• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    在線固相萃取-毛細(xì)管高效液相色譜聯(lián)用測定奶酪中的生物胺

    2016-11-09 08:32:41楊?yuàn)檴?/span>楊亞楠李雪霖張燕
    分析化學(xué) 2016年3期
    關(guān)鍵詞:生物

    楊?yuàn)檴櫋顏嗛±钛┝亍堁?/p>

    (食品營養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津科技大學(xué),天津300457)

    在線固相萃取-毛細(xì)管高效液相色譜聯(lián)用測定奶酪中的生物胺

    楊?yuàn)檴櫁顏嗛钛┝貜堁?

    (食品營養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津科技大學(xué),天津300457)

    采用雙二元泵毛細(xì)管液相色譜,通過六通閥實(shí)現(xiàn)了樣品的在線凈化與分離定量的自動切換,建立了同時(shí)測定奶酪中的15種生物胺的在線固相萃取-毛細(xì)管高效液相色譜聯(lián)用方法。通過優(yōu)化毛細(xì)管高效液相色譜的分離條件,考察在線固相萃取流動相的組成、上樣溶液pH值以及六通閥的切換時(shí)間對生物胺回收率的影響,確定最佳分析條件為:5%乙腈-水作為固萃柱(Zorbax SB-C18)的流動相,上樣溶液pH=11,上樣3 min后切換六通閥。采用內(nèi)標(biāo)法定量,15種生物胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為0.25~50.0 mg/L,檢出限(LOD)為0.05~0.25 mg/L,定量限(LOQ)為0.15~0.80 mg/L。除了甲胺、乙胺、3-甲基丁胺和5-羥基色胺外,其余生物胺的不同添加水平(1,20和40 mg/kg)下的加標(biāo)回收率為79.6%~118.7%;除3-甲基丁胺和5-羥基色胺外,其余生物胺的RSD在0.3%~14.9%之間,可用于奶酪中多種生物胺的快速檢測。

    在線固相萃取;毛細(xì)管高效液相色譜;生物胺;奶酪

    1 引言

    生物胺是一類低分子量的堿性含氮有機(jī)物,是生物活細(xì)胞中不可缺少的活性組分[1],廣泛存在于各類食品中,尤其是富含蛋白質(zhì)的食品和發(fā)酵類食品。然而,當(dāng)大量攝入或自身解毒能力不足時(shí),就會對人體的神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)造成傷害,甚至危及生命。其中,組胺的毒性最大。動物機(jī)體內(nèi)的二胺氧化酶及組胺轉(zhuǎn)甲基酶都可降解組胺,而腐胺和尸胺可抑制這兩種酶的代謝作用,從而增強(qiáng)組胺的毒性,且這兩種胺能夠與亞硝酸鹽反應(yīng)產(chǎn)生亞硝胺,具有潛在的致癌性[2]。生物胺主要是由于微生物產(chǎn)生的脫羧酶[3]使氨基酸脫羧生成的,因此生物胺含量與微生物污染程度有關(guān),成為食品新鮮度的評價(jià)指標(biāo)。干酪含有豐富的氨基酸,在長期的發(fā)酵過程中如果有腐敗微生物污染[4],則會產(chǎn)生大量生物胺,存在安全風(fēng)險(xiǎn)?;谏锇肪哂械陌踩:π约白鳛槭称沸迈r度評價(jià)指標(biāo)的重要性[5,6],建立一種簡單、快速、準(zhǔn)確的生物胺檢測方法具有重要意義。

    目前,食品樣品中生物胺的檢測方法有酶聯(lián)免疫法(ELISA)[7~10]、高效液相色譜法[11~13]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[14,15]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[16~18]、離子色譜法[19~21]、薄層色譜法[22~24]以及電泳法[25,26]等。文獻(xiàn)中多采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測,用液/液萃取或離線固相萃取進(jìn)行富集凈化[27~29]。但是都需要手工操作,重現(xiàn)性較差;花費(fèi)時(shí)間較多,降低了樣品前處理效率;耗費(fèi)大量的有機(jī)溶劑,且固相萃取柱為一次性使用,成本高。張國梁等[30]采用離線固相萃取的方式,利用高效液相色譜建立了測定干酪中的6種生物胺,本研究采用在線固相萃取的方式,簡化了樣品的前處理操作,減少了手工操作的誤差;孫寧等[31]建立了高效液相色譜檢測干酪中的5種生物胺,而本方法通過優(yōu)化色譜分離條件,可以實(shí)現(xiàn)15種生物胺的分離與定量分析,提高了分析效率。

    本研究通過對毛細(xì)管液相色譜條件的優(yōu)化,建立了奶酪中生物胺的準(zhǔn)確、快速的檢測方法。采用在線固相萃取進(jìn)行樣品的凈化,提高了分析效率,顯著降低了基質(zhì)效應(yīng),提高了檢測的準(zhǔn)確度。

