老年乙肝及HBV相關(guān)肝硬化患者外周血Th17細(xì)胞水平與IL-17、α-SMA及肝功能的相關(guān)性研究

伍建業(yè) 楊苗苗 錢賢峰江蘇省常州市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇常州213000

老年乙肝及HBV相關(guān)肝硬化患者外周血Th17細(xì)胞水平與IL-17、α-SMA及肝功能的相關(guān)性研究

伍建業(yè) 楊苗苗 錢賢峰
江蘇省常州市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇常州213000

目的分析老年乙肝（CHB）和乙肝病毒（HBV）相關(guān)肝硬化患者外周血輔助性T細(xì)胞17（Th17）臨床意義，探討Th17對(duì)相關(guān)疾病的診斷價(jià)值。方法將我院收治的老年HBV感染者按病變類型分為CHB組及HBV相關(guān)性肝硬化組，另選80例老年健康體檢者納入正常組。比較各組Th17頻率、白細(xì)胞介素-17（IL-17）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)與分布，探討Th17、IL-17、α-SMA表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果HBV相關(guān)肝硬化組Th17頻率、IL-17、IL-17 mRNA及α-SMA水平顯著高于CHB組，CHB組上述指標(biāo)顯著高于正常組（P＜0.05）。CHB組ALT、HBV DNA載量顯著高于HBV相關(guān)性肝硬化組，而TBIL顯著低于后者，兩組ALT、TBIL均顯著高于正常組（P＜0.05）。相關(guān)性分析表明，Th17頻率與IL-17、α-SMA呈正相關(guān)（P＜0.05），與ALT、TBIL、HBV DNA載量無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論老年肝病患者Th17頻率與肝臟炎癥程度變化密切關(guān)聯(lián)，檢測(cè)Th17頻率有助于早期明確疾病嚴(yán)重程度，預(yù)測(cè)病情轉(zhuǎn)歸。

乙型肝炎病毒；慢性乙型肝炎；肝硬化；輔助性T細(xì)胞17；α-平滑肌肌動(dòng)蛋白

乙型肝炎病毒（HBV）感染導(dǎo)致的慢性乙型肝炎（CHB）是我國(guó)常見病、高發(fā)?。?］。研究表明，輔助性T細(xì)胞17（Th17）可產(chǎn)生大量白細(xì)胞介素-17（IL-17），并參與肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展環(huán)節(jié)［2］。已有學(xué)者證實(shí)，Th17細(xì)胞頻率改變、Th17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）比例失衡與多種免疫性疾病的發(fā)病密切關(guān)聯(lián)［3］。作為以免疫病理為主要發(fā)病機(jī)制的疾病，CHB和HBV相關(guān)性肝硬化亦可能與Th17細(xì)胞頻率改變存在一定相關(guān)性。老年人群因其肝功能的自然衰減，其肝病轉(zhuǎn)歸對(duì)其生命健康有著至關(guān)重要的影響。基于為老年乙肝及

1 資料與方法

乙肝相關(guān)疾病的臨床診治提供高效診斷依據(jù)的目的，本文選取我院收治的174例老年HBV感染者及同期80名老年健康體檢者，進(jìn)行了對(duì)照研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.1 一般資料

選擇我院2013年10月～2015年10月收治的174例老年HBV感染者，按照其病變類型分為CHB組（n=77）及HBV相關(guān)性肝硬化組（n=97），另選同期80健康體檢者納入正常組。CHB組男41例，女36例；年齡65～83歲，平均（69.26±12.37）歲；HBV相關(guān)肝硬化組男52例，女45例；年齡67～86歲，平均（68.83± 9.26）歲；正常組男42例，女38例；年齡65～85歲，平均（66.94±10.31）歲。各組年齡、性別等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本臨床研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均知情同意且自愿參與。

表1 各組Th17細(xì)胞頻率、IL-17表達(dá)水平、α-SMA表達(dá)水平比較（±s）

表1 各組Th17細(xì)胞頻率、IL-17表達(dá)水平、α-SMA表達(dá)水平比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與CHB組比較，#P＜0.05

組別nTh17細(xì)胞頻率（%）IL-17（pg/mL）IL-17 mRNAα-SMA（AOD）CHB組aHBV相關(guān)肝硬化組b正常組cF值（P值）t值（P值）77 97 80 a vs b b vs c a vs c 2.14±0.33*2.51±0.29*#1.09±0.17#699.663（0.000）-7.863（0.000）38.649（0.000）25.198（0.000）21.69±4.33*32.48±8.15*#11.65±3.30#277.086（0.000）-10.497（0.000）21.448（0.000）16.379（0.000）2.09±0.45*3.31±0.83*#1.00#362.694（0.000）-11.610（0.000）24.881（0.000）21.668（0.000）0.12±0.03*0.57±0.10*#0.03±0.01#1823.799（0.000）-38.129（0.000）48.077（0.000）25.409（0.000）

