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    溫度對(duì)大球蓋菇生長(zhǎng)發(fā)育的影響

    2016-11-11 02:26:50杜雙田魯車龍
    關(guān)鍵詞:蓋菇大球出菇

    鮑 蕊,杜雙田,張 晶,丁 建,魯車龍,李 珍

    (西北農(nóng)林科技大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,陜西 楊凌 712100)

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    溫度對(duì)大球蓋菇生長(zhǎng)發(fā)育的影響

    鮑蕊,杜雙田,張晶,丁建,魯車龍,李珍

    (西北農(nóng)林科技大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,陜西 楊凌 712100)

    【目的】 研究溫度對(duì)大球蓋菇生長(zhǎng)發(fā)育的影響,為其栽培管理提供參考?!痉椒ā?在不同溫度條件下,研究大球蓋菇孢子萌發(fā)的適宜溫度;采用正交多項(xiàng)式回歸分析法構(gòu)建數(shù)學(xué)模型,揭示溫度對(duì)大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)速率、出菇數(shù)量及產(chǎn)量的影響?!窘Y(jié)果】 經(jīng)過冷刺激(5 ℃下冷藏30 d)后,大球蓋菇孢子萌發(fā)的適宜溫度為28 ℃;大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)的最適溫度為26.0 ℃;采用溫室栽培,當(dāng)菌床基質(zhì)中心溫度為18.7 ℃時(shí),大球蓋菇的產(chǎn)量最高、出菇數(shù)量較多;菌床基質(zhì)中心溫度在16~19.4 ℃時(shí),大球蓋菇子實(shí)體形態(tài)較好?!窘Y(jié)論】 冷刺激及高溫是大球蓋菇孢子萌發(fā)的重要條件,溫度是影響大球蓋菇生長(zhǎng)發(fā)育、高產(chǎn)及優(yōu)質(zhì)的關(guān)鍵因素。

    大球蓋菇;孢子萌發(fā);數(shù)學(xué)模型;培養(yǎng)溫度

    大球蓋菇(Strophariarugoso-annulata)屬于擔(dān)子菌亞門(Basidomycota)、層菌綱(Hymenomycetes)、傘菌目(Agaricales)、球蓋菇科(Strophariaceae)、球蓋菇屬(Stropharia)真菌[1],因其在同類真菌中體形巨大,被稱為花園巨人(Garden giant)、哥斯拉蘑菇(Godzilla mushroom)[2],又因其菇蓋顏色接近酒紅色,也被稱為酒紅大球蓋菇(Wine cap Stropharia)[3]。大球蓋菇營(yíng)養(yǎng)豐富,口感脆嫩,鮮味濃郁,且具有重要的保健功能,是目前國(guó)際食用菌市場(chǎng)上十大交易菇類之一,也是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)向發(fā)展中國(guó)家推薦栽培的食用菌之一[4]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,大球蓋菇多糖具有預(yù)防冠心病、助消化、緩解精神疲勞等功效;大球蓋菇多糖對(duì)小白鼠肉瘤S-180和艾氏癌的抑制率達(dá)到70%[5-7];大球蓋菇所含的抗氧化物質(zhì)(類黃酮、多酚、皂甙等)對(duì)嬰幼兒智力及中樞神經(jīng)發(fā)育具有重要作用[7-8]。另外,大球蓋菇可有效降解土壤與廢水中的2,4,6-三硝基甲苯(TNT)[9-11]、氯苯、苯胺化合物、氯化苯酚、甲酚、苯甲酚和二甲苯等有害物質(zhì)[12],是環(huán)境保護(hù)及環(huán)境污染修復(fù)的重要生物之一。

    目前,關(guān)于大球蓋菇的研究主要集中在栽培原料及其配方方面[4,12-13],而關(guān)于溫度對(duì)大球蓋菇生長(zhǎng)發(fā)育的影響尚未見系統(tǒng)報(bào)道。因此,本試驗(yàn)系統(tǒng)研究了溫度對(duì)大球蓋菇孢子萌發(fā)、菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體產(chǎn)量、數(shù)量和形態(tài)的影響,以期為大球蓋菇的栽培管理提供參考。