    2 實(shí)驗(yàn)部分

    2.1儀器與試劑

    Agilent 1200系列毛細(xì)管高效液相色譜儀,配有兩個(gè)雙元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、六通閥、DAD檢測器(美國Agilent公司);UC-6200超聲儀(美國美瑞泰克公司);5804R離心機(jī)(德國Eppendorf公司)。固相萃取柱Zorbax SB-C18柱(35 mm×0.5mm,5μm),分析柱Zorbax SB-C18柱(150mm×0.5mm,5μm)均購自美國Agilent公司;實(shí)驗(yàn)用水均為超純水(美國Millipore公司);IKA MS3渦旋振蕩儀(德國IKA公司);MA-4ACE破碎勻漿儀(日本Nihonseiki Kaisha公司)。

    甲胺鹽酸鹽(Methylamine hydrochloride)、乙胺鹽酸鹽(Ethylamine hydrochloride)、色胺(Tryptamine)、丁胺(Butylamine)、苯乙胺(Phenylethylamine)、3-甲基丁胺(3-methylbutanamine)、戊胺(Amylamine)、腐胺二鹽酸鹽(Putrescine dihydrochloride)、尸胺二鹽酸鹽(Cadaverine dihydrochloride)、組胺二鹽酸鹽(Histamine dihydrochloride)、章魚胺(Octopamine)、5-羥基色胺鹽酸鹽(5-hydroxy-tryptamine hydrochloride)、酪胺(Tyramine)、精胺(Spermidine)、亞精胺(Spermine)、1,7-二氨基庚烷(1,7-Diaminoheptane)、丹磺酰氯(Dansyl chloride),均購自美國Sigma-Aldrich公司;乙腈(HPLC級,美國Merck公司)。

    2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液及衍生試劑的配制

    生物胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制:準(zhǔn)確稱取各種生物胺10.00 mg,用0.1 mol/L HCl定容至10 mL,配制成1000 mg/L的生物胺的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,4℃保存?zhèn)溆茫褂们?,?.1 mol/L HCl將生物胺的標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋至適當(dāng)濃度的中間工作液、標(biāo)準(zhǔn)工作液以及混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

    丹磺酰氯溶液(5 mg/mL):稱取250 mg丹磺酰氯,以丙酮溶解并定容至50 mL,現(xiàn)用現(xiàn)配。

    2.3樣品前處理

    稱取5.00 g奶酪,加200μL 100 mg/kg的內(nèi)標(biāo)物1,7-二氨基庚烷,用破碎勻漿儀將奶酪粉碎,加入10 mL甲醇,蝸旋振蕩1 min,超聲提取30 min,于4℃,10000 g離心10 min,將上清液過濾,剩余的殘?jiān)僦貜?fù)提取一次,合并兩次所得的上清液,在40℃下減壓蒸干后用1 mL 0.1 mol/L HCl復(fù)溶,待衍生。

    2.4生物胺的衍生

    取生物胺的標(biāo)準(zhǔn)工作液或樣品提取液1 mL于5 mL容量瓶中,加入200μL 2 mol/L NaOH、300μL飽和NaHCO3溶液,混合均勻后加入4 mL 5 mg/L丹磺酰氯溶液,混合均勻,在60℃水浴中加熱15 min,每隔5 min混勻一次,衍生完成后,立即加入200μL 25%(m/m)氨水,以除去未反應(yīng)的丹磺酰氯,靜置20 min后,40℃下氮吹至5 mL,此時(shí)pH=11。

    2.5在線固相萃取的流程

    基于Agilent1200系列的毛細(xì)管液相色譜的雙二元泵系統(tǒng),分析流程如圖1所示。初始閥的位置為1-2,樣品在固相萃取柱上在線凈化,然后通過六通閥切換,閥位置為1-6相連,此時(shí),固相萃取柱與分析柱相串聯(lián),泵2的流動相將固相萃取柱上的目標(biāo)物反沖至分析柱上,進(jìn)行分離檢測。

    2.6色譜條件

    在線固相萃取(On-line SPE):固相萃取柱Zorbax SB-C18柱(35 mm×0.5 mm,5μm);5%乙腈-水為流動相等度洗脫,流速10μL/min;進(jìn)樣體積1μL;六通閥的切換時(shí)間見表1。

    分析:分析柱 Zorbax SB-C18柱(150 mm× 0.5 mm,5μm);流動相為超純水和乙腈;流速10μL/min;柱溫35℃;檢測波長為245 nm;梯度洗脫條件見表1。

    3 結(jié)果討論

    3.1色譜分離條件的選擇

    選擇對堿性物質(zhì)具有良好保留特性和分離能力的SB-C18色譜柱作為分析柱,對生物胺進(jìn)行分離,分別采用乙腈-水(含10 mmol/L乙酸銨)、乙腈-水(含10 mmol/L K2PO4)、乙腈-水(含5 mmol/ L乙酸銨和5 mmol/L K2PO4)、乙腈-水作為分析柱的流動相,進(jìn)行梯度洗脫條件優(yōu)化。結(jié)果表明,上述體系均能使目標(biāo)物得到很好的分離,但是乙腈-水體系加入乙酸銨,目標(biāo)物的響應(yīng)值降低;加入K2PO4對大部分生物胺的響應(yīng)值有所提高,但是會抑制亞精胺、精胺的響應(yīng)值;加入兩種鹽的混合體系,顯著抑制了精胺的響應(yīng)值。因此,選用乙腈-水體系為分析柱的流動相,進(jìn)一步優(yōu)化了流動相的梯度洗脫程序、流動相的pH值、流速及柱溫等色譜分離條件,已達(dá)到最佳的分離效果和靈敏度。

