心肌缺血再灌注損傷大鼠中20-HETE對ROS生成及NADPH氧化酶活性的影響*

韓勇，賀滟，郭立榮，劉萬立，趙紅艷，何婭

（遵義醫(yī)學(xué)院，貴州遵義563003）

心肌缺血再灌注損傷大鼠中20-HETE對ROS生成及NADPH氧化酶活性的影響*

韓勇，賀滟，郭立榮，劉萬立，趙紅艷，何婭

（遵義醫(yī)學(xué)院，貴州遵義563003）

目的探討20-羥二十烷花生四烯酸（20-HETE）加重大鼠離體心肌缺血再灌注損傷（MIRI）的作用機(jī)制，即20-HETE對活性氧簇（ROS）生成及還原型輔酶Ⅱ（NADPH）的影響。方法將78只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對照組（Con組）、缺血再灌注模型組（IR組）、IR+不同劑量20-HETE（10、30、50 nmol/L）組、IR+20-HETE（50 nmol/L）+夾竹桃麻素（APO）組，每組13只。建立大鼠離體心臟MIRI模型，缺血前在灌流液中加入相應(yīng)劑量的20-HETE。采用Power-Lab/8sp生理記錄儀實(shí)時(shí)監(jiān)測心肌血流動力學(xué)指標(biāo)；氯化三苯基四氮唑（TTC）法檢測心肌梗死面積；二氫乙錠（DHE）熒光探針法檢測心肌組織熒光強(qiáng)度表達(dá)ROS水平；Western blotting檢測NADPH氧化酶亞基p47phox磷酸化水平；細(xì)胞色素C還原法檢測過氧化物生成的產(chǎn)物量表達(dá)NADPH氧化酶活性。結(jié)果20-HETE劑量依賴性地加重了再灌注后心肌損傷，IR+不同劑量20-HETE組大鼠心肌血流動力學(xué)指標(biāo)較IR組顯著下降，心肌梗死面積較IR組顯著增加，ROS的生成較IR組進(jìn)一步增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或0.05）。而灌流液中加入NADPH氧化酶抑制劑APO后，ROS顯著減少，與IR+20-HETE（50 nmol/L）組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與IR組比較，IR+20-HETE（50 nmol/L）+APO組大鼠心臟中p47phox亞基磷酸化水平及NADPH氧化酶活性均有顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論20-HETE可通過激活NADPH氧化酶誘導(dǎo)過量ROS的生成，加重MIRI。

心肌缺血；心肌再灌注損傷；羥基花生四烯酸類；NADPH氧化酶；活性氧簇

心肌缺血再灌注損傷（MIRI）是目前臨床上采用介入手術(shù)（如冠狀動脈內(nèi)支架或經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)球囊成形術(shù)）等手段治療缺血性心肌病時(shí)面臨的主要問題［1］。MIRI的發(fā)病機(jī)制目前仍未得到徹底闡明。隨著對MIRI機(jī)制研究的深入，近年來一種新被發(fā)現(xiàn)的由花生四烯酸代謝生成的內(nèi)源性活性物質(zhì)——20-羥二十烷花生四烯酸（20-hydroxyeicosatetraenoic acid，20-HETE）引起學(xué)者的關(guān)注。有研究發(fā)現(xiàn)在MIRI進(jìn)程中，心肌組織20-HETE水平升高，其合成酶CYP4A和CYP4F表達(dá)和活性顯著增強(qiáng)，抑制20-HETE的生成可改善再灌注后心肌功能的恢復(fù)，而外源性加入20-HETE則加重MIRI［2-3］。以上研究表明20-HETE參與MIRI的發(fā)展進(jìn)程。因此本研究擬通過Langendorff灌流系統(tǒng)建立大鼠離體心臟MIRI模型，觀察20-HETE對心肌組織活性氧簇（reactiveoxygenspecies，ROS）和還原型輔酶Ⅱ（nicotinamide adenosine denudeotide hydro-phosphoric acid，NADPH）氧化酶活性的影響，探討20-HETE加重大鼠離體MIRI的作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物及分組將78只雄性SD大鼠（體質(zhì)量250～300 g，由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供）隨機(jī)分為正常對照組（Con組）、缺血再灌注模型組（IR組）、IR+不同劑量20-HETE（10、30、50 nmol/L）組、IR+20-HETE（50 nmol/L）+夾竹桃麻素（apocynin，APO）組，每組13只。

