3種酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑檢測丙型肝炎抗體結(jié)果研究

殷劍　王曉明　孫慧　錢希銘

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3種酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑檢測丙型肝炎抗體結(jié)果研究

殷劍王曉明孫慧錢希銘

目的探討3種酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑檢測丙型肝炎抗體結(jié)果情況。方法分析2015年1～9月進行檢測丙型肝炎篩查的血液標本3 824例，其中丙型肝炎血液標本作為觀察對象，依據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑不同進行分組，Ⅰ組采用A試劑，通過間接法進行檢測；Ⅱ組采用B試劑，通過間接法進行檢測；Ⅲ組采用C試劑，采用夾心法進行檢測，通過聚合酶鏈反應(yīng)進行確診。對質(zhì)控物進行倍比稀釋，分別通過三種檢測試劑進行平行檢測。結(jié)果Ⅲ組檢測結(jié)果陽性30例，陰性3 794例；Ⅲ組陽性檢出率高于Ⅰ組(χ2=21.28，P<0.05)，Ⅲ組陽性檢出率高于Ⅱ組(χ2=20.64，P<0.05)；Ⅲ組真陽性標本準確度高于Ⅰ組(χ2=8.49，P<0.05)，Ⅲ組真陽性標本準確度高于Ⅱ組(χ2=8.67，P<0.05)；Ⅲ組質(zhì)控血清靈敏度高于Ⅰ組(χ2=16.37，P<0.05)，Ⅲ組質(zhì)控血清靈敏度高于Ⅱ組(χ2=16.58,P<0.05)；Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度高于Ⅰ組(χ2=21.85,P<0.05)，Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度高于Ⅱ組(χ2=21.47，P<0.05)。結(jié)論夾心法酶聯(lián)合免疫吸附試驗(ELISA)檢測試劑HCV抗體靈敏度、特異性均高于間接法ELISA檢測試劑，值得臨床推廣應(yīng)用。

酶聯(lián)免疫吸附試驗；試劑；檢測；丙型肝炎抗體

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)形成的一種傳染性疾病，HCV是一種單股正鏈RNA病毒，在黃病毒科之列。目前全世界有1.85億已知的HCV感染者，每年有300～400萬新發(fā)病例[1,2]。感染病例可分為急性感染和慢性感染兩類，其中急性感染者有近80%發(fā)展成為慢性感染，20年后有1/5的患者可能形成肝臟纖維化、終末期肝癌等,對于丙型感染的診斷、治療顯得尤為重要[3,4]。目前關(guān)于HCV檢測方法主要以酶聯(lián)免疫吸附試驗為主，采用何種酶聯(lián)免疫吸附試驗成為檢測丙型感染抗體結(jié)果準確性的重要議題。本研究通過對我院丙型肝炎患者臨床資料進行分析，探討不同聯(lián)免疫吸附試驗丙型肝炎抗體結(jié)果情況，報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院2015年1～9月進行檢測丙型肝炎篩查的血液標本3 824例，其中丙型肝炎血液標本作為觀察對象，依據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑不同進行分組，Ⅰ組采用A試劑，通過間接法進行檢測；Ⅱ組采用B試劑通過間接法進行檢測；Ⅱ組采用C試劑，采用夾心法進行檢測，通過聚合酶鏈反應(yīng)進行確診，免疫印跡法檢測通過美國RIBA試劑進行檢測。

1.2儀器與方法(1)首先通過試劑A、試劑B進行抗-HCV抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗進行檢測，按照操作說明書進行操作，灰區(qū)設(shè)置范圍：血液標本OD值的范圍在0.7×cut off～1.0×cut off。任何一種試劑檢測標本OD值均在灰區(qū)的設(shè)置范圍之內(nèi)，準備進行復(fù)查。檢測過程中注意進行雙孔復(fù)查，如果雙試劑四孔OD值小于cut off，可以判定為陰性，雙試劑所有孔的OD值≥cut off可以判定為陽性，除此以外的情況判定為弱陽性。通過試劑A、試劑B檢測結(jié)果判定為弱陽性和陽性標本通過PCR和RIBA檢測，從而確定標本中HCV病毒進行確認，采用3種酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑結(jié)果進行檢測和確證。將1 NCU/ml質(zhì)控血清進行倍比稀釋，獲得9份自制標本，聯(lián)合質(zhì)控血清共計10份，通過試劑A、試劑B、試劑C對標本進行平行檢測。(2)將免疫印跡試驗結(jié)果陽性標本通過A、B、C試劑進行檢測，并且對S/CO值進行對比觀察。

1.3觀察指標(1)觀察Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組檢測結(jié)果比較情況。(2)觀察間接法抗HCV陽性和弱陽性標本通過不同組別的檢測結(jié)果情況。(3)觀察Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組檢測陽性標本準確度情況。(4)觀察Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組質(zhì)控血清檢測靈敏度情況。(5)觀察Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度情況。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組檢測結(jié)果比較Ⅲ組檢測結(jié)果陽性30例，陰性3 794例。見表1。

2.2160份間接法抗HCV陽性和弱陽性標本通過不同組的檢測結(jié)果Ⅲ組陽性檢出率高于Ⅰ組(χ2=21.28,P<0.05)，Ⅲ組陽性檢出率高于Ⅱ組(χ2=20.64，P<0.05)。見表2。