    表1 在線固相萃取梯度洗脫程序及閥切換時(shí)間Table 1 Gradient program of online solid phase extraction and valve switching

    15種生物胺混合標(biāo)準(zhǔn)品在優(yōu)化后的色譜分離條件下分析得到的色譜圖見圖2。

    圖2 15種生物胺的色譜分離圖Fig.2 Chromatogram of 15 biogenic amines(BAs) 1.甲胺;2.乙胺;3.色胺;4.丁胺;5.苯乙胺;6.3-甲基丁胺; 7.戊胺;8.腐胺;9.尸胺;10.組胺;11.章魚胺;12.5-羥基色胺;13.酪胺;14.亞精胺;15.精胺;IS.內(nèi)標(biāo)。1.Methylamine;2.Ethylamine;3.Tryptamine;4.Butylamine; 5.2-phenylethylamine;6.3-methylbutanamine;7.Amylamine; 8.Putrescine;9.Cadaverine;10.Histamine;11.Octopamine; 12.5-hydroxytryptamine;13.Tyramine;14.Spermidine;15.Spermine;IS:Internal standard.

    3.2在線固相萃取條件的優(yōu)化

    分別改變在線固相萃取的流動相,上樣溶液pH值以及閥切換時(shí)間,采用建立的毛細(xì)管液相色譜方法測定不同固相萃取條件下洗脫得到的生物胺含量,以生物胺回收率(測得的生物胺量除以上樣量所得百分?jǐn)?shù))評價(jià)生物胺在固相萃取柱上的吸附程度。

    在線固相萃取的流動相起著活化固萃柱的作用,同時(shí)對目標(biāo)物在固萃柱上的吸附及雜質(zhì)的分離起著重要作用。采用等度洗脫方式,分別以5%,10%,15%和20%的乙腈-水為流動相,考察了生物胺在固萃柱上的吸附行為。結(jié)果表明,隨著乙腈濃度的增大,生物胺的損失增大。這是由于上樣過程中高濃度有機(jī)溶劑減小了固相萃取柱對生物胺的吸附,增加了對生物胺的洗脫力,因此,洗脫至分析柱上的生物胺減少,造成回收率降低。5%乙腈-水為流動相時(shí),生物胺的回收率達(dá)到82.2%~128.8%,因此選擇5%乙腈-水溶液為固相萃取柱的流動相。

    上樣溶液pH值影響生物胺衍生物的存在狀態(tài),進(jìn)而影響生物胺在固萃柱上的吸附行為,從而可能會影響生物胺的保留時(shí)間以及儀器的響應(yīng)值。因此進(jìn)一步研究了上樣溶液pH值(8,9,10,11和12)對生物胺回收率的影響。結(jié)果表明,pH=8時(shí),5-羥基色胺、精胺的RSD均大于15%,這可能是因?yàn)樵诖藀H值下,5-羥基色胺與精胺的衍生產(chǎn)物不穩(wěn)定,造成了檢測結(jié)果的偏差較大;pH=9時(shí),精胺回收率僅為67.59%,損失嚴(yán)重,可能是由于精胺的特殊結(jié)構(gòu)造成,該衍生條件下精胺的兩個(gè)仲胺可能未被丹磺酰氯衍生,仲胺在pH 9時(shí)極性較強(qiáng),減弱了精胺衍生物在固萃柱上的吸附力;pH=10時(shí),戊胺回收率高達(dá)151.4%;pH=12時(shí),甲胺、色胺、苯乙胺的回收率均大于130.8%,可能是因?yàn)樵損H值下,不同生物胺的儀器響應(yīng)值均不同程度增加,造成個(gè)別生物胺測定結(jié)果偏高;pH=11時(shí),各種生物胺的回收率為87.8%119.8%,RSD為4.4%~9.0%,回收率和重現(xiàn)性均較好。因此,選擇上樣溶液的pH=11。

    考察了上樣后閥切換時(shí)間(1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5和4.0 min)對生物胺回收率的影響。時(shí)間越短,生物胺的回收率越低,這是因?yàn)榍袚Q時(shí)間短,固相萃取柱未捕集到全部的分析物,閥切換后,未流經(jīng)固相萃取柱的分析物流入廢液,導(dǎo)致上樣不完全,造成回收率降低。隨著閥切換時(shí)間延長,生物胺的回收率逐漸升高,但是閥切換的時(shí)間(4.0 min)過長,就會將吸附到固萃柱的生物胺重新洗脫下來而排入廢液,造成損失。因此,選擇3 min為最佳的閥切換時(shí)間。

    15種生物胺的混合標(biāo)準(zhǔn)品在優(yōu)化后的在線固萃和色譜分離條件下分析得到的色譜圖見圖3。

    圖3 15種生物胺的在線固相萃取與毛細(xì)管液相聯(lián)用的色譜分離圖Fig.3 Chromatogram of 15 BAs using on-line SPE combined with capillary HPLC圖中峰號同圖1。The peak numbers are the same as in Fig.2.

