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    喜炎平抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集作用的實(shí)驗(yàn)研究*

    2016-11-11 03:40:52趙詩(shī)云?,|尹小明王小青謝歡吳東風(fēng)
    關(guān)鍵詞:穿心蓮喜炎內(nèi)酯

    趙詩(shī)云 ?,| 尹小明 王小青 謝歡 吳東風(fēng)#

    (1江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046;2江西省人民醫(yī)院 南昌 330006)

    喜炎平抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集作用的實(shí)驗(yàn)研究*

    趙詩(shī)云1?,|1尹小明2王小青1謝歡1吳東風(fēng)1#

    (1江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046;2江西省人民醫(yī)院 南昌 330006)

    目的:探討喜炎平在SD大鼠體內(nèi)、健康人體外抗二磷酸腺苷誘導(dǎo)的血小板聚集作用。方法:健康人體外周血漿加入喜炎平的血藥濃度分別為1.25、2.50 mg/ml作用2 h,以ADP作為誘導(dǎo)劑,檢測(cè)血小板5 min內(nèi)的最大聚集率并計(jì)算血小板抑制率;SD大鼠喜炎平在體質(zhì)量分別為100、200、400 mg/kg進(jìn)行腹腔注射,連續(xù)給藥7 d,取血抗凝,以ADP作為誘導(dǎo)劑,檢測(cè)血小板5 min內(nèi)最大聚集率并計(jì)算血小板抑制率。結(jié)果:健康人體外周血漿給藥,血小板5 min內(nèi)最大聚集率劑量組與自身對(duì)照組比較顯著降低(P<0.05);SD大鼠體內(nèi)給藥,血小板5 min內(nèi)最大聚集率中、高劑量組與正常對(duì)照組比較顯著降低(P<0.05),分別為(69.44±6.30)%、(63.54±9.37)%、(46.66±7.47)%,空白對(duì)照(70.34±8.78)%。結(jié)論:喜炎平具有抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集作用,并與藥物濃度呈正相關(guān)。

    喜炎平;ADP;SD大鼠;正常人全血;血小板聚集率

    動(dòng)脈粥樣硬化是動(dòng)脈血栓形成的主要因素,動(dòng)脈血栓又是導(dǎo)致心肌梗塞、腦卒中及梗死等疾病的直接原因。近年來(lái)心腦血管病的發(fā)生率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì),嚴(yán)重威脅人類的健康和生命。如何有效防治此類疾病的發(fā)生,檢測(cè)凝血象及血小板相關(guān)指標(biāo),對(duì)診斷腦梗死有重要的臨床參考價(jià)值[1~2]。血小板聚集對(duì)血栓的形成有著至關(guān)重要的作用,是血栓形成的起始因素,有報(bào)道用穿心蓮內(nèi)酯治療能夠使心肌梗死的死亡率下降13%以上[3]。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)清熱抗炎藥穿心蓮內(nèi)酯具有抗血小板聚集的作用[4]。而喜炎平是穿心蓮內(nèi)酯的磺化物,其特點(diǎn)為水溶性大,吸收快,其是否具有抗血小板聚集的作用,尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究探討喜炎平在SD大鼠體內(nèi)、健康人體外抗二磷酸腺苷(Adenosine Diphosphate,ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集作用?,F(xiàn)報(bào)道如下:

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 動(dòng)物SD大鼠,SPF級(jí),雄性,體重260~280 g,由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,許可證SCXK(湘)2011-0003。

    1.1.2 藥物與試劑喜炎平注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字Z20026249,2 ml:50 mg);阿司匹林(國(guó)藥準(zhǔn)字J20080078);ADP購(gòu)于美國(guó)海倫娜公司。

