• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    在線固相萃取-毛細(xì)管高效液相色譜聯(lián)用測定奶酪中的生物胺

    2016-11-09 08:32:41楊姍姍楊亞楠李雪霖張燕
    分析化學(xué) 2016年3期
    關(guān)鍵詞:生物

    楊姍姍 楊亞楠 李雪霖 張燕

    (食品營養(yǎng)與安全教育部重點實驗室,天津科技大學(xué),天津300457)

    在線固相萃取-毛細(xì)管高效液相色譜聯(lián)用測定奶酪中的生物胺

    楊姍姍楊亞楠李雪霖張燕*

    (食品營養(yǎng)與安全教育部重點實驗室,天津科技大學(xué),天津300457)

    采用雙二元泵毛細(xì)管液相色譜,通過六通閥實現(xiàn)了樣品的在線凈化與分離定量的自動切換,建立了同時測定奶酪中的15種生物胺的在線固相萃取-毛細(xì)管高效液相色譜聯(lián)用方法。通過優(yōu)化毛細(xì)管高效液相色譜的分離條件,考察在線固相萃取流動相的組成、上樣溶液pH值以及六通閥的切換時間對生物胺回收率的影響,確定最佳分析條件為:5%乙腈-水作為固萃柱(Zorbax SB-C18)的流動相,上樣溶液pH=11,上樣3 min后切換六通閥。采用內(nèi)標(biāo)法定量,15種生物胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為0.25~50.0 mg/L,檢出限(LOD)為0.05~0.25 mg/L,定量限(LOQ)為0.15~0.80 mg/L。除了甲胺、乙胺、3-甲基丁胺和5-羥基色胺外,其余生物胺的不同添加水平(1,20和40 mg/kg)下的加標(biāo)回收率為79.6%~118.7%;除3-甲基丁胺和5-羥基色胺外,其余生物胺的RSD在0.3%~14.9%之間,可用于奶酪中多種生物胺的快速檢測。

    在線固相萃取;毛細(xì)管高效液相色譜;生物胺;奶酪

    1 引言

    生物胺是一類低分子量的堿性含氮有機(jī)物,是生物活細(xì)胞中不可缺少的活性組分[1],廣泛存在于各類食品中,尤其是富含蛋白質(zhì)的食品和發(fā)酵類食品。然而,當(dāng)大量攝入或自身解毒能力不足時,就會對人體的神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)造成傷害,甚至危及生命。其中,組胺的毒性最大。動物機(jī)體內(nèi)的二胺氧化酶及組胺轉(zhuǎn)甲基酶都可降解組胺,而腐胺和尸胺可抑制這兩種酶的代謝作用,從而增強(qiáng)組胺的毒性,且這兩種胺能夠與亞硝酸鹽反應(yīng)產(chǎn)生亞硝胺,具有潛在的致癌性[2]。生物胺主要是由于微生物產(chǎn)生的脫羧酶[3]使氨基酸脫羧生成的,因此生物胺含量與微生物污染程度有關(guān),成為食品新鮮度的評價指標(biāo)。干酪含有豐富的氨基酸,在長期的發(fā)酵過程中如果有腐敗微生物污染[4],則會產(chǎn)生大量生物胺,存在安全風(fēng)險?;谏锇肪哂械陌踩:π约白鳛槭称沸迈r度評價指標(biāo)的重要性[5,6],建立一種簡單、快速、準(zhǔn)確的生物胺檢測方法具有重要意義。

    目前,食品樣品中生物胺的檢測方法有酶聯(lián)免疫法(ELISA)[7~10]、高效液相色譜法[11~13]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[14,15]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[16~18]、離子色譜法[19~21]、薄層色譜法[22~24]以及電泳法[25,26]等。文獻(xiàn)中多采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測,用液/液萃取或離線固相萃取進(jìn)行富集凈化[27~29]。但是都需要手工操作,重現(xiàn)性較差;花費時間較多,降低了樣品前處理效率;耗費大量的有機(jī)溶劑,且固相萃取柱為一次性使用,成本高。張國梁等[30]采用離線固相萃取的方式,利用高效液相色譜建立了測定干酪中的6種生物胺,本研究采用在線固相萃取的方式,簡化了樣品的前處理操作,減少了手工操作的誤差;孫寧等[31]建立了高效液相色譜檢測干酪中的5種生物胺,而本方法通過優(yōu)化色譜分離條件,可以實現(xiàn)15種生物胺的分離與定量分析,提高了分析效率。

    本研究通過對毛細(xì)管液相色譜條件的優(yōu)化,建立了奶酪中生物胺的準(zhǔn)確、快速的檢測方法。采用在線固相萃取進(jìn)行樣品的凈化,提高了分析效率,顯著降低了基質(zhì)效應(yīng),提高了檢測的準(zhǔn)確度。