    3.3方法的線性范圍與檢出限及定量限

    取不同濃度的15種生物胺標(biāo)準(zhǔn)品的混合溶液,經(jīng)丹磺酰氯衍生后,利用優(yōu)化后條件檢測,以生物胺的濃度為橫坐標(biāo),各個(gè)生物胺衍生物的響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值的比值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果表明(表2),15種生物胺在0.25~50.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.9981。逐漸稀釋標(biāo)準(zhǔn)品并進(jìn)行測定,峰高為3倍噪聲時(shí)對應(yīng)的標(biāo)品濃度為檢出限(LOD),定量限(LOQ)為能夠準(zhǔn)確進(jìn)行定量的最低濃度(RSD<15%)。在本方法對15種生物胺的檢出限為0.05~0.25 mg/L,定量限為0.15~0.80 mg/L。

    表2 15種生物胺的on-line SPE與毛細(xì)管高效液相色譜聯(lián)用的檢測方法的分析特征量Table 2 Analytical characteristic data of the on-line SPE combined microcolumn HPLCmethod for the determination of 15 BAs

    3.4奶酪實(shí)際樣品和回收率的測定

    為了進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性和實(shí)用性,從超市中購買了兩種進(jìn)口奶酪和兩種國產(chǎn)奶酪,共4種樣品,每種樣品均設(shè)不添加、添加1,20和40 mg/kg濃度水平的15種生物胺標(biāo)品,添加200μL 100 mg/kg的內(nèi)標(biāo),采用本方法進(jìn)行測定(表3)。圖4是某國產(chǎn)奶酪的色譜圖。結(jié)果表明,4種樣品中均檢出不同種類及含量的生物胺,其中,4種樣品均檢測到甲胺、色胺、戊胺、腐胺、亞精胺、精胺,3種樣品檢測到苯乙胺、尸胺和酪胺,2種樣品檢測到了乙胺、丁胺、3-甲基丁胺、5-羥基色胺、組胺,只有1種樣品檢測到了章魚胺。

    除甲胺、乙胺、3-甲基丁胺和5-羥基色胺的測定結(jié)果偏差稍大外,其余生物胺的加標(biāo)回收率在79.65%~118.66%之間;除3-甲基丁胺和5-羥基色胺外,RSD值在0.3%~14.9%范圍內(nèi),表明本方法有較好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,可以用于實(shí)際樣品中15種生物胺的同時(shí)分析檢測。

    表3 奶酪中生物胺的含量及不同添加濃度下的平均回收率(%,RSD,n=3)Table 3 BAs contents in cheese samples(mg/kg)and recovery of cheese samples at different spiked levels(%,RSD)

    續(xù)表3 (Continued to Table 3)

    圖4 國產(chǎn)奶酪1的在線固相萃取-毛細(xì)管液相色譜聯(lián)用測定的色譜圖Fig.4 Chromatogram of Domestic cheese 1 samples by on-line SPE combined with capillary HPLC 1.甲胺;2.乙胺;3.色胺;4.丁胺;7.戊胺;8.腐胺;9.尸胺;14.亞精胺;15.精胺;IS.內(nèi)標(biāo)。1.Methylamine;2.Ethylamine;3.Tryptamine;4.Butylamine; 7.Amylamine;8.Putrescine;9.Cadaverine;14.Spermidine; 15.Spermine;IS:Internal standard.

    4 結(jié)論

    本研究建立了在線固相萃取與毛細(xì)管液相色譜聯(lián)用同時(shí)測定奶酪中15種生物胺的分析方法,通過優(yōu)化在線固相萃取的關(guān)鍵參數(shù)及色譜分離條件,提高了分析方法的精密度重現(xiàn)性及分析效率。本研究為食品中生物胺的快速分析提供了新的技術(shù)手段。

    References

    1Teti D,VisalliM,McNair H.J.Chromatogr.B,2002,781(1-2):107-149

    2Wei F,Xu X L,Zhou G H,Zhao G M,Li C B,Zhang Y J,Chen L Z,Qi J.Meat.Sci.,2009,81(3):451-455

    3nal A,Tekkeli S F K,nal C.Food Chem.,2013,138(1):509-515

    4MA Ling,LIU Hui-Ping.Journal of Dairy Science and Technology,2007,123(2):55-58馬玲,劉會平.乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2007,123(2):55-58

    5Loret S,Deloyer P,Dandrifosse G.Food Chem,2005,89(4):519-525

    6Vinci G,Antonelli M L.Food Control,2002,13(8):519-524

    7Marcoba A,Polo M C,Martin-Alvarez P J,Moreno-Arribas M V.Food Res Int,2005,38(4):387-394