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

HBV感染者納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥65歲；②參照《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》［4］確診CHB或HBV相關(guān)性肝硬化；③6個(gè)月內(nèi)無(wú)抗病毒或免疫調(diào)節(jié)治療史；④未合并其他肝炎病毒感染。健康體檢者納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥65歲；②無(wú)肝炎病史；③HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)陰性。排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡＜65歲；②合并心、肝、腎等其他重要臟器嚴(yán)重病變；③合并HIV感染、惡性腫瘤患者。

1.3 方法

（1）Th17細(xì)胞頻率：受試者空腹采靜脈血3 mL，使用Calibur流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）檢測(cè)CD4+、IFNγ-、IL17+、IL22-，即為Th17細(xì)胞頻率［5］。（2）IL-17：取離心血漿以酶免法檢測(cè)IL-17水平；取肝組織以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)IL-17 mRNA。（3）α-SMA：取肝組織石蠟包埋標(biāo)本，以SP法依次切片—脫蠟—水化—修復(fù)—一抗、二抗溫育—顯色—復(fù)染—脫水—透明—封片，以PBS代替一抗為空白對(duì)照，胞漿呈棕黃色即可判定為陽(yáng)性細(xì)胞［6］，由Image 6.0軟件計(jì)算平均光密度（AOD）。（4）其他指標(biāo)：使用C8000生化分析儀（美國(guó)雅培公司）檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）等指標(biāo)，使用ABI7300型熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物及HBV DNA載量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以［n（%）］表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（x±s）表示，行t檢驗(yàn)；采用Pearson法或Spearman法分析Th17細(xì)胞頻率與ALT、TBIL等其他指標(biāo)的相關(guān)性；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Th17細(xì)胞頻率、IL-17表達(dá)水平、α-SMA表達(dá)水平比較

HBV相關(guān)性肝硬化組Th17細(xì)胞頻率顯著高于CHB組，CHB組Th17細(xì)胞頻率顯著高于正常組（P＜0.05）。以正常組肝組織IL-17 mRNA相對(duì)表達(dá)量為1.00，HBV相關(guān)性肝硬化組血漿IL-17、肝組織IL-17 mRNA表達(dá)顯著高于CHB組，CHB組上述指標(biāo)顯著高于正常組（P＜0.05）。HBV相關(guān)肝硬化組肝組織α-SMA表達(dá)水平顯著高于CHB組，CHB組肝組織α-SMA表達(dá)水平顯著高于正常組（P＜0.05）。見表1。

2.2 各組受試者其他指標(biāo)比較

CHB組ALT、HBV DNA載量顯著高于HBV相關(guān)肝硬化組，而TBIL顯著低于后者，兩組患者ALT、TBIL均顯著高于正常組（P＜0.05）。見表2。

表2 各組受試者其他指標(biāo)比較（±s）

表2 各組受試者其他指標(biāo)比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與CHB組比較，#P＜0.05

組別nALT（U/L）TBIL（μmol/L）HBV DNA載量（IU/mL）CHB組aHBV相關(guān)肝硬化組b正常組cF值（P值）t值（P值）77 97 80 5.94±0.81 3.73±0.59#a vs b b vs c a vs c 182.84±17.35*65.72±10.41*#20.39±4.55#3975.798（0.000）55.164（0.000）36.187（0.000）80.914（0.000）35.59±11.36*329.50±83.82*#12.29±4.07#1030.120（0.000）-30.529（0.000）-34.176（0.000）17.234（0.000）20.808（0.000）

2.3 Th17細(xì)胞頻率與各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性

相關(guān)性分析示：Th17細(xì)胞頻率與IL-17、α-SMA呈正相關(guān)（P＜0.05），與ALT、TBIL、HBV DNA載量無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05）。見表3。

表3 Th17細(xì)胞頻率與各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

CHB的主要特征為肝臟慢性炎癥與繼發(fā)性纖維化，過往觀點(diǎn)認(rèn)為，CHB患者機(jī)體對(duì)HBV清除能力的不足是導(dǎo)致HBV感染慢性化的主要原因，其免疫機(jī)制與Th1和Th2免疫應(yīng)答失調(diào)有一定關(guān)聯(lián)［7］。最新研究表明，CHB患者外周血Th1細(xì)胞比例與健康人群無(wú)明顯差別，且與疾病嚴(yán)重程度亦無(wú)較大關(guān)聯(lián)，提示HBV感染的慢性化過程并非僅受單一因素影響，可能存在其他免疫機(jī)制影響肝臟損傷進(jìn)程［8］。