    1 材料與方法

    1.1材料

    1.1.1菌種供試菌種由西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供,菌株編號(hào)為SR-01。

    1.1.2培養(yǎng)基(1)PDA。馬鈴薯200.0 g/L,葡萄糖20.0 g/L,瓊脂粉12.5 g/L,水1 000 mL(pH 6.5)。(2)CM。葡萄糖20.0 g/L,蛋白胨5.0 g/L,MgSO40.5 g/L,K2HPO41.0 g/L,KH2PO40.5 g/L,瓊脂粉12.5 g/L,水1 000 mL(pH 6.5)。(3)WA。瓊脂粉20.0 g/L,水1 000 mL(pH 6.5)。(4)MEA。麥芽浸膏 20.0 g/L,蛋白胨 1.0 g/L,葡萄糖 20.0 g/L,瓊脂粉 12.5 g/L,水1 000 mL(pH 6.5)。(5)小麥培養(yǎng)基。小麥99 g,蔗糖1 g,水100 mL(pH 6.5)。

    1.1.3栽培原料主要栽培原料為蘋果樹修剪枝條木屑。

    1.2方法

    1.2.1孢子的收集選用子實(shí)體較大、菌柄粗壯、健康無病蟲害的成熟大球蓋菇子實(shí)體,采用孢子彈射法收集孢子,將收集的孢子保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2菌種制備將保存的大球蓋菇斜面菌種在PDA培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)接2次后,再轉(zhuǎn)接到小麥培養(yǎng)基上,25 ℃條件下培養(yǎng),菌絲發(fā)滿瓶后備用。

    1.2.3溫度對(duì)孢子萌發(fā)的影響將5 ℃下冷藏30 d的大球蓋菇孢子和未經(jīng)冷藏的孢子用無菌水制備孢子懸液,以血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),使其密度大約為103·mL-1,接種量為10 μL/皿。進(jìn)行以下2項(xiàng)試驗(yàn):

    (1)將未冷藏孢子制成的懸液分別涂布在PDA、WA、CM和MEA平板上,28 ℃恒溫培養(yǎng)12 d,每隔24 h 觀察并記錄菌落形成時(shí)間及形成的菌落數(shù)。

    (2)將冷藏孢子制成的懸液接種于PDA平板上,將平板分別置于8,12,16,20,24,28和32 ℃條件下培養(yǎng),每隔24 h觀察并記錄菌落形成時(shí)間及數(shù)量。

    以上每處理重復(fù)5次。以公式(1)計(jì)算孢子萌發(fā)率。

    孢子萌發(fā)率=(孢子萌發(fā)數(shù)/孢子總數(shù))×100%。

    (1)

    1.2.4溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)速率與菌落長(zhǎng)勢(shì)的影響在PDA平板中央接種一粒麥粒菌種,分別于5,10,15,20,25,30,35 ℃及空氣相對(duì)濕度60%~70%和黑暗條件下培養(yǎng)13 d,采用十字劃線法測(cè)量其菌落半徑(mm),每處理重復(fù)5次。

    菌絲生長(zhǎng)速率=菌落半徑/培養(yǎng)時(shí)間。

    (2)

    1.2.5溫度對(duì)大球蓋菇產(chǎn)量、數(shù)量及形態(tài)的影響以蘋果樹修剪枝條木屑為原料,在日光溫室內(nèi)按常規(guī)畦栽方法栽培管理,接種時(shí)間為2013-11-15,出菇期為2014-04-17-06-04。在出菇期,每天08:00記錄菌床中心溫度與室內(nèi)溫度,15:00記錄室內(nèi)溫度。采收時(shí),記錄出菇數(shù)量、產(chǎn)量,并測(cè)量菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄直徑及長(zhǎng)度(mm),按公式(3)計(jì)算菇形指數(shù)。

    菇形指數(shù)=鮮菇菌蓋直徑/鮮菇柄長(zhǎng)[11]。

    (3)