    1.1.3 主要儀器AggRam血小板聚集儀(型號(hào):BJF52001),購(gòu)于美國(guó)海倫娜公司,試劑為原裝配套試劑。

    1.2 方法

    1.2.1 喜炎平注射液對(duì)人體外周血漿血小板集聚的影響選定50~60歲健康者10人,男女各半。抽取靜脈血12 ml,采用3.8%枸櫞酸鈉按1:9抗凝,分離血漿隨機(jī)分成4份,每份2 ml。分別為正常對(duì)照組(生理鹽水)、喜炎平低、高劑量組(1.25、2.50 mg/ml),腸溶阿司匹林組(0.3 mg/ml),作用2 h,1 000 rpm離心10 min取上清液既得富血小板血漿(PRP),剩余部分以3 000 rpm離心10 min,取上清液既得貧血小板血漿(PPP),用PPP調(diào)PRP中的血小板數(shù)為(3~4)×109/L。按照尹小明等[5]介紹的方法測(cè)定血小板聚集能力,測(cè)定5 min內(nèi)血小板最大聚集率(PAGmax,%)并計(jì)算給藥組對(duì)血小板聚集的抑制率(IR%)。IR%=(正常對(duì)照組PAGmax-給藥組PAGmax)/正常對(duì)照組PAGmax×100%。

    1.2.2 喜炎平注射液對(duì)SD大鼠血小板聚集的影響SD大鼠50只,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,隨機(jī)分成5組,每組10只,分別為正常對(duì)照組(生理鹽水)、腸溶阿司匹林(60 mg/kg)組與喜炎平低、中、高劑量(100、200、400 mg/kg)組。連續(xù)7 d腹腔注射給藥,第6天禁食過(guò)夜,第7天給藥2 h后用乙醚麻醉動(dòng)物,腹主動(dòng)脈取血,3.8%枸櫞酸鈉溶液,按1∶9抗凝,1 000rpm離心10 min取上清液既得富血小板血漿(PRP),剩余部分以3 000rpm離心10min,取上清液既得貧血小板血漿(PPP),用PPP調(diào)PRP中的血小板數(shù)為(3~4)×109/L。按照尹小明等[5]介紹的方法測(cè)定血小板聚集能力,測(cè)定5min內(nèi)血小板最大聚集率(PAGmax,%)并計(jì)算給藥組對(duì)血小板聚集的抑制率(IR%)。IR%=(正常對(duì)照組PAGmax-給藥組PAGmax)/正常對(duì)照組PAGmax×100%。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理利用Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,正態(tài)分布計(jì)量資料均采用(±s)表示,給藥不同濃度的喜炎平組與對(duì)照組比較采用成組t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 對(duì)人體外周血漿給藥抗血小板聚集的影響

    各實(shí)驗(yàn)組與自身對(duì)照組比較,具有顯著性差異(P<0.01)。見(jiàn)表1。

    表1 喜炎平對(duì)人體外周血漿給藥抗血小板聚集的影響(±s)

    表1 喜炎平對(duì)人體外周血漿給藥抗血小板聚集的影響(±s)

    注:與自身對(duì)照組比較,*P<0.01。

    組別n血藥劑量(mg/ml)5 min血小板聚集率(%)血小板抑制率(%)自身對(duì)照組普通阿司匹林組喜炎平組低劑量組喜炎平組高劑量組10 10 10 10 0.3 1.25 2.5 79.10±4.82 50.60±13.23*51.84±6.25*40.42±13.75*33.90 32.30 47.20

    2.2 對(duì)大鼠體內(nèi)給藥抗血小板聚集的影響喜炎平高、中劑量組以及阿司匹林組與正常對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)。見(jiàn)表2。

    表2 喜炎平對(duì)大鼠體內(nèi)給藥抗血小板聚集的影響(±s)

    表2 喜炎平對(duì)大鼠體內(nèi)給藥抗血小板聚集的影響(±s)

    注:與正常對(duì)照組比較,*P<0.05,#P<0.01。

    組別n藥物劑量(mg/kg)5 min血小板最大聚集率(%)血小板聚集抑制率(%)正常對(duì)照組腸溶阿司匹林組喜炎平低劑量組喜炎平中劑量組喜炎平高劑量組10 10 10 10 10 60 100 200 400 70.34±8.78 58.26±6.50#69.44±6.30 63.54±9.37*46.66±7.47#17.17 1.27 9.67 30.82