    2 實驗部分

    2.1儀器與試劑

    Agilent 1200系列毛細(xì)管高效液相色譜儀,配有兩個雙元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、六通閥、DAD檢測器(美國Agilent公司);UC-6200超聲儀(美國美瑞泰克公司);5804R離心機(jī)(德國Eppendorf公司)。固相萃取柱Zorbax SB-C18柱(35 mm×0.5mm,5μm),分析柱Zorbax SB-C18柱(150mm×0.5mm,5μm)均購自美國Agilent公司;實驗用水均為超純水(美國Millipore公司);IKA MS3渦旋振蕩儀(德國IKA公司);MA-4ACE破碎勻漿儀(日本Nihonseiki Kaisha公司)。

    甲胺鹽酸鹽(Methylamine hydrochloride)、乙胺鹽酸鹽(Ethylamine hydrochloride)、色胺(Tryptamine)、丁胺(Butylamine)、苯乙胺(Phenylethylamine)、3-甲基丁胺(3-methylbutanamine)、戊胺(Amylamine)、腐胺二鹽酸鹽(Putrescine dihydrochloride)、尸胺二鹽酸鹽(Cadaverine dihydrochloride)、組胺二鹽酸鹽(Histamine dihydrochloride)、章魚胺(Octopamine)、5-羥基色胺鹽酸鹽(5-hydroxy-tryptamine hydrochloride)、酪胺(Tyramine)、精胺(Spermidine)、亞精胺(Spermine)、1,7-二氨基庚烷(1,7-Diaminoheptane)、丹磺酰氯(Dansyl chloride),均購自美國Sigma-Aldrich公司;乙腈(HPLC級,美國Merck公司)。

    2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液及衍生試劑的配制

    生物胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制:準(zhǔn)確稱取各種生物胺10.00 mg,用0.1 mol/L HCl定容至10 mL,配制成1000 mg/L的生物胺的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,4℃保存?zhèn)溆?,使用前,?.1 mol/L HCl將生物胺的標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋至適當(dāng)濃度的中間工作液、標(biāo)準(zhǔn)工作液以及混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

    丹磺酰氯溶液(5 mg/mL):稱取250 mg丹磺酰氯,以丙酮溶解并定容至50 mL,現(xiàn)用現(xiàn)配。

    2.3樣品前處理

    稱取5.00 g奶酪,加200μL 100 mg/kg的內(nèi)標(biāo)物1,7-二氨基庚烷,用破碎勻漿儀將奶酪粉碎,加入10 mL甲醇,蝸旋振蕩1 min,超聲提取30 min,于4℃,10000 g離心10 min,將上清液過濾,剩余的殘渣再重復(fù)提取一次,合并兩次所得的上清液,在40℃下減壓蒸干后用1 mL 0.1 mol/L HCl復(fù)溶,待衍生。

    2.4生物胺的衍生

    取生物胺的標(biāo)準(zhǔn)工作液或樣品提取液1 mL于5 mL容量瓶中,加入200μL 2 mol/L NaOH、300μL飽和NaHCO3溶液,混合均勻后加入4 mL 5 mg/L丹磺酰氯溶液,混合均勻,在60℃水浴中加熱15 min,每隔5 min混勻一次,衍生完成后,立即加入200μL 25%(m/m)氨水,以除去未反應(yīng)的丹磺酰氯,靜置20 min后,40℃下氮吹至5 mL,此時pH=11。

    2.5在線固相萃取的流程

    基于Agilent1200系列的毛細(xì)管液相色譜的雙二元泵系統(tǒng),分析流程如圖1所示。初始閥的位置為1-2,樣品在固相萃取柱上在線凈化,然后通過六通閥切換,閥位置為1-6相連,此時,固相萃取柱與分析柱相串聯(lián),泵2的流動相將固相萃取柱上的目標(biāo)物反沖至分析柱上,進(jìn)行分離檢測。

    2.6色譜條件

    在線固相萃取(On-line SPE):固相萃取柱Zorbax SB-C18柱(35 mm×0.5 mm,5μm);5%乙腈-水為流動相等度洗脫,流速10μL/min;進(jìn)樣體積1μL;六通閥的切換時間見表1。

    分析:分析柱 Zorbax SB-C18柱(150 mm× 0.5 mm,5μm);流動相為超純水和乙腈;流速10μL/min;柱溫35℃;檢測波長為245 nm;梯度洗脫條件見表1。