1.1.2試劑及儀器20-HETE及APO購自美國Sigma公司，ROS檢測試劑盒及NADPH氧化酶活性檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所；特異性p47phox和磷酸化p47phox抗體、辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗（羊抗鼠IgG-HRP）購自圣克魯斯生物技術(shù)公司；其他為國產(chǎn)分析純。Langendorff灌流裝置、PowerLab/8sp生理記錄儀購自澳大利亞ADInstruments公司，DU-600型紫外分光光度計(jì)購自美國Beckman公司，電子分析天平購自德國Sartorius公司，電泳槽、電泳儀、電轉(zhuǎn)系統(tǒng)及曝光機(jī)購自美國Bio-Rad公司。

1.2方法

1.2.1大鼠離體心臟MIRI模型建立實(shí)驗(yàn)前將大鼠置于安靜、自然光、室溫環(huán)境下飼養(yǎng)48 h，自由飲食。腹腔注射烏拉坦（1 g/kg）麻醉SD大鼠，固定大鼠后，沿劍突下肋緣剪開腹壁、膈肌，向上沿腋前線剪開胸壁暴露心臟，剪下心臟并保留3～4 mm主動脈，在含有肝素（50 U/mL）的KH液（NaCl 118.0 mmol/L、NaHCO325.0 mmol/L、Kcl 4.7 mmol/L、KH2PO41.2 mmol/L、MgSO2·7H2O 1.2 mmol/L、CaCl22.0 mmol/L、葡萄糖溶液11.0 mmol/L）中修剪后，迅速將離體大鼠心臟主動脈套管并掛于Langendorff裝置上，進(jìn)行主動脈逆行灌流，控制溫度37℃，灌流液為氧飽和的KH液。待心臟跳動穩(wěn)定后，經(jīng)由左心房插入左心室一個(gè)充水球囊，使用PowerLab系統(tǒng)記錄心肌血流動力學(xué)指標(biāo)。

1.2.2MIRI模型灌注方案及實(shí)驗(yàn)分組處理將大鼠離體心臟于Langendorff灌流裝置系統(tǒng)缺血前平衡20min，待心臟跳動穩(wěn)定后全心缺血35min，各組大鼠離體心臟再灌注15 min后用于檢測ROS水平，再灌注40 min后用于檢測NADPH氧化酶活性，再灌注120 min后用于檢測心肌梗死面積。Con組心臟不作缺血處理，KH液灌注95min；IR組心臟平衡20 min，全心缺血35 min再灌注40 min；IR+20-HETE組心臟缺血前10 min在灌流液中加入不同劑量的20-HETE（10、30、50 nmol/L）；IR+20-HETE+APO組心臟缺血前10 min在灌流液中加入20-HETE（50 nmol/L）及APO（100 μmol/L）。

1.2.3氯化三苯基四氮唑（TTC）法檢測大鼠心肌梗死面積各組大鼠離體心臟再灌注結(jié)束于-20℃冷凍1 h后，進(jìn)行心肌組織切片（厚度2～3 mm），在37℃條件下，于1%TTC的磷酸鹽緩沖液（PBS）中孵育15 min，然后用10%甲醛固定。染色后存活的心肌組織呈紅色，梗死區(qū)呈白色，通過非染色區(qū)域占心室切片總面積比值計(jì)算心肌梗死面積。