    8Hungerford J,Wu W H.Food Control,2012,25(2):448-457

    9Muscarella M,Lo Magro S,Campaniello M,Armentano A,Stacchini P.Food Control,2013,31(1):211-217

    10DadkovE,Krízek M,PeliknovT.Food Chem.,2009,116(1):365-370

    11Preti R,AntonelliM L,Bernacchia R,Vinci G.Food Chem.,2015,187(15):555-562

    12Ramos R M,Valente IM,Rodrigues JA.Talanta,2014,124(2):146-151

    13SUN Yan-Ni,ZHANG Ning,WANG Cui-Ling,LIU Zhu-Lan,WANG Zheng,LIU Jian-Li.Chinese J.Anal.Chem.,2014,42(2):273-277孫艷妮,張寧,王翠玲,劉竹蘭,王征,劉建利.分析化學(xué),2014,42(2):273-277

    14García-Villar N,Hernndez-Cassou S,Saurina J.J.Chromatogr.A,2009,1216(36):6387-6393

    15Jia S,Kang Y P,Park JH,Lee J,Kwon SW.J.Chromatogr.A,2011,1218(51):9174-9182

    16Almeida C,F(xiàn)ernandes JO,Cunha SC.Food Control,2012,25(1):380-388

    17AliAwana M,F(xiàn)leet I,Thomas C L.Food Chem.,2008,111(2):462-468

    18Kusch P,Knupp G,Hergarten M,Kozupab M,Majchrzak M.Int.J.Mass Spectrom.,2007,263(1):45-53

    19de Borba B M,Rohrer JS.J.Chromatogr.A,2007,1155(1):22-30

    20Favaro G,Pastore P,Saccani G,Cavalli S.Food Chem.,2007,105(4):1652-1658

    21Cinquina A L,Cal A,Longo F,De Santis L,Severoni A,Abballe F.J.Chromatogr.A,2004,1032(1-2):73-77

    22Lapa-Guimares J,Pickova J.J.Chromatogr.A,2004,1045(1-2):223-232

    23Tao Z H,Sato M,Han Y L,Tan Z J,Yamaguchi T,Nakano T.Food Control,2011,22(8):1154-1157

    24Latorre-Moratalla M L,Bover-Cid S,Veciana-Nogués T,Vidal-Carou M C.J.Chromatogr.A,2009,1216(18):4128-4132

    25Jastrzbska A,Kurzawa M,Piasta A,Szyk E.Food Anal.Method,2012,5(5):1079-1087

    26Vitali L,Valese AC,Azevedo M S,Gonzaga L V,Costa A C O,Piovezan M,Vistuba JP,Micke G A.Talanta,2013,106(12):181-185

    27Pena-Gallego A,Hernndez-Orte P,Cacho J,F(xiàn)erreira V.J.Chromatogr.A,2009,1216(15):3398-3401

    28de Mey E,Drabik-Markiewicz G,de Maere H,Peeters M C,Derdelinckx G,Paelinck H,Kowalska T.Food Chem.,2012,130(4):1017-1023

    29Proestos C,Loukatos P,Komaitis M.Food Chem.,2008,106(3):1218-1224

    30ZHANG Guo-Liang,ZHENG Dong-Mei,LI Xiao-dong,ZHANG Hong-Wei,LENG You-Bin,SUN Ai-Jie.China Dairy Industry,2013,41(2):41-44張國梁,鄭冬梅,李曉東,張宏偉,冷友斌,孫愛杰.中國乳品工業(yè),2013,41(2):41-44

    31SUN Ning,ZHAO Huai-Xin.China Dairy Industry,2008,36(7):50-53孫寧,趙淮新.中國乳品工業(yè),2008,36(7):50-53

    Thiswork was supported by the National High Technology Research and Development Program of China(No.2011AA100807).

    Determination of Biogenic Am ines in Cheese by On-line Solid Phase Extraction Coupled with Capillary High Performance Liquid Chromatography

    YANG Shan-Shan,YANG Ya-Nan,LIXue-Lin,ZHANG Yan*
    (Key Laboratory of Food Nutrition and Safety,Ministry of Education of China,Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457,China)

    An on-line solid phase extraction coupled with capillary HPLC method was established for the simultaneous determination of fifteen kinds of biologic amines in cheese.The biogenic amines were concentrated on the solid phase extraction column,and transferred by the six-way valve to analytical column for separation and detection.Separation conditions on capillary HPLC,composition of on-line SPE mobile phase,pH of the sample solution and switching time of six-way switching valve were investigated to get better separation conditions of15 biogenic amines.Optimum on-line SPE conditions including 5%of the acetonitrilewater asmobile phase for SPE column,pH=11 of the sample solution and 3min of valve switching time were employed in the analyticalmethod.The linear range of standard curve for fifteen biogenic amineswas0.25-50.0 mg/L;LOD werewithin the range of0.05-0.25mg/L.At spiked levels of1,20,40 mg/kg,the recoveries of fifteen biogenic amines on four kinds of cheese ranged from 79.6%to 118.7%except methylamine,ethylamine,3-methylbutanamine and 5-hydroxytryptamine;with RSDs from 0.3%to 14.9%except 3-methylbutanamine and 5-hydroxy-tryptamine.Themethod is accurate and reliable,and can be used to detect biogenic amines in cheese.