    3 結(jié)果討論

    3.1色譜分離條件的選擇

    選擇對堿性物質(zhì)具有良好保留特性和分離能力的SB-C18色譜柱作為分析柱,對生物胺進(jìn)行分離,分別采用乙腈-水(含10 mmol/L乙酸銨)、乙腈-水(含10 mmol/L K2PO4)、乙腈-水(含5 mmol/ L乙酸銨和5 mmol/L K2PO4)、乙腈-水作為分析柱的流動相,進(jìn)行梯度洗脫條件優(yōu)化。結(jié)果表明,上述體系均能使目標(biāo)物得到很好的分離,但是乙腈-水體系加入乙酸銨,目標(biāo)物的響應(yīng)值降低;加入K2PO4對大部分生物胺的響應(yīng)值有所提高,但是會抑制亞精胺、精胺的響應(yīng)值;加入兩種鹽的混合體系,顯著抑制了精胺的響應(yīng)值。因此,選用乙腈-水體系為分析柱的流動相,進(jìn)一步優(yōu)化了流動相的梯度洗脫程序、流動相的pH值、流速及柱溫等色譜分離條件,已達(dá)到最佳的分離效果和靈敏度。

    表1 在線固相萃取梯度洗脫程序及閥切換時間Table 1 Gradient program of online solid phase extraction and valve switching

    15種生物胺混合標(biāo)準(zhǔn)品在優(yōu)化后的色譜分離條件下分析得到的色譜圖見圖2。

    圖2 15種生物胺的色譜分離圖Fig.2 Chromatogram of 15 biogenic amines(BAs) 1.甲胺;2.乙胺;3.色胺;4.丁胺;5.苯乙胺;6.3-甲基丁胺; 7.戊胺;8.腐胺;9.尸胺;10.組胺;11.章魚胺;12.5-羥基色胺;13.酪胺;14.亞精胺;15.精胺;IS.內(nèi)標(biāo)。1.Methylamine;2.Ethylamine;3.Tryptamine;4.Butylamine; 5.2-phenylethylamine;6.3-methylbutanamine;7.Amylamine; 8.Putrescine;9.Cadaverine;10.Histamine;11.Octopamine; 12.5-hydroxytryptamine;13.Tyramine;14.Spermidine;15.Spermine;IS:Internal standard.

    3.2在線固相萃取條件的優(yōu)化

    分別改變在線固相萃取的流動相,上樣溶液pH值以及閥切換時間,采用建立的毛細(xì)管液相色譜方法測定不同固相萃取條件下洗脫得到的生物胺含量,以生物胺回收率(測得的生物胺量除以上樣量所得百分?jǐn)?shù))評價生物胺在固相萃取柱上的吸附程度。

    在線固相萃取的流動相起著活化固萃柱的作用,同時對目標(biāo)物在固萃柱上的吸附及雜質(zhì)的分離起著重要作用。采用等度洗脫方式,分別以5%,10%,15%和20%的乙腈-水為流動相,考察了生物胺在固萃柱上的吸附行為。結(jié)果表明,隨著乙腈濃度的增大,生物胺的損失增大。這是由于上樣過程中高濃度有機(jī)溶劑減小了固相萃取柱對生物胺的吸附,增加了對生物胺的洗脫力,因此,洗脫至分析柱上的生物胺減少,造成回收率降低。5%乙腈-水為流動相時,生物胺的回收率達(dá)到82.2%~128.8%,因此選擇5%乙腈-水溶液為固相萃取柱的流動相。

    上樣溶液pH值影響生物胺衍生物的存在狀態(tài),進(jìn)而影響生物胺在固萃柱上的吸附行為,從而可能會影響生物胺的保留時間以及儀器的響應(yīng)值。因此進(jìn)一步研究了上樣溶液pH值(8,9,10,11和12)對生物胺回收率的影響。結(jié)果表明,pH=8時,5-羥基色胺、精胺的RSD均大于15%,這可能是因為在此pH值下,5-羥基色胺與精胺的衍生產(chǎn)物不穩(wěn)定,造成了檢測結(jié)果的偏差較大;pH=9時,精胺回收率僅為67.59%,損失嚴(yán)重,可能是由于精胺的特殊結(jié)構(gòu)造成,該衍生條件下精胺的兩個仲胺可能未被丹磺酰氯衍生,仲胺在pH 9時極性較強(qiáng),減弱了精胺衍生物在固萃柱上的吸附力;pH=10時,戊胺回收率高達(dá)151.4%;pH=12時,甲胺、色胺、苯乙胺的回收率均大于130.8%,可能是因為該pH值下,不同生物胺的儀器響應(yīng)值均不同程度增加,造成個別生物胺測定結(jié)果偏高;pH=11時,各種生物胺的回收率為87.8%119.8%,RSD為4.4%~9.0%,回收率和重現(xiàn)性均較好。因此,選擇上樣溶液的pH=11。