1.2.4二氫乙錠（DHE）熒光探針法檢測心肌組織熒光強(qiáng)度表達(dá)ROS水平四組心臟再灌注結(jié)束后，將心肌組織剪成小塊，置于組織包埋劑中，液氮冷凍后切成厚度為10 μm的心肌切片，然后于37℃條件下，在1.6 μmol/L DHE的PBS中避光孵育染色30min，通過激光共聚焦顯微鏡（488nm激發(fā)光，560～660 nm濾波接收）獲取熒光照片。

1.2.5Western blotting檢測p47phox亞基磷酸化水平

三組大鼠離體心臟再灌注結(jié)束后，取心肌組織100 g，提取組織蛋白質(zhì)，采用二喹啉甲酸（BCA）法進(jìn)行蛋白定量。Western blotting檢測NADPH氧化酶p47phox亞基磷酸化水平，具體方法如下：十二烷基硫酸鈉凝膠電泳分離組織提取蛋白，使用半干轉(zhuǎn)儀將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉2 h后，加入一抗p47phox（1∶1 000）及磷酸化p47phox（1∶1 000），4℃下孵育過夜。PBS洗膜后加入HRP標(biāo)記二抗（1∶2 000），37℃孵育1 h，采用增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光法（ECL）檢測試劑盒曝光，采用Quantity One軟件對蛋白質(zhì)條帶進(jìn)行分析。

1.2.6細(xì)胞色素C還原法檢測過氧化物生成的產(chǎn)物量表達(dá)NADPH氧化酶活性三組大鼠離體心臟再灌注結(jié)束后，取心肌組織100 g，提取組織蛋白質(zhì)，采用BCA法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量（終濃度1 mg/mL，100 μL）過程中加入細(xì)胞色素C（500 μmol/L）和NADPH（100 μmol/L），分別在加入和不加入超氧化物歧化酶（SOD，200 U/mL）情況下，室溫孵育30 min，550 nm波長下檢測吸光度，通過不同吸光度值表達(dá)過氧化物產(chǎn)物含量，高鐵細(xì)胞色素C到亞鐵細(xì)胞色素C變化的摩爾吸光系數(shù)（ε）為21 000 L/（mol·cm）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以表示，組間比較采用單因素方差分析（ANOVA）及LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠離體心臟再灌注后各項(xiàng)心肌血流動力學(xué)和心肌梗死面積變化比較大鼠離體心臟再灌注末期，與Con組比較，IR組心臟的各項(xiàng)心肌血流動力學(xué)指標(biāo)缺血再灌注后占缺血前平衡期百分比出現(xiàn)顯著下降，左心室發(fā)展壓（LVDP）下降至（48.6±3.4）%，左心室舒張末期壓（LVEDP）升高至（41.8±3.3）%，左心室內(nèi)壓最大上升或下降速率（±dP/dtmax）分別降低至（51.9±2.1）%和（47.1±3.6）%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與IR組比較，IR+不同劑量20-HETE組劑量依賴性地進(jìn)一步加重了再灌注后心肌血流動力學(xué)指標(biāo)的下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。其中IR+20-HETE（50 nmol/L）組導(dǎo)致心肌血流動力學(xué)指標(biāo)下降顯著。見表1。

離體心臟全心缺血35 min再灌注120 min后，與Con組比較，IR組心肌梗死面積增加，達(dá)到（39.8±2.3）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而加入20-HETE的各組劑量依賴性地增加了再灌注后心肌梗死面積，其中IR+20-HETE（50nmol/L）組心肌梗死面積達(dá)到了（58.1± 4.1）%，與IR組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2四組大鼠離體心臟再灌注后心肌組織ROS生成的變化比較大鼠離體心臟再灌注后，DHE熒光探針法檢測發(fā)現(xiàn)，IR組熒光強(qiáng)度（105.0±3.5）高于Con組（19.0±2.2），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；灌流液中加入20-HETE（50 nmol/L）后心肌組織熒光強(qiáng)度為（145.0± 7.3），較IR組增加了38%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而當(dāng)灌流液中加入NADPH氧化酶的抑制劑APO（100 μmol/L）后，熒光強(qiáng)度降低至（82.0±5.3），減少了43%，與IR+20-HETE（50 nmol/L）組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。四組心肌組織熒光強(qiáng)度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=562.802，P=0.000）。見圖1。