    On-line solid phase extraction;Capillary high performance liquid chromatography;Biogenic amines;Cheese

    15 October 2015;accepted 23 November 2015)

    10.11895/j.issn.0253-3820.150811

    2015-10-15收稿;2015-11-23接受

    本文系國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(863計(jì)劃,No.2011AA100807)

    *E-mail:yzhang@tust.edu.cn

    猜你喜歡
    生物
    生物多樣性
    生物多樣性
    上上生物
    發(fā)現(xiàn)不明生物
    史上“最黑暗”的生物
    軍事文摘(2020年20期)2020-11-28 11:42:50
    第12話 完美生物
    航空世界(2020年10期)2020-01-19 14:36:20
    最初的生物
    自然生物被直銷
    清晨生物初歷直銷
    生物的多樣性
    少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲av免费在线观看| 极品教师在线免费播放| 久99久视频精品免费| 久久久久久久久久久丰满 | 久久99热这里只有精品18| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 69av精品久久久久久| 热99re8久久精品国产| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 99久久九九国产精品国产免费| 成人国产一区最新在线观看| 亚州av有码| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲人与动物交配视频| 99久久精品一区二区三区| 熟女电影av网| 亚洲综合色惰| 最近最新免费中文字幕在线| 日韩欧美在线二视频| 成人精品一区二区免费| 国产高清视频在线播放一区| 十八禁网站免费在线| 性色avwww在线观看| 国产精品永久免费网站| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲美女视频黄频| 色播亚洲综合网| 又爽又黄无遮挡网站| 免费av观看视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 97超视频在线观看视频| a在线观看视频网站| 亚洲av不卡在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 999久久久精品免费观看国产| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 男女之事视频高清在线观看| 国产精品伦人一区二区| 免费看光身美女| 国产男靠女视频免费网站| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产精品亚洲一级av第二区| 我的女老师完整版在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲色图av天堂| 午夜影院日韩av| 欧美性猛交黑人性爽| 成人性生交大片免费视频hd| 国内精品久久久久精免费| 国产精品久久久久久久电影| 久久精品影院6| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲欧美激情综合另类| 久久精品综合一区二区三区| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 国产老妇女一区| 亚洲一区高清亚洲精品| 三级毛片av免费| 在线观看午夜福利视频| 久久亚洲真实| 3wmmmm亚洲av在线观看| 伦理电影大哥的女人| 欧美潮喷喷水| 性欧美人与动物交配| 欧美zozozo另类| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产亚洲91精品色在线| 九色成人免费人妻av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 三级毛片av免费| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品三级大全| 最新在线观看一区二区三区| 国产黄片美女视频| 亚洲18禁久久av| 在现免费观看毛片| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产午夜福利久久久久久| 久久精品影院6| 亚洲最大成人手机在线| 国产成人a区在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲av美国av| 99热这里只有是精品在线观看| 欧美日本视频| 一区福利在线观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产亚洲91精品色在线| 女人被狂操c到高潮| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 精品一区二区免费观看| 99精品久久久久人妻精品| 免费观看精品视频网站| 无遮挡黄片免费观看| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国产精品亚洲美女久久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 天堂√8在线中文| 午夜影院日韩av| 亚洲av五月六月丁香网| 久久香蕉精品热| av国产免费在线观看| 舔av片在线| 俺也久久电影网| 麻豆av噜噜一区二区三区| 老司机午夜福利在线观看视频| 干丝袜人妻中文字幕| 国产色爽女视频免费观看| av.在线天堂| 男女边吃奶边做爰视频| 极品教师在线视频| 成年女人看的毛片在线观看| 舔av片在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 99热6这里只有精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 精品久久久久久久久亚洲 | 成人欧美大片| av中文乱码字幕在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 男女那种视频在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产精品日韩av在线免费观看| aaaaa片日本免费| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲av美国av| 一级av片app| 婷婷精品国产亚洲av| 久久久久久伊人网av| 免费观看的影片在线观看| 一本精品99久久精品77| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成年女人永久免费观看视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久精品91蜜桃| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 99热这里只有精品一区| 国产高清视频在线播放一区| 99九九线精品视频在线观看视频| 天堂影院成人在线观看| 久久久午夜欧美精品| 国产黄色小视频在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 在线播放国产精品三级| 午夜福利在线在线| 男插女下体视频免费在线播放| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲美女视频黄频| 桃色一区二区三区在线观看| 在线天堂最新版资源| 国国产精品蜜臀av免费| 91精品国产九色| 在线观看免费视频日本深夜| 淫秽高清视频在线观看| 免费看日本二区| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲中文日韩欧美视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 午夜亚洲福利在线播放| 免费搜索国产男女视频| 久久久久九九精品影院| 麻豆成人午夜福利视频| 级片在线观看| av在线亚洲专区| 又紧又爽又黄一区二区| av在线观看视频网站免费| 亚洲av免费在线观看| 制服丝袜大香蕉在线| 久久国内精品自在自线图片| 嫩草影院入口| 