    考察了上樣后閥切換時間(1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5和4.0 min)對生物胺回收率的影響。時間越短,生物胺的回收率越低,這是因為切換時間短,固相萃取柱未捕集到全部的分析物,閥切換后,未流經(jīng)固相萃取柱的分析物流入廢液,導(dǎo)致上樣不完全,造成回收率降低。隨著閥切換時間延長,生物胺的回收率逐漸升高,但是閥切換的時間(4.0 min)過長,就會將吸附到固萃柱的生物胺重新洗脫下來而排入廢液,造成損失。因此,選擇3 min為最佳的閥切換時間。

    15種生物胺的混合標(biāo)準(zhǔn)品在優(yōu)化后的在線固萃和色譜分離條件下分析得到的色譜圖見圖3。

    圖3 15種生物胺的在線固相萃取與毛細(xì)管液相聯(lián)用的色譜分離圖Fig.3 Chromatogram of 15 BAs using on-line SPE combined with capillary HPLC圖中峰號同圖1。The peak numbers are the same as in Fig.2.

    3.3方法的線性范圍與檢出限及定量限

    取不同濃度的15種生物胺標(biāo)準(zhǔn)品的混合溶液,經(jīng)丹磺酰氯衍生后,利用優(yōu)化后條件檢測,以生物胺的濃度為橫坐標(biāo),各個生物胺衍生物的響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值的比值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果表明(表2),15種生物胺在0.25~50.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.9981。逐漸稀釋標(biāo)準(zhǔn)品并進(jìn)行測定,峰高為3倍噪聲時對應(yīng)的標(biāo)品濃度為檢出限(LOD),定量限(LOQ)為能夠準(zhǔn)確進(jìn)行定量的最低濃度(RSD<15%)。在本方法對15種生物胺的檢出限為0.05~0.25 mg/L,定量限為0.15~0.80 mg/L。

    表2 15種生物胺的on-line SPE與毛細(xì)管高效液相色譜聯(lián)用的檢測方法的分析特征量Table 2 Analytical characteristic data of the on-line SPE combined microcolumn HPLCmethod for the determination of 15 BAs

    3.4奶酪實際樣品和回收率的測定

    為了進(jìn)一步驗證實驗方法的準(zhǔn)確性和實用性,從超市中購買了兩種進(jìn)口奶酪和兩種國產(chǎn)奶酪,共4種樣品,每種樣品均設(shè)不添加、添加1,20和40 mg/kg濃度水平的15種生物胺標(biāo)品,添加200μL 100 mg/kg的內(nèi)標(biāo),采用本方法進(jìn)行測定(表3)。圖4是某國產(chǎn)奶酪的色譜圖。結(jié)果表明,4種樣品中均檢出不同種類及含量的生物胺,其中,4種樣品均檢測到甲胺、色胺、戊胺、腐胺、亞精胺、精胺,3種樣品檢測到苯乙胺、尸胺和酪胺,2種樣品檢測到了乙胺、丁胺、3-甲基丁胺、5-羥基色胺、組胺,只有1種樣品檢測到了章魚胺。

    除甲胺、乙胺、3-甲基丁胺和5-羥基色胺的測定結(jié)果偏差稍大外,其余生物胺的加標(biāo)回收率在79.65%~118.66%之間;除3-甲基丁胺和5-羥基色胺外,RSD值在0.3%~14.9%范圍內(nèi),表明本方法有較好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,可以用于實際樣品中15種生物胺的同時分析檢測。

    表3 奶酪中生物胺的含量及不同添加濃度下的平均回收率(%,RSD,n=3)Table 3 BAs contents in cheese samples(mg/kg)and recovery of cheese samples at different spiked levels(%,RSD)

    續(xù)表3 (Continued to Table 3)

    圖4 國產(chǎn)奶酪1的在線固相萃取-毛細(xì)管液相色譜聯(lián)用測定的色譜圖Fig.4 Chromatogram of Domestic cheese 1 samples by on-line SPE combined with capillary HPLC 1.甲胺;2.乙胺;3.色胺;4.丁胺;7.戊胺;8.腐胺;9.尸胺;14.亞精胺;15.精胺;IS.內(nèi)標(biāo)。1.Methylamine;2.Ethylamine;3.Tryptamine;4.Butylamine; 7.Amylamine;8.Putrescine;9.Cadaverine;14.Spermidine; 15.Spermine;IS:Internal standard.