    2 結(jié)果與分析

    2.1溫度對(duì)大球蓋菇孢子萌發(fā)的影響

    觀察結(jié)果顯示,未經(jīng)過冷藏處理的大球蓋菇孢子在PDA、WA、CM 和MEA平板培養(yǎng)基上均未能形成肉眼可見的菌落。經(jīng)過冷藏處理 1 個(gè)月的大球蓋菇孢子在溫度≤24 ℃時(shí)不能萌發(fā);當(dāng)培養(yǎng)溫度為28 ℃時(shí),在PDA培養(yǎng)基上第 9天形成肉眼可見的菌落,經(jīng)計(jì)算孢子萌發(fā)率為40%,且形成的菌落氣生菌絲旺盛、濃密、潔白;當(dāng)培養(yǎng)溫度為32 ℃時(shí),在PDA培養(yǎng)基上形成肉眼可見的菌落需12 d,孢子萌發(fā)率為10%,其菌落氣生菌絲相對(duì)稀疏。可見,于5 ℃下經(jīng)過30 d冷藏處理的大球蓋菇孢子萌發(fā)的適宜溫度為28 ℃。

    2.2溫度對(duì)大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)速率及菌落長(zhǎng)勢(shì)的影響

    溫度對(duì)大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)速率及菌落長(zhǎng)勢(shì)的影響見圖1和圖2。

    經(jīng)計(jì)算,大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)速率(Y1)與培養(yǎng)溫度(X1)的函數(shù)關(guān)系如下:

    (4)

    方差分析得:F回歸=19.35>F0.05(3,3)=9.28,P0.05=0.018<0.05,R2=0.96,表明該方程達(dá)到顯著水平,且模型與實(shí)際值擬合較好。

    對(duì)方程(4)求極值得:

    X1max=26.0 ℃,Y1max=2.4 mm/d。

    即培養(yǎng)溫度為26.0 ℃時(shí),大球蓋菇的菌絲速率達(dá)最大值2.4 mm/d。

    圖 1 培養(yǎng)溫度對(duì)大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)速率的影響Fig.1 Effect of temperature on growth rate ofStropharia rugoso-annulata

    圖 2 培養(yǎng)溫度對(duì)大球蓋菇菌落長(zhǎng)勢(shì)的影響 1~7分別是5,10,15,20,25,30,35 ℃條件下培養(yǎng)的大球蓋菇菌落長(zhǎng)勢(shì)Fig.2 Effects of temperature on colonies growth of Stropharia rugoso-annulata1-7. Growth of colonies under 5,10,15,20,25,30, and 35 ℃

    由計(jì)算結(jié)果及圖1可見,在試驗(yàn)范圍內(nèi),大球蓋菇的菌絲生長(zhǎng)速率與培養(yǎng)溫度之間呈三次函數(shù)關(guān)系。當(dāng)溫度為5~26 ℃時(shí),隨著溫度的升高,大球蓋菇的菌絲生長(zhǎng)速率逐漸增大,在26 ℃時(shí)達(dá)到最大值;超過 26 ℃ 后,大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)速率迅速降低。

    由圖2可見,當(dāng)溫度為5和10 ℃時(shí),菌落長(zhǎng)勢(shì)較差;溫度為15和20 ℃時(shí),菌落長(zhǎng)勢(shì)較好;溫度為25和30 ℃時(shí),菌落較大且長(zhǎng)勢(shì)最好,氣生菌絲濃密潔白;溫度為35 ℃時(shí),菌落生長(zhǎng)緩慢。