性插视频无遮挡在线免费观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | aaaaa片日本免费| 国产在视频线在精品| 少妇高潮的动态图| 成人三级黄色视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 天天躁日日操中文字幕| 欧美性感艳星| 在线观看美女被高潮喷水网站| 99精品久久久久人妻精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日本熟妇午夜| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品午夜福利在线看| 美女cb高潮喷水在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 一个人看的www免费观看视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 长腿黑丝高跟| 国产精品久久久久久av不卡| 午夜爱爱视频在线播放| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲人成网站高清观看| 婷婷亚洲欧美| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品,欧美在线| 精品久久久久久久末码| 国产真实乱freesex| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美激情久久久久久爽电影| 91久久精品电影网| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 偷拍熟女少妇极品色| 人妻久久中文字幕网| 午夜福利高清视频| 国产成人影院久久av| 午夜日韩欧美国产| 免费av毛片视频| 国产真实乱freesex| 婷婷亚洲欧美| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲中文日韩欧美视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产成人av教育| 一级黄色大片毛片| 男女之事视频高清在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产av不卡久久| 91麻豆av在线| 国产高潮美女av| 性插视频无遮挡在线免费观看| 在线国产一区二区在线| 久久久成人免费电影| 99riav亚洲国产免费| 成人永久免费在线观看视频| 精品久久国产蜜桃| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久99热这里只有精品18| 最新在线观看一区二区三区| 动漫黄色视频在线观看| 免费搜索国产男女视频| 欧美+日韩+精品| 99热只有精品国产| 91精品国产九色| 身体一侧抽搐| videossex国产| 中文资源天堂在线| 亚洲自偷自拍三级| 日本在线视频免费播放| 一a级毛片在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 日韩欧美国产在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 一级黄片播放器| 国产在视频线在精品| 日本成人三级电影网站| 床上黄色一级片| 美女cb高潮喷水在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 99久久九九国产精品国产免费| 一进一出好大好爽视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 一个人看的www免费观看视频| 在线免费观看的www视频| 无人区码免费观看不卡| 全区人妻精品视频| 天美传媒精品一区二区| 在线国产一区二区在线| 哪里可以看免费的av片| 久久久久久久久久久丰满 | 美女cb高潮喷水在线观看| 日本黄色片子视频| 成人亚洲精品av一区二区| 高清在线国产一区| 日本三级黄在线观看| 精品久久久噜噜| 淫妇啪啪啪对白视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 伦精品一区二区三区| 黄色一级大片看看| 日韩欧美 国产精品| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| av福利片在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 永久网站在线| 亚洲av.av天堂| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美日韩综合久久久久久 | 日本一本二区三区精品| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| aaaaa片日本免费| 免费观看在线日韩| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 伦精品一区二区三区| 久久精品综合一区二区三区| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美国产日韩亚洲一区| 国产一区二区在线观看日韩| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 日本黄色视频三级网站网址| 国产成人影院久久av| 亚洲欧美日韩东京热| 国产高清视频在线观看网站| 高清毛片免费观看视频网站| 午夜久久久久精精品| 欧美日韩黄片免| 久久久久久国产a免费观看| 国产淫片久久久久久久久| 成人av在线播放网站| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲专区中文字幕在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 色av中文字幕| x7x7x7水蜜桃| 赤兔流量卡办理| 欧美最黄视频在线播放免费| 精品久久久噜噜| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产高清三级在线| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产免费av片在线观看野外av| videossex国产| 黄色丝袜av网址大全| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 午夜爱爱视频在线播放| 少妇的逼水好多| 国产极品精品免费视频能看的| 最新中文字幕久久久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 中文在线观看免费www的网站| 精品不卡国产一区二区三区| 色吧在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 在线国产一区二区在线| 日韩中字成人| 成人性生交大片免费视频hd| 久久久久久久久中文| 午夜影院日韩av| 欧美黑人巨大hd| 亚洲在线观看片| 男人舔奶头视频| 制服丝袜大香蕉在线| 国产精品伦人一区二区| 欧美最黄视频在线播放免费| 老女人水多毛片| 悠悠久久av| 亚洲精品国产成人久久av| 成人性生交大片免费视频hd| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲国产精品sss在线观看| 一夜夜www| 久久久久久久久久久丰满 | 悠悠久久av| 欧美zozozo另类| 校园春色视频在线观看| 亚洲电影在线观看av| 国产黄色小视频在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 波多野结衣巨乳人妻| 一级a爱片免费观看的视频| 最后的刺客免费高清国语| 国产精品野战在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 成人无遮挡网站| 波多野结衣巨乳人妻| 午夜a级毛片| 午夜免费激情av| 国产亚洲精品av在线| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美日韩乱码在线| 国产av一区在线观看免费| 日本免费一区二区三区高清不卡| 91久久精品国产一区二区成人| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 一区福利在线观看| 久久久色成人| 日本熟妇午夜| 免费高清视频大片| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美日韩黄片免| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产欧美日韩精品一区二区| 