表1　離體心臟再灌注后各組大鼠各項(xiàng)心肌力學(xué)和心肌梗死面積變化比較（）

表1　離體心臟再灌注后各組大鼠各項(xiàng)心肌力學(xué)和心肌梗死面積變化比較（）

注：-表示無此項(xiàng)；與Con組比較，aP＜0.05；與IR組比較，bP＜0.05。

組別n 缺血再灌注后占缺血前平衡期百分比（%）（n=5）-dP/dtmax心肌梗死面積（%）（n=6）Con組IR組IR+20-HETE（10 nmol/L）組IR+20-HETE（30 nmol/L）組IR+20-HETE（50 nmol/L）組1.7±3.1 39.8±2.3a41.8±3.0a48.5±4.2ab58.1±4.1ab258.385 0.000 13 13 13 13 13 F P --LVDP 95.0±2.3 48.6±3.4a44.6±2.2a39.9±4.3ab24.1±7.4ab186.576 0.000 LVEDP 5.4±1.4 41.8±3.3a43.1±4.8a49.7±4.4ab76.0±4.7ab200.962 0.000 +dP/dtmax93.3±1.9 51.9±2.1a50.9±2.1a47.1±3.3ab29.2±6.3ab204.965 0.000 89.4±1.8 47.1±3.6a44.3±3.5a41.3±4.9a26.2±7.9ab124.990 0.000

圖1　四組大鼠離體心臟再灌注后心肌組織熒光照片（200×）

2.3三組大鼠離體心臟再灌注后p47phox亞基磷酸化及NADPH氧化酶活性的變化Western blotting檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IR組心肌組織中磷酸化的p47phox亞基占總p47phox灰度值百分比［（53.5±4.4）%］高于Con組［（22.5±2.3）%］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；當(dāng)灌流液中加入20-HETE（50 nmol/L）后心肌組織中磷酸化的p47phox亞基占總p47phox灰度值百分比增加至（72.7±7.3）%，顯著高于IR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。細(xì)胞色素C還原法檢測發(fā)現(xiàn)，IR組心臟每毫克蛋白中超氧離子（O2-）產(chǎn)物的納摩爾數(shù)由Con組的（11.2±1.2）nmol升高至（18.3±1.4）nmol；IR+20-HETE（50 nmol/L）組大鼠心臟每毫克蛋白中O2-產(chǎn)物的納摩爾數(shù)進(jìn)一步升高至（26.9± 2.8）nmol，較IR組提高了47%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2　三組大鼠離體心臟再灌注后p47phox亞基磷酸化水平和NADPH氧化酶活性變化比較（）

表2　三組大鼠離體心臟再灌注后p47phox亞基磷酸化水平和NADPH氧化酶活性變化比較（）

注：*表示每毫克蛋白中O2-產(chǎn)物的納摩爾數(shù)；-表示無此項(xiàng)；與Con組比較，aP＜0.05；與IR組比較，bP＜0.05。

組別n Con組IR組IR+20-HETE（50 nmol/L）組13 13 13 F P --p47phox磷酸化水平（%）22.5±2.3 53.5±4.4a72.7±7.3ab124.249 0.000 NADPH氧化酶活性*（nmol）11.2±1.2 18.3±1.4a26.9±2.8ab80.007 0.000