    2.3溫度對(duì)大球蓋菇產(chǎn)量及出菇數(shù)的影響

    2.3.1室內(nèi)溫度與菌床基質(zhì)中心溫度的關(guān)系以采收時(shí)間為橫坐標(biāo),以當(dāng)日的室內(nèi)溫度和菌床中心溫度為縱坐標(biāo),室內(nèi)溫度和菌床基質(zhì)中心溫度的變化趨勢(shì)見圖3。由圖3可見,室內(nèi)溫度(每天08:00和15:00溫度)受天氣變化的影響較大,特別是每天15:00的溫度變化幅度較大,而菌床基質(zhì)中心溫度變化相對(duì)緩和。隨著時(shí)間的推移,所記錄的3種溫度變化趨勢(shì)基本相同,都是隨著外界氣溫的升高逐漸升高;3種溫度的趨勢(shì)線斜率相近。為了分析方便,本試驗(yàn)以菌床基質(zhì)中心溫度為指標(biāo),研究溫度對(duì)大球蓋菇子實(shí)體形成數(shù)量及產(chǎn)量的影響。

    2.3.2菌床基質(zhì)中心溫度對(duì)大球蓋菇產(chǎn)量及出菇數(shù)量的影響菌床基質(zhì)中心溫度對(duì)大球蓋菇產(chǎn)量及出菇數(shù)量的影響見圖4和圖5。

    圖 3 室內(nèi)溫度和菌床基質(zhì)中心溫度的變化趨勢(shì)Fig.3 Relationship between indoor temperature and material temperature

    圖 4 菌床基質(zhì)中心溫度對(duì)大球蓋菇產(chǎn)量的影響Fig.4 Effect of temperature on yield ofStropharia rugoso-annulata圖 5 菌床基質(zhì)中心溫度對(duì)大球蓋菇出菇數(shù)量的影響Fig.5 Effect of temperature on amount ofStropharia rugoso-annulata

    以菌床基質(zhì)中心溫度為指標(biāo),統(tǒng)計(jì)不同溫度下大球蓋菇的產(chǎn)量和出菇數(shù)量,經(jīng)計(jì)算,大球蓋菇產(chǎn)量(Y2)與菌床基質(zhì)中心溫度(X2)之間的函數(shù)關(guān)系為:

    (5)

    方差分析得:F回歸=57.19>F0.05(2,3)=9.55,P0.05=0.017 2<0.05,R2=0.988,表明方程(5)達(dá)顯著水平,該模型與實(shí)測(cè)值擬合情況較好。

    求極值得:

    X2max=18.7 ℃,Y2max=6 174.7g/m2。

    即菌床基質(zhì)中心溫度為18.7 ℃時(shí),大球蓋菇的產(chǎn)量達(dá)最大值6 174.7g/m2。

    (6)

    方差分析得:F回歸=37.23>F0.05(2,3)=9.55,P0.05=0.026 3<0.05,R2=0.982,表明方程(6)達(dá)顯著水平,該模型與實(shí)測(cè)值擬合情況較好。

    求極值得:

    即菌床基質(zhì)中心溫度為19.4 ℃時(shí),大球蓋菇出菇數(shù)量達(dá)到最大值44個(gè)/m2。

    由計(jì)算結(jié)果及圖4、圖5可知,在試驗(yàn)范圍內(nèi),大球蓋菇產(chǎn)量與菌床基質(zhì)中心溫度之間呈三次函數(shù)關(guān)系。當(dāng)菌床基質(zhì)中心溫度在16~18.7 ℃(此時(shí)08:00室內(nèi)溫度為11~16 ℃,15:00室內(nèi)溫度為18~23 ℃)時(shí),隨著溫度的升高,大球蓋菇產(chǎn)量逐漸升高,菌床基質(zhì)中心溫度在18.7 ℃(此時(shí)08:00溫度為16 ℃,15:00室內(nèi)溫度為22 ℃)時(shí)大球蓋菇產(chǎn)量達(dá)到最大值;超過 18.7 ℃ 后,大球蓋菇單位面積產(chǎn)量迅速降低。

    由計(jì)算結(jié)果及圖4、圖5還可知,在試驗(yàn)溫度范圍內(nèi),大球蓋菇出菇數(shù)量與菌床基質(zhì)中心溫度之間呈三次函數(shù)關(guān)系。當(dāng)菌床基質(zhì)中心溫度在16~19.4 ℃(此時(shí)08:00室內(nèi)溫度為11~16 ℃,15:00室內(nèi)溫度為18~23 ℃)時(shí),隨著溫度的升高,大球蓋菇出菇數(shù)量逐漸升高,菌床基質(zhì)中心溫度在19.4 ℃(此時(shí)08:00室內(nèi)溫度為16 ℃,15:00室內(nèi)溫度為22 ℃)時(shí)大球蓋菇出菇數(shù)量達(dá)到最大值;超過 19.4 ℃ 后,大球蓋菇出菇數(shù)量迅速降低。