    4 結(jié)論

    本研究建立了在線固相萃取與毛細(xì)管液相色譜聯(lián)用同時測定奶酪中15種生物胺的分析方法,通過優(yōu)化在線固相萃取的關(guān)鍵參數(shù)及色譜分離條件,提高了分析方法的精密度重現(xiàn)性及分析效率。本研究為食品中生物胺的快速分析提供了新的技術(shù)手段。

    References

    1Teti D,VisalliM,McNair H.J.Chromatogr.B,2002,781(1-2):107-149

    2Wei F,Xu X L,Zhou G H,Zhao G M,Li C B,Zhang Y J,Chen L Z,Qi J.Meat.Sci.,2009,81(3):451-455

    3nal A,Tekkeli S F K,nal C.Food Chem.,2013,138(1):509-515

    4MA Ling,LIU Hui-Ping.Journal of Dairy Science and Technology,2007,123(2):55-58馬玲,劉會平.乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2007,123(2):55-58

    5Loret S,Deloyer P,Dandrifosse G.Food Chem,2005,89(4):519-525

    6Vinci G,Antonelli M L.Food Control,2002,13(8):519-524

    7Marcoba A,Polo M C,Martin-Alvarez P J,Moreno-Arribas M V.Food Res Int,2005,38(4):387-394

    8Hungerford J,Wu W H.Food Control,2012,25(2):448-457

    9Muscarella M,Lo Magro S,Campaniello M,Armentano A,Stacchini P.Food Control,2013,31(1):211-217

    10DadkovE,Krízek M,PeliknovT.Food Chem.,2009,116(1):365-370

    11Preti R,AntonelliM L,Bernacchia R,Vinci G.Food Chem.,2015,187(15):555-562

    12Ramos R M,Valente IM,Rodrigues JA.Talanta,2014,124(2):146-151

    13SUN Yan-Ni,ZHANG Ning,WANG Cui-Ling,LIU Zhu-Lan,WANG Zheng,LIU Jian-Li.Chinese J.Anal.Chem.,2014,42(2):273-277孫艷妮,張寧,王翠玲,劉竹蘭,王征,劉建利.分析化學(xué),2014,42(2):273-277

    14García-Villar N,Hernndez-Cassou S,Saurina J.J.Chromatogr.A,2009,1216(36):6387-6393

    15Jia S,Kang Y P,Park JH,Lee J,Kwon SW.J.Chromatogr.A,2011,1218(51):9174-9182

    16Almeida C,F(xiàn)ernandes JO,Cunha SC.Food Control,2012,25(1):380-388

    17AliAwana M,F(xiàn)leet I,Thomas C L.Food Chem.,2008,111(2):462-468

    18Kusch P,Knupp G,Hergarten M,Kozupab M,Majchrzak M.Int.J.Mass Spectrom.,2007,263(1):45-53

    19de Borba B M,Rohrer JS.J.Chromatogr.A,2007,1155(1):22-30

    20Favaro G,Pastore P,Saccani G,Cavalli S.Food Chem.,2007,105(4):1652-1658

    21Cinquina A L,Cal A,Longo F,De Santis L,Severoni A,Abballe F.J.Chromatogr.A,2004,1032(1-2):73-77

    22Lapa-Guimares J,Pickova J.J.Chromatogr.A,2004,1045(1-2):223-232

    23Tao Z H,Sato M,Han Y L,Tan Z J,Yamaguchi T,Nakano T.Food Control,2011,22(8):1154-1157

    24Latorre-Moratalla M L,Bover-Cid S,Veciana-Nogués T,Vidal-Carou M C.J.Chromatogr.A,2009,1216(18):4128-4132

    25Jastrzbska A,Kurzawa M,Piasta A,Szyk E.Food Anal.Method,2012,5(5):1079-1087

    26Vitali L,Valese AC,Azevedo M S,Gonzaga L V,Costa A C O,Piovezan M,Vistuba JP,Micke G A.Talanta,2013,106(12):181-185

    27Pena-Gallego A,Hernndez-Orte P,Cacho J,F(xiàn)erreira V.J.Chromatogr.A,2009,1216(15):3398-3401

    28de Mey E,Drabik-Markiewicz G,de Maere H,Peeters M C,Derdelinckx G,Paelinck H,Kowalska T.Food Chem.,2012,130(4):1017-1023

    29Proestos C,Loukatos P,Komaitis M.Food Chem.,2008,106(3):1218-1224

    30ZHANG Guo-Liang,ZHENG Dong-Mei,LI Xiao-dong,ZHANG Hong-Wei,LENG You-Bin,SUN Ai-Jie.China Dairy Industry,2013,41(2):41-44張國梁,鄭冬梅,李曉東,張宏偉,冷友斌,孫愛杰.中國乳品工業(yè),2013,41(2):41-44

    31SUN Ning,ZHAO Huai-Xin.China Dairy Industry,2008,36(7):50-53孫寧,趙淮新.中國乳品工業(yè),2008,36(7):50-53

    Thiswork was supported by the National High Technology Research and Development Program of China(No.2011AA100807).