表1?、窠M、Ⅱ組和Ⅲ組檢測結(jié)果比較　例

表2　160份間接法抗HCV陽性和弱陽性標本通過不同組別檢測結(jié)果　例(%)

注：與Ⅲ組比較，*P<0.05

2.3Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組檢測陽性標本準確度情況Ⅲ組真陽性標本準確度高于Ⅰ組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.49,P<0.05)；Ⅲ組真陽性標本準確度高于Ⅱ組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.67，P<0.05)。見表3。

表3?、窠M、Ⅱ組和Ⅲ組檢測陽性標本準確度情況

注：與Ⅲ組比較，*P<0.05

2.4Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組質(zhì)控血清檢測靈敏度情況Ⅲ組質(zhì)控血清靈敏度高于Ⅰ組(χ2=16.37,P<0.05)，Ⅲ組質(zhì)控血清靈敏度高于Ⅱ組(χ2=16.58，P<0.05)。見表4。

表4?、窠M、Ⅱ組和Ⅲ組質(zhì)控血清檢測靈敏度情況　%

注：與Ⅲ組比較，*P<0.05

2.5Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度情況Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度高于Ⅰ組(χ2=21.85,P<0.05)，Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度高于Ⅱ組(χ2=21.47，P<0.05)。見表5。

3　討論

目前國內(nèi)HCV抗體感染率3%左右，其中大約4 000萬例HCV感染患者，已經(jīng)成為全世界的重大公共衛(wèi)生問題[5,6]。HCV傳播途徑主要是通過輸血或者血液制品進行傳播。本研究通過分析2015年1～9月進行檢測丙型肝炎篩查的血液標本3 824例，其中丙型肝炎血液標本為觀察對象，依據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑不同進行分組，Ⅰ組采用A試劑，通過間接法進行檢測，Ⅱ組采用B試劑，通過間接法進行檢測，Ⅲ組采用C試劑，采用夾心法進行檢測，通過聚合酶鏈反應(yīng)進行確診。對質(zhì)控物進行倍比稀釋，分別通過三種檢測試劑進行平行檢測。

試劑C是夾心法檢測HCV抗體的ELISA試劑，筆者通過多種不同的方法，對HCV抗體進行平行性檢測，通過和間接法ELISA試劑進行比較觀察，對夾心法試劑C進行準確的評價[7,8]。有資料顯示，通過間接法ELISA檢測過程中，采用酶標記抗人IgG作為第二抗體對血清中HCVIgG抗體，但是HCVIgG抗體出現(xiàn)時間比HCVIgM抗體晚，在感染早期其采集血液很容易發(fā)生漏檢[9,10]。同時為了減少因血清中其他非特異性抗體和類風濕因子形成干擾，試驗第一步需要降低檢測樣本量和稀釋樣本congress降低反應(yīng)的板底值，同時也可能降低試劑檢測靈敏度[11,12]。另外通過間接法ELISA檢測，很容易受到非特異性IgG抗體、類風濕因子等非特異性抗體的影響，從而出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。目前關(guān)于HCV抗體診斷試劑逐步從間接法向夾心法逐步過渡。其原因主要是丙肝重組抗原活性和其空間構(gòu)象有密切關(guān)系，抗原結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和酶標記過程中對于空間構(gòu)象的影響，為夾心法試劑研究重點和難點問題[13,14]。目前對于HCV抗體檢測影響因素主要是包被丙型肝炎病毒抗原。目前國內(nèi)常用的兩種間接法ELISA試劑對HCV抗體進行篩查，為的是降低由于不同廠家包被抗原片段形成的漏檢[15,16]。有資料顯示，間接法ELISA檢測試劑可以增加NS5區(qū)作為包被抗原，提高了檢測的靈敏度，但本研究結(jié)果顯示，試劑A和試劑B的間接法ELISA檢測假陽性率比較高，可能增加了檢查HCV抗體成本和負擔[17]。有資料顯示，目前HCV感染標志物檢測方法主要有兩種方式，其中一種通過間接法ELISA試劑檢測HCV抗體，另外一種是通過夾心法ELISA試劑對HCV抗體檢測，采用某種試劑對HCV核酸進行檢測[18]。本結(jié)果表明，Ⅲ組檢測結(jié)果陽性30例，陰性3 794例，Ⅲ組陽性檢出率高于Ⅰ組，Ⅲ組陽性檢出率高于Ⅱ組，Ⅲ組真陽性標本準確度高于Ⅰ組，Ⅲ組真陽性標本準確度高于Ⅱ組，Ⅲ組質(zhì)控血清靈敏度高于Ⅰ組，Ⅲ組質(zhì)控血清靈敏度高于Ⅱ組，Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度高于Ⅰ組，Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度高于Ⅱ組，提示通過夾心法和間接法ELISA試劑、HCV核酸試劑進行合理配伍，可以提高丙肝感染標志物陽性篩查準確率，降低假陽性，提高血液準確率，盡可能提高血液檢查效率。

表5?、窠M、Ⅱ組和Ⅲ組檢測陽性標本靈敏度情況　%

注：與Ⅲ組比較，*P<0.05

綜上所述，夾心法ELISA檢測試劑HCV抗體靈敏度、特異性均高于間接法ELISA檢測試劑，值得臨床推廣應(yīng)用。

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214000江蘇省無錫市第九人民醫(yī)院檢驗科

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A

1002-7386(2016)21-3312-03

2016-03-20)