    2.3.3菌床基質(zhì)中心溫度對(duì)子實(shí)體形態(tài)的影響在出菇期間,通過調(diào)節(jié)卷簾機(jī),控制溫室溫度在15~26 ℃,以采菇時(shí)菌床基質(zhì)中心溫度為指標(biāo),分別測(cè)量不同溫度下113~221個(gè)子實(shí)體的菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄直徑、菌柄長(zhǎng)度,統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

    表 1 菌床基質(zhì)中心溫度對(duì)大球蓋菇子實(shí)體形態(tài)的影響Table 1 Effect of temperature on morphological characteristics of Stropharia rugoso-annulata

    注:同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05),標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

    Note:The lowercase letters are theP=5% significant level,the capital letters are theP=1% signifiant level.

    由表1可知,菌床基質(zhì)中心溫度不同,大球蓋菇子實(shí)體的菌蓋直徑、厚度以及菌柄長(zhǎng)度、直徑等差異較大。當(dāng)溫度為16~17 ℃時(shí),大球蓋菇子實(shí)體的菌蓋直徑、厚度以及菌柄長(zhǎng)度、直徑均較大,與其他溫度下的菌蓋直徑、厚度以及菌柄長(zhǎng)度、直徑的差異總體顯著。溫度為17 ℃時(shí),大球蓋菇的菇形指數(shù)最大,此時(shí)子實(shí)體的菇蓋大、菌柄短,菇形較好,符合市場(chǎng)需求。

    3 結(jié)論與討論

    3.1冷刺激及高溫是大球蓋菇孢子萌發(fā)的重要條件

    本研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)過冷刺激的大球蓋菇孢子,在28和32 ℃溫度條件下都形成了肉眼可見的菌落,但在28 ℃時(shí)的孢子萌發(fā)率較高,萌發(fā)時(shí)間相對(duì)較短。由于孢子萌發(fā)是一系列生理生化過程,是在多種相關(guān)酶的作用下完成的,而酶的活性與溫度有著密切的關(guān)系,所以孢子要在一定的溫度范圍下才能萌發(fā)。食用菌優(yōu)良菌種選育、生理研究以及遺傳研究,都需要經(jīng)過純種分離,孢子分離法是食用菌主要的菌種分離方法之一。因此,明確大球蓋菇孢子萌發(fā)的適宜條件,對(duì)優(yōu)良菌種的選育等至關(guān)重要。

    3.2溫度是影響大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素

    本研究結(jié)果顯示,大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)速率與培養(yǎng)溫度之間呈三次函數(shù)關(guān)系,表明大球蓋菇菌絲生長(zhǎng)對(duì)培養(yǎng)溫度比較敏感,即微小的培養(yǎng)溫度變化就會(huì)引起較大的生理效應(yīng),因此在大球蓋菇菌絲體階段要嚴(yán)格控制溫度,特別是集約化栽培時(shí),要加強(qiáng)循環(huán)風(fēng),使培養(yǎng)架上下溫差縮小,以便達(dá)到生長(zhǎng)整齊、分化一致,從而利于生產(chǎn)管理。本研究還發(fā)現(xiàn),在5~10 ℃培養(yǎng)溫度范圍內(nèi),菌絲生長(zhǎng)緩慢,有利于菌種的保藏;從菌落長(zhǎng)勢(shì)來看,適宜的培養(yǎng)溫度在20~30 ℃,此時(shí)氣生菌絲旺盛、濃密、潔白。從菌絲生長(zhǎng)速率與菌落長(zhǎng)勢(shì)可以看出,20~26 ℃最利于菌絲體培養(yǎng),菌絲生長(zhǎng)速率快,分枝較多,當(dāng)培養(yǎng)溫度>30 ℃時(shí),培養(yǎng)基容易失水,影響菌絲的生長(zhǎng)。