    Determination of Biogenic Am ines in Cheese by On-line Solid Phase Extraction Coupled with Capillary High Performance Liquid Chromatography

    YANG Shan-Shan,YANG Ya-Nan,LIXue-Lin,ZHANG Yan*
    (Key Laboratory of Food Nutrition and Safety,Ministry of Education of China,Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457,China)

    An on-line solid phase extraction coupled with capillary HPLC method was established for the simultaneous determination of fifteen kinds of biologic amines in cheese.The biogenic amines were concentrated on the solid phase extraction column,and transferred by the six-way valve to analytical column for separation and detection.Separation conditions on capillary HPLC,composition of on-line SPE mobile phase,pH of the sample solution and switching time of six-way switching valve were investigated to get better separation conditions of15 biogenic amines.Optimum on-line SPE conditions including 5%of the acetonitrilewater asmobile phase for SPE column,pH=11 of the sample solution and 3min of valve switching time were employed in the analyticalmethod.The linear range of standard curve for fifteen biogenic amineswas0.25-50.0 mg/L;LOD werewithin the range of0.05-0.25mg/L.At spiked levels of1,20,40 mg/kg,the recoveries of fifteen biogenic amines on four kinds of cheese ranged from 79.6%to 118.7%except methylamine,ethylamine,3-methylbutanamine and 5-hydroxytryptamine;with RSDs from 0.3%to 14.9%except 3-methylbutanamine and 5-hydroxy-tryptamine.Themethod is accurate and reliable,and can be used to detect biogenic amines in cheese.

    On-line solid phase extraction;Capillary high performance liquid chromatography;Biogenic amines;Cheese

    15 October 2015;accepted 23 November 2015)

    10.11895/j.issn.0253-3820.150811

    2015-10-15收稿;2015-11-23接受

    本文系國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃基金資助項目(863計劃,No.2011AA100807)

