi cation (HDA); genetically modifi ed soybean; detection

10.7506/spkx1002-6630-201604029

TS207.3

A

1002-6630（2016）04-0164-05

章晶晶, 王贊, 張翠俠, 等. 應(yīng)用依賴解旋酶DNA擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(4): 164-168.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201604029. http://www.spkx.net.cn

ZHANG Jingjing, WANG Zan, ZHANG Cuixia, et al. Detection on genetically modified soybean by helicase-dependent isothermal DNA amplification assay[J]. Food Science, 2016, 37(4): 164-168. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201604029. http://www.spkx.net.cn

2015-06-07

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（31401584）

章晶晶（1988—），女，助理工程師，碩士，研究方向?yàn)樯锘瘜W(xué)與分子生物學(xué)。E-mail：zhangjj@qibebt.ac.cn

*通信作者：周?。?983—），男，高級(jí)工程師，博士研究生，研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程。E-mail：zhouwei0311@163.com