    3 討論

    穿心蓮內(nèi)酯是穿心蓮的脂溶性成分,分子式為C20H30O5,分子相對(duì)質(zhì)量為350.45。功能與主治:清熱解毒,抗菌消炎。用于上呼吸道感染,細(xì)菌性痢疾[6]。喜炎平為穿心蓮內(nèi)酯總酯磺酸鈉,分子式為C20H29O5·NaSO3是通過(guò)穿心蓮內(nèi)酯與濃硫酸發(fā)生加成反應(yīng)生成硫酸酯再脫水而成,化學(xué)成分確定,由于磺酸基的引入最后以鹽的形式存在,與穿心蓮內(nèi)酯比較其水溶性大,穩(wěn)定性強(qiáng),生物利用度高,臨床功效基本相似,都具有清熱解毒、抗炎、抗菌等。

    本研究結(jié)果顯示:喜炎平在體內(nèi)外都有抗血小板聚集作用,具有劑量依賴性,本文的結(jié)果以前少見(jiàn)報(bào)到。血小板聚集是指血小板與血小板之間相互黏附形成血小板團(tuán),參與血小板聚集的主要因素有誘導(dǎo)劑、血小板膜糖蛋白Ⅱb、Ⅲa復(fù)合物(GPⅡb/Ⅲa)、纖維蛋白原和Ca2+。誘導(dǎo)劑主要有ADP、花生四烯酸(AA)、膠原、凝血酶、腎上腺素等??寡“寰奂茄ㄐ约膊】鼓委煹囊徊糠郑ǖ男纬墒紫仁茄“灞患せ?,血小板發(fā)生一系列的釋放反應(yīng),發(fā)生一相聚集,進(jìn)而發(fā)生二相聚集,形成白色血栓,白色血栓不牢固,是可逆的。目前臨床上抗血小板聚集的常用藥物是阿司匹林,阿司匹林抗血小板聚集的作用靶點(diǎn)是血栓烷A2。在心腦血管病的一、二級(jí)預(yù)防中起到了良好的效果。然而,阿司匹林抗血小板聚集作用的過(guò)程中具有出血副反應(yīng),限制了阿司匹林的臨床應(yīng)用,因此,迫急需要一種新型藥物來(lái)替換。喜炎平藥理作用廣泛,具有抗病毒[7~10]、抗炎[11]等作用,臨床上常用于呼吸道感染[12~14]的治療,而喜炎平抗血小板聚集的作用沒(méi)有得到廣泛的應(yīng)用。從藥理學(xué)研究的數(shù)據(jù)來(lái)進(jìn)行評(píng)估,發(fā)現(xiàn)喜炎平注射液對(duì)血小板聚集有不同程度的影響,具有抗血小板聚集作用,有望喜炎平在治療心腦血管疾病方面能得到二次開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。其抗血小板聚集作用的機(jī)制正在研究之中。

    [1]李運(yùn)雄,李廣華,黃革,等.探討腦梗死患者凝血象和血小板變化[J].實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床,2013,13(5):77-78

    [2]李培英,黃海,陳云龍,等.活化血小板對(duì)高血壓患者腦梗死發(fā)病率的影響研究[J].實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床,2012,12(3):24-25

    [3]楊蘋,韋昊,秦慧勤,等.穿心蓮對(duì)正常小鼠和高血糖小鼠血糖影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007,18(1):87-88

    [4]馮玉麗,占葆娥,張書(shū)楠,等.穿心蓮內(nèi)酯在動(dòng)物體內(nèi)抗血小板凝聚的實(shí)驗(yàn)研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(4):385-386

    [5]尹小明,趙詩(shī)云,彭旦明,等.SD大鼠血小板聚集實(shí)驗(yàn)測(cè)定方法的研究[J].南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2013,53(8):6-7

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    R285

    B

    10.13638/j.issn.1671-4040.2016.08.045

    2016-07-17)

    江西省衛(wèi)生計(jì)生委中醫(yī)藥科研課題(2014A024)

    #通訊作者:吳東風(fēng),E-mail:823204858@qq.com

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