    *E-mail:yzhang@tust.edu.cn

    猜你喜歡
    生物
    生物多樣性
    生物多樣性
    上上生物
    發(fā)現(xiàn)不明生物
    史上“最黑暗”的生物
    軍事文摘(2020年20期)2020-11-28 11:42:50
    第12話 完美生物
    航空世界(2020年10期)2020-01-19 14:36:20
    最初的生物
    自然生物被直銷
    清晨生物初歷直銷
    生物的多樣性
    制服人妻中文乱码| 亚洲伊人色综图| av线在线观看网站| 曰老女人黄片| 精品第一国产精品| 欧美精品国产亚洲| 少妇人妻久久综合中文| 2022亚洲国产成人精品| 91精品三级在线观看| 22中文网久久字幕| 香蕉丝袜av| 黄色配什么色好看| 午夜福利,免费看| h视频一区二区三区| 天天影视国产精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 精品酒店卫生间| 久久婷婷青草| 丝袜喷水一区| 十八禁高潮呻吟视频| 国产精品蜜桃在线观看| 午夜激情av网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久精品久久精品一区二区三区| 少妇的逼好多水| 精品一区二区免费观看| 视频区图区小说| av免费观看日本| 久久99蜜桃精品久久| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产精品无大码| 一级毛片 在线播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲欧洲日产国产| 日本wwww免费看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久精品国产综合久久久 | 天堂8中文在线网| 国产精品女同一区二区软件| 中国国产av一级| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产片内射在线| 五月天丁香电影| 久久精品国产亚洲av天美| 久久精品国产a三级三级三级| 秋霞伦理黄片| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 亚洲国产欧美在线一区| 99香蕉大伊视频| 男女免费视频国产| 国产福利在线免费观看视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 又大又黄又爽视频免费| 国产精品一国产av| 免费观看a级毛片全部| 免费在线观看黄色视频的| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 90打野战视频偷拍视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 少妇精品久久久久久久| 婷婷成人精品国产| 蜜桃国产av成人99| 性色av一级| 久久久久精品性色| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产精品国产三级国产专区5o| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 建设人人有责人人尽责人人享有的| a级毛色黄片| 秋霞在线观看毛片| 少妇人妻精品综合一区二区| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲人与动物交配视频| a级毛色黄片| 亚洲精品456在线播放app| 久久这里有精品视频免费| 夫妻性生交免费视频一级片| 交换朋友夫妻互换小说| 一本色道久久久久久精品综合| 高清不卡的av网站| 蜜桃国产av成人99| 看免费成人av毛片| 亚洲av国产av综合av卡| 日韩三级伦理在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 男人舔女人的私密视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 日本色播在线视频| 观看美女的网站| 国产黄色视频一区二区在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 夜夜爽夜夜爽视频| 国内精品宾馆在线| 一级a做视频免费观看| 伦理电影免费视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产男人的电影天堂91| 免费av中文字幕在线| 精品一区在线观看国产| 免费av中文字幕在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲精品第二区| a级毛色黄片| 久热这里只有精品99| 免费大片黄手机在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲欧美日韩另类电影网站| h视频一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 三级国产精品片| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产成人精品一,二区| 高清欧美精品videossex| 91在线精品国自产拍蜜月| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久精品区二区三区| 免费日韩欧美在线观看| 性色avwww在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 美女内射精品一级片tv| 久久久精品94久久精品| 国产亚洲欧美精品永久| 精品午夜福利在线看| 大码成人一级视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲三级黄色毛片| 久久国产精品大桥未久av| 七月丁香在线播放| 少妇 在线观看| 18禁国产床啪视频网站| av免费观看日本| 午夜福利视频精品| 国产xxxxx性猛交| 成人毛片a级毛片在线播放| 我的女老师完整版在线观看| 国产成人aa在线观看| 蜜桃在线观看..| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一二三四中文在线观看免费高清| 内地一区二区视频在线| 亚洲av日韩在线播放| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲成人一二三区av| 免费大片黄手机在线观看| 一区二区av电影网| 2018国产大陆天天弄谢| 制服诱惑二区| 青春草国产在线视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产高清国产精品国产三级| 免费观看性生交大片5| 9191精品国产免费久久| 在现免费观看毛片| 97人妻天天添夜夜摸| 国产色婷婷99| 亚洲熟女精品中文字幕| 热re99久久国产66热| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲av中文av极速乱| 久久综合国产亚洲精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 人成视频在线观看免费观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 五月天丁香电影| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 高清欧美精品videossex| 亚洲人成网站在线观看播放| 美女中出高潮动态图| 婷婷色麻豆天堂久久| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 免费黄网站久久成人精品| 国产有黄有色有爽视频| 在线观看国产h片| 国产精品久久久久久久久免| 女性生殖器流出的白浆| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 国国产精品蜜臀av免费| 老熟女久久久| 丝袜人妻中文字幕| 午夜福利影视在线免费观看| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲综合色网址| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲在久久综合| 搡女人真爽免费视频火全软件| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲国产精品999| 精品久久久久久电影网| 国产精品一二三区在线看| 女人久久www免费人成看片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 狂野欧美激情性bbbbbb| 99国产综合亚洲精品| 黑人猛操日本美女一级片| 黄色 视频免费看| 国产精品久久久久久久电影| 黄色怎么调成土黄色| 乱码一卡2卡4卡精品| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久韩国三级中文字幕| 国产精品人妻久久久久久| 成人国产麻豆网| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲在久久综合| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 黄色 视频免费看| 欧美xxⅹ黑人| 国产成人免费无遮挡视频| 国产免费又黄又爽又色| 久久精品国产自在天天线| 国内精品宾馆在线| 国产精品.