作為一種具有促炎作用的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群，Th17可促進(jìn)IL-17等炎癥介質(zhì)分泌，近年來(lái)大量研究證實(shí)了Th17在自身免疫性疾病、腫瘤及感染性疾病發(fā)生與轉(zhuǎn)歸中扮演的重要角色［9］。本研究結(jié)果示：HBV相關(guān)性肝硬化組外周血Th17細(xì)胞頻率顯著高于CHB組，CHB組外周血Th17細(xì)胞頻率顯著高于正常組，說(shuō)明隨著HBV感染者肝臟損傷程度的加劇，其Th17細(xì)胞頻率逐漸上升。與此同時(shí)，受試者IL-17、IL-17 mRNA變化呈現(xiàn)相同趨勢(shì)。IL-17是Th17分泌的最重要效應(yīng)因子，其受體在體內(nèi)有廣泛表達(dá)，IL-17可誘導(dǎo)IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、趨化因子表達(dá)增加，促進(jìn)局部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)與組織損傷［10］。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，外周血Th17細(xì)胞頻率與IL-17表達(dá)水平呈正相關(guān)，表明Th17可通過促進(jìn)IL-17表達(dá)，在肝臟損傷的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

肝星狀細(xì)胞（HSC）激活是HBV相關(guān)肝硬化的主要病理特征，主要由長(zhǎng)期進(jìn)行性、彌漫性肝損害導(dǎo)致，這一過程的標(biāo)志為α-SMA高表達(dá)［11］。本次研究中隨著肝損傷的加重，肝組織α-SMA表達(dá)水平逐漸增高，印證了上述結(jié)論。同時(shí)，本研究提示外周血Th17細(xì)胞頻率與肝組織α-SMA表達(dá)亦呈正相關(guān)，與鄭超等［12］研究結(jié)論一致，表明Th17細(xì)胞亦參與了α-SMA高表達(dá)改變過程，考慮與Th17細(xì)胞可能參與HSC激活有關(guān)［13］。

有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，外周血Th17細(xì)胞頻率與血清ALT呈一定相關(guān)性［14］，但本研究結(jié)果示，外周血Th17與ALT、TBIL、HBV DNA載量均無(wú)明顯相關(guān)性，與上述研究結(jié)論存在一定出入，考慮與本研究CHB患者多處于輕度階段，Th17細(xì)胞頻率與ALT等肝功能指標(biāo)變化的關(guān)聯(lián)性不夠明顯有關(guān)。此外，Hobbs等［15］指出，肝損傷部位Th17細(xì)胞聚集增多，且其聚集程度與炎癥狀態(tài)呈正相關(guān)，其原因?yàn)镠BV抗原誘導(dǎo)及細(xì)胞壞死后大量細(xì)胞因子激活Th17細(xì)胞并進(jìn)一步促進(jìn)免疫反應(yīng)。因此，針對(duì)Th17細(xì)胞的靶向調(diào)節(jié)有望為CHB及HBV相關(guān)性肝硬化的治療提供新的策略。

綜上所述，隨著CHB及HBV相關(guān)性肝硬化患者肝損傷程度的加劇，其外周血Th17細(xì)胞頻率顯著上升，Th17細(xì)胞誘導(dǎo)的IL-17與α-SMA分泌可能是導(dǎo)致肝損傷發(fā)生、發(fā)展的主要原因，故定期檢測(cè)Th17細(xì)胞頻率有望早期判斷疾病嚴(yán)重程度，為患者病情的控制提供參考。

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Correlation study of Th17 cells，IL-17，α-SMA and liver function in elderly patients with hepatitis B and hepatitis B virus related cirrhosis

WU JianyeYANG MiaomiaoQIAN Xianfeng
Department of Gastroenterology，Third People's Hospital of Changzhou in Jiangsu Province，Changzhou213000，China

Objective To analyze the effect of Th17 of patients with CHB and HBV related cirrhosis，and investigate the value of Th17 for related diseases.Methods Elderly patients with HBV infection were divided into CHB group and HBV related cirrhosis group.80 healthy persons were selected as normal group.The Th17 frequency，IL-17，α-SMA of each group were compared and their correlation was investigated.Results The Th17 frequency，IL-17，IL-17 mRNA，α-SMA in HBV related cirrhosis group were higher than CHB group，also higher than normal group（P＜0.05）.The ALT，HBV DNA loads in CHB group were higher，the TBIL was lower than HBV related cirrhosis group，while the ALT and TBIL in the former two groups were higher than normal group（P＜0.05）.Correlation analysis showed that Th17 frequency was positively correlated with IL-17 and α-SMA（P＜0.05），it was not correlated with ALT，TBIL，HBV DNA loads（P＞0.05）.Conclusion The Th17 frequency of elderly patients with liver disease increase gradually and is closely correlated with the changes of liver inflammation，detection of the Th17 frequency can help to identify the disease severity and predict the prognosis.

Hepatitis B virus；Chronic hepatitis B；Cirrhosis；T helper cell 17；α-smooth muscle actin

R512.62

B

1673-9701（2016）26-0037-03

2016-06-30）