3　討論

20-HETE是由細(xì)胞色素P450（CYP450）ω-羥化酶催化花生四烯酸生成的產(chǎn)物，目前研究認(rèn)為其在調(diào)節(jié)腎、腦、骨骼肌和腸系膜等動脈血管平滑肌肌源性收縮中發(fā)揮了重要的作用，是一種非常有效的收縮血管的物質(zhì)［4-6］。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，20-HETE可能參與了再灌注后的心肌損傷。有學(xué)者首先報(bào)道了CYP450酶家族中CYP4A和CPY4F亞型在心肌組織中的表達(dá)，并且在犬的心臟缺血再灌注后，心肌組織中20-HETE的合成和釋放增加，當(dāng)使用20-HETE合成酶抑制劑HET0016或使用20-HETE的拮抗劑20-HEDE阻斷其作用后，可明顯改善心肌功能的紊亂，并減少心肌梗死面積［2-3］。此外，在糖尿病大鼠的心肌缺血再灌注中也發(fā)現(xiàn)，抑制20-HETE的作用可有效促進(jìn)心肌功能的恢復(fù)［7］。相反，外源性加入20-HETE可明顯加重MIRI［2-3］。本研究在大鼠離體心臟MIRI模型上的研究結(jié)果與相關(guān)報(bào)道一致［2-3］，首先發(fā)現(xiàn)20-HETE可劑量依賴性地降低再灌注后心肌功能的恢復(fù)，與IR組比較，50 nmol/L的20-HETE導(dǎo)致心肌再灌注后功能顯著下降，再灌注結(jié)束時(shí)LVDP、±dP/dtmax出現(xiàn)明顯下降，而LVEDP明顯提高；同時(shí)心肌梗死面積進(jìn)一步增加，表明20-HETE參與了MIRI的進(jìn)程，但是20-HETE加重MIRI及降低心肌功能的機(jī)制尚需進(jìn)一步探究。

Gross等［8］報(bào)道，在MIRI進(jìn)程中，抑制20-HETE作用的心肌保護(hù)機(jī)制與激活鉀離子通道的活性有關(guān)，當(dāng)使用腺苷三磷酸（ATP）敏感性鉀通道阻斷劑HMR1098后有效抑制了這種效應(yīng)。而在MIRI誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡方面的研究發(fā)現(xiàn)，CYP450 ω-羥化酶抑制劑的心肌保護(hù)作用與激活細(xì)胞ERK1/2信號通路相關(guān)［9］。另外，Bao等［10］對培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的研究發(fā)現(xiàn)，20-HETE可通過線粒體依賴機(jī)制誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。如上研究為揭示20-HETE加重MIRI提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)，然而MIRI是一個(gè)復(fù)雜的現(xiàn)象，具體機(jī)制尚待深入的研究。

在缺氧和氧化應(yīng)激中，心肌細(xì)胞內(nèi)的ROS水平發(fā)生改變，且ROS被公認(rèn)為是一種重要的介導(dǎo)心血管病理進(jìn)程的因子，如心肌梗死損傷、心肌肥大、心肌重塑和心力衰竭等［11］。近年來研究表明，CYP450酶激活可促進(jìn)ROS生成，并參與多種疾病的發(fā)生，如帕金森病、糖尿病等［12-13］。心臟中潛在的ROS生成來源包括線粒體呼吸鏈、NADPH氧化酶、黃嘌呤氧化酶、一氧化氮合酶等［14-15］，其中NADPH氧化酶是心肌中重要的誘發(fā)過氧化物生成的來源。NADPH氧化酶包括5種亞型，分別是NOX1、NOX2、NOX3、NOX4和NOX5，此外還包括4個(gè)調(diào)節(jié)亞基（p40phox、p47phox、p67phox、rac1/rac2）［16］，其中p47phox亞基磷酸化在激活NADPH氧化酶中起到關(guān)鍵作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)ROS大量地生成，在此基礎(chǔ)上加入20-HETE（50 nmol/L）后心肌組織中的熒光強(qiáng)度進(jìn)一步增加38%，而當(dāng)應(yīng)用NADPH氧化酶抑制劑APO干預(yù)后，再灌注后心肌組織的熒光強(qiáng)度降低至82.0±5.3，減少了43%，與相關(guān)報(bào)道一致［17-18］。接下來為了探究20-HETE誘導(dǎo)的ROS生成是否與其激活NADPH氧化酶相關(guān)，本研究檢測了20-HETE對NADPH氧化酶活性及p47phox亞基磷酸化作用的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IR+20-HETE（50 nmol/L）組心肌組織中磷酸化的p47phox亞基占總p47phox灰度值百分比顯著高于IR組。通過對NADPH氧化酶全酶活性檢測發(fā)現(xiàn)，再灌注后IR+20-HETE（50 nmol/L）組心肌組織每毫克蛋白中O2-產(chǎn)物的納摩爾數(shù)較IR組提高了47%。這些結(jié)果表明，在MIRI進(jìn)程中，20-HETE可以激活心肌細(xì)胞NADPH氧化酶并導(dǎo)致ROS生成增多，與其他組織的研究一致，如在肺動脈上皮細(xì)胞中，20-HETE可增加ROS生成，這種效應(yīng)可被APO和聚乙二醇-超氧化物歧化酶結(jié)合物所阻斷［19］。