久久久| 亚洲av福利一区| 蜜桃国产av成人99| 男的添女的下面高潮视频| 国产成人免费无遮挡视频| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲综合色惰| 久热久热在线精品观看| 国产成人精品在线电影| 制服诱惑二区| 日韩精品有码人妻一区| 日韩成人伦理影院| 免费av不卡在线播放| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产福利在线免费观看视频| 26uuu在线亚洲综合色| 夫妻午夜视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品久久久久久精品古装| 久久婷婷青草| 熟女电影av网| 欧美日韩成人在线一区二区| 黑人高潮一二区| 精品少妇内射三级| 九色亚洲精品在线播放| 丝袜喷水一区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日韩中字成人| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 在现免费观看毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产黄频视频在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久久精品免费免费高清| 国产国语露脸激情在线看| 在线观看三级黄色| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美最新免费一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 久久婷婷青草| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品国产三级专区第一集| 一区二区三区乱码不卡18| 99国产精品免费福利视频| 国产成人精品婷婷| 亚洲少妇的诱惑av| 99热国产这里只有精品6| 最近的中文字幕免费完整| 九九在线视频观看精品| 热re99久久国产66热| 免费在线观看完整版高清| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品蜜桃在线观看| av在线观看视频网站免费| 亚洲四区av| 黄色一级大片看看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 老女人水多毛片| 国产一区二区三区av在线| 黄色视频在线播放观看不卡| 在线看a的网站| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产不卡av网站在线观看| 久久99精品国语久久久| 一级a做视频免费观看| 久久久国产精品麻豆| 亚洲,欧美,日韩| 热99久久久久精品小说推荐| 日韩欧美一区视频在线观看| 色94色欧美一区二区| 制服诱惑二区| 黄片播放在线免费| 在线观看www视频免费| 精品一品国产午夜福利视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品午夜福利在线看| 国产亚洲精品久久久com| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 成人毛片60女人毛片免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产深夜福利视频在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产综合精华液| 久热这里只有精品99| 我的女老师完整版在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲精品视频女| 99久久精品国产国产毛片| 久久精品人人爽人人爽视色| 在线观看免费高清a一片| 亚洲,欧美,日韩| 国产亚洲最大av| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品一区二区在线观看99| 黄色怎么调成土黄色| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲国产精品一区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 国产高清国产精品国产三级| 熟女av电影| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 午夜免费鲁丝| 国产毛片在线视频| 精品久久蜜臀av无| 天天影视国产精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 一级爰片在线观看| 精品午夜福利在线看| 精品亚洲成a人片在线观看| 最新中文字幕久久久久| 丝瓜视频免费看黄片| 日本色播在线视频| 飞空精品影院首页| 只有这里有精品99| 51国产日韩欧美| 欧美精品一区二区大全| 九色亚洲精品在线播放| 婷婷色麻豆天堂久久| 51国产日韩欧美| 精品福利永久在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲精品aⅴ在线观看| 大香蕉97超碰在线| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲四区av| 亚洲第一区二区三区不卡| 成人无遮挡网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 黄色毛片三级朝国网站| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 尾随美女入室| 看免费av毛片| 国产在线免费精品| 人人澡人人妻人| 亚洲,欧美精品.| 国产片内射在线| 考比视频在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 热99久久久久精品小说推荐| 国产亚洲欧美精品永久| 极品少妇高潮喷水抽搐| av又黄又爽大尺度在线免费看| 免费黄频网站在线观看国产| 精品久久蜜臀av无| 青春草视频在线免费观看| xxx大片免费视频| 亚洲少妇的诱惑av| 男人操女人黄网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产深夜福利视频在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久综合国产亚洲精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 日韩av在线免费看完整版不卡| 热re99久久国产66热| 秋霞伦理黄片| 国产国语露脸激情在线看| 丝袜脚勾引网站| 五月开心婷婷网| 午夜久久久在线观看| 久久久久久久国产电影| 22中文网久久字幕| 91精品国产国语对白视频| av视频免费观看在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 高清不卡的av网站| 男女无遮挡免费网站观看| 一区二区av电影网| 亚洲国产精品国产精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久久久久久亚洲中文字幕| 有码 亚洲区| 久久这里有精品视频免费| 国产片内射在线| 午夜福利,免费看| 天堂8中文在线网| 国产在线视频一区二区| 午夜91福利影院| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 香蕉精品网在线| 成人国产麻豆网| 十八禁高潮呻吟视频| 成人国产av品久久久| 两个人看的免费小视频| 深夜精品福利| 国产成人a∨麻豆精品| 黑丝袜美女国产一区| 99久久精品国产国产毛片| 永久免费av网站大全| 亚洲人与动物交配视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 欧美日韩视频精品一区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日韩制服骚丝袜av| 午夜影院在线不卡| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产精品女同一区二区软件| 女性生殖器流出的白浆| 我要看黄色一级片免费的| 国产免费一级a男人的天堂| 少妇 在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲少妇的诱惑av| 一级a做视频免费观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 天堂8中文在线网| 看十八女毛片水多多多| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产av一区二区精品久久| 亚洲国产精品999| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲人与动物交配视频| 日本色播在线视频| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲精品国产色婷婷电影| 色5月婷婷丁香| 日日摸夜夜添夜夜爱| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 一二三四在线观看免费中文在 | 九色亚洲精品在线播放| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 十八禁网站网址无遮挡| 精品久久久精品久久久| av女优亚洲男人天堂| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 免费看av在线观看网站| 美女国产视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 久久热在线av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲欧美清纯卡通| 18在线观看网站| 晚上一个人看的免费电影| 七月丁香在线播放| 国产午夜精品一二区理论片| 免费观看性生交大片5| 在线天堂最新版资源| 最近2019中文字幕mv第一页| 最黄视频免费看| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 国产一区二区激情短视频 | 国产成人精品一,二区| 伦理电影免费视频| videosex国产| 国产 精品1| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 久久久精品94久久精品| 女性生殖器流出的白浆| 曰老女人黄片| av福利片在线| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久午夜综合久久蜜桃| 免费高清在线观看日韩| 少妇 在线观看| 99热国产这里只有精品6| 亚洲第一av免费看| 国产激情久久老熟女| 高清视频免费观看一区二区| 一本久久精品| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲五月色婷婷综合| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 在线观看国产h片| 亚洲成色77777| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩伦理黄色片| 日本欧美视频一区| 青青草视频在线视频观看| 九九在线视频观看精品| 99热全是精品| 亚洲综合色惰| 国产精品不卡视频一区二区| 99久久综合免费| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美日韩亚洲高清精品| 大码成人一级视频| 久久久久精品人妻al黑| 女性被躁到高潮视频| 欧美日韩视频精品一区| 免费少妇av软件| 人人澡人人妻人| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久99热6这里只有精品| 极品人妻少妇av视频| h视频一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 满18在线观看网站| 国产精品蜜桃在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲熟女精品中文字幕| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 香蕉丝袜av| 久久精品久久久久久久性| 国产成人91sexporn| 赤兔流量卡办理| 亚洲高清免费不卡视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲美女搞黄在线观看| 精品一区在线观看国