    3.3溫度是影響大球蓋菇產(chǎn)量及成菇數(shù)量的關(guān)鍵因素

    本研究結(jié)果顯示,大球蓋菇單位面積產(chǎn)量、出菇數(shù)量均與菌床基質(zhì)中心溫度之間呈現(xiàn)三次函數(shù)關(guān)系,表明溫度對(duì)產(chǎn)量的影響較為敏感,在生產(chǎn)過程中,應(yīng)嚴(yán)格控制環(huán)境溫度。據(jù)于萍等[14]報(bào)道,大球蓋菇中與降解培養(yǎng)料內(nèi)纖維素、木質(zhì)素等相關(guān)的酶主要有羧甲基纖維素酶、β-葡萄糖苷酶、半纖維素酶、漆酶;Schlosser等[15]、Yoo等[16]、許穎等[17]報(bào)道,上述4種酶在高溫條件下酶活較高,適當(dāng)升高培養(yǎng)溫度有利于提高纖維素、木質(zhì)素降解酶的活性,有利于促進(jìn)子實(shí)體生長(zhǎng)。

    3.4溫度是影響大球蓋菇子實(shí)體形態(tài)的關(guān)鍵因素

    菌床基質(zhì)中心溫度不同,大球蓋菇子實(shí)體的菇蓋直徑、厚度以及菌柄長(zhǎng)度、直徑等差異較大;當(dāng)溫度為16~17 ℃時(shí),大球蓋菇子實(shí)體的菇蓋直徑、厚度以及菌柄長(zhǎng)度、直徑較大;大球蓋菇菇形指數(shù)最大時(shí)的溫度為17 ℃,此時(shí)大球蓋菇子實(shí)體菇蓋大,菌柄短,菇形較好,符合市場(chǎng)需求。

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    Effects of temperature on growth ofStrophariarugoso-annulata

    BAO Rui,DU Shuangtian,ZHANG Jing,DING Jian,LU Chelong,LI Zhen

    (CollegeofLifeSciences,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)

    【Objective】 This study investigated the effects of temperature on growth ofStrophariarugoso-annulatato provide reference for cultivation and management ofS.rugoso-annulata.【Method】 Different temperatures were tested to obtain the optimum temperature forS.rugoso-annulataspore germination.Orthogonal polynomial regression method was used to build model for investigating effects of temperature on hypha growth rate, fruit body amount and yield ofS.rugoso-annulata.【Result】 The optimum temperature forS.rugoso-annulatagermination after cold stimulation (5 ℃,30 d) was 28 ℃ and the optimal temperature for hypha growth was 26.0 ℃.In greenhouse,when the center temperature of fungus bed matrix was 18.7 ℃,the fruiting body numbers and yield ofS.rugoso-annulatareached the highest values.When the center temperature of fungus bed matrix was 16-19.4 ℃,the shape of fruiting body was the best.【Conclusion】 High temperature and cold stimulation treatments were essential conditions for germination ofS.rugoso-annulataspore.Temperature was the main factor influencing growth,high quality and yield ofS.rugoso-annulata.

    Strophariarugoso-annulata;spore germination;mathematics model;culture temperature

    時(shí)間:2016-09-0709:03DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2016.10.027

    2015-04-17

    陜西省農(nóng)業(yè)示范推廣項(xiàng)目;西北農(nóng)林科技大學(xué)科技創(chuàng)新及成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)(XNY2013-63)

    鮑蕊(1989-),男,陜西綏德人,在讀碩士,主要從事微生物資源開發(fā)利用研究。E-mail:294763925@qq.com

    杜雙田(1961-),男,陜西扶風(fēng)人,副教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事食用菌與藥用真菌研究。E-mail:dst6107@126.com

    S646.1+90.4+6

    A

    1671-9387(2016)10-0193-06

    網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20160907.0903.054.html

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