綜上所述，本研究通過建立大鼠離體心臟Langendorff灌流模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，20-HETE通過激活NADPH氧化酶誘導(dǎo)ROS生成，加重MIRI這一信號通路，造成心肌功能下降，心肌梗死面積增加，為臨床治療缺血性心肌病提供了一定的理論依據(jù)。

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Effect of 20-HETE on ROS production and NADPH oxidase activity in rats with myocardial ischemia reperfusion injury*

Han Yong，He Yan，Guo Lirong，Liu Wanli，Zhao Hongyan，He Ya
（Zunyi Medical College，Zunyi，Guizhou 563003，China）

ObjectiveTo investigate the reaction mechanism of 20-HETE for aggravating isolated rat myocardial ischemia reperfusion injury（MIRI），i.e.，its influence on the active oxygen speciece（ROS）production and NADPH.Methods

Seventy-eight male Wistar rats were randomly divided into the normal control group（Con group），ischemia-reperfusion model group（IR group），IR＋different doses of 20-HETE groups（10，30，50 nmol/L）and IR+20-HETE（50 nmol/L）+apocynin（APO）group，13 cases in each group.The isolated rat heart MIRI model was established.Corresponding dose of 20-HETE was added into the perfusion solution before ischemia.The myocardial ischemic hemodynamic indexes were realtimely monitored by the Powerlab/ 8sp physiological grapher；the myocardial infarction area was measured by the TTC method；the DHE fluorescent probe method was used to detect myocardial tissue fluorescence intensity for expressing the ROS level.The phosphorylation level of p47phox as subunit of NADPH oxidase was detected by the Western blotting；the cytochrome C reduction was used to detect peroxide generated product quantity for expressing the ROS level.Results20-HETE dose-dependently aggravated ischemia reperfusion（IR）-induced myocardial injury.Compared with the IR group，the myocardial hemodynamic indexes in the IR+different doses of 20-HETE groups were significantly decreased，while the myocardial infarction area was significantly increased，the ROS production was further increased，the differences were statistically significant（P＜0.01 or P＜0.05）.After adding APO as an inhibitor of NADPH oxidase，ROS was significantly decreased，which showed the statistical difference compared with the IR+20-HETE（50 nmol/L）group（P＜0.05）.Compared with the IR group，the cardiac phosphorylation level of p47phox subunit and NADPH oxidase activity in the IR+20-HETE（50 nmol/L）+APO group were significantly increased，the differences were statistically significant（P＜0.05）. Conclusion20-HETE aggravates MIRI by activating NADPH oxidase to induce excessive ROS production.

Myocardial ischemia；Myocardial reperfusion injury；Hydroxyeicosatetraenoic acids；NADPH oxidase；Reactive oxygen species

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.18.001

A

1009-5519（2016）18-2781-04

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81460040）；貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目（黔科合LH字［2014］7544號）。作者簡介：韓勇（1974-），博士研究生，主要從事心肌缺血及心肌梗死機(jī)制的研究。

（2016-06-01）