美女大奶头视频| 欧美黑人巨大hd| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 日韩亚洲欧美综合| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美又色又爽又黄视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 在线播放无遮挡| 日韩欧美三级三区| 99久国产av精品| 成年女人看的毛片在线观看| 一夜夜www| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 1024手机看黄色片| 白带黄色成豆腐渣| a级毛片免费高清观看在线播放| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 老司机午夜福利在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 成人特级av手机在线观看| 国产av一区在线观看免费| 国产 一区精品| 人妻少妇偷人精品九色| 婷婷精品国产亚洲av| 黄色视频,在线免费观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 国内揄拍国产精品人妻在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 成人毛片a级毛片在线播放| 99riav亚洲国产免费| 免费看光身美女| 露出奶头的视频| 老女人水多毛片| 日韩中字成人| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久香蕉精品热| 天美传媒精品一区二区| 国产综合懂色| 免费看a级黄色片| 毛片女人毛片| av在线亚洲专区| 久久久久久久久久黄片| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产精品1区2区在线观看.| 色哟哟·www| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产免费一级a男人的天堂| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲不卡免费看| 久久热精品热| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产探花在线观看一区二区| 国产免费av片在线观看野外av| 18禁在线播放成人免费| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美zozozo另类| 久久香蕉精品热| 久久久国产成人免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日韩欧美三级三区| 免费av观看视频| 69人妻影院| 熟女电影av网| 午夜爱爱视频在线播放| 成人国产一区最新在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲18禁久久av| 黄色丝袜av网址大全| 久久精品影院6| 免费av观看视频| 欧美在线一区亚洲| 成年女人看的毛片在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成人美女网站在线观看视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲最大成人中文| 日本欧美国产在线视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产91精品成人一区二区三区| 国产激情偷乱视频一区二区| 男女之事视频高清在线观看| 久久精品91蜜桃| 免费观看的影片在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 观看美女的网站| 欧美日本视频| 麻豆国产97在线/欧美| 国产色婷婷99| avwww免费| 国产单亲对白刺激| 国产精品综合久久久久久久免费| 99久久精品国产国产毛片| 一级黄色大片毛片| 亚洲av熟女| 国产精品乱码一区二三区的特点| 男女边吃奶边做爰视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 在线观看一区二区三区| 国产视频内射| 精品人妻偷拍中文字幕| 最近在线观看免费完整版| 熟女电影av网| 日韩欧美精品免费久久| 国产乱人伦免费视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 搞女人的毛片| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲,欧美,日韩| 深爱激情五月婷婷| 免费av不卡在线播放| 日本欧美国产在线视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 如何舔出高潮| 成人国产一区最新在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 淫妇啪啪啪对白视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲国产色片| 国语自产精品视频在线第100页| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产伦在线观看视频一区| 91久久精品国产一区二区三区| 午夜视频国产福利| 精品久久久久久久久av| 欧美潮喷喷水| 淫秽高清视频在线观看| 18+在线观看网站| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产一区二区在线av高清观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲无线在线观看| 亚洲无线观看免费| 免费观看人在逋| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美黑人巨大hd| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美丝袜亚洲另类 | 直男gayav资源| a级毛片a级免费在线| 亚洲经典国产精华液单| x7x7x7水蜜桃| 美女黄网站色视频| 91狼人影院| 亚洲四区av| 精品人妻视频免费看| 国产精品一区二区免费欧美| 我要看日韩黄色一级片| 免费看光身美女| 欧美zozozo另类| 欧美三级亚洲精品| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲av成人av| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产av在哪里看| 日韩欧美国产在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 最新在线观看一区二区三区| 99热只有精品国产| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 好男人在线观看高清免费视频| 精品人妻视频免费看| 亚洲不卡免费看| 在线免费观看的www视频| 联通29元200g的流量卡| 亚洲av美国av| 国产探花在线观看一区二区| 九九热线精品视视频播放| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲黑人精品在线| 免费av不卡在线播放| 亚洲四区av| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 成年免费大片在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 色尼玛亚洲综合影院| 精品乱码久久久久久99久播| av在线老鸭窝| 精品久久国产蜜桃| 伦精品一区二区三区| 国产精品久久久久久av不卡| 久久香蕉精品热| 国产美女午夜福利| 精品人妻视频免费看| 直男gayav资源| 天堂√8在线中文| 搡老熟女国产l中国老女人| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产一区二区三区视频了| aaaaa片日本免费| 最新中文字幕久久久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美精品国产亚洲| 午夜视频国产福利| 嫩草影院新地址| .国产精品久久| 国产淫片久久久久久久久| 最好的美女福利视频网| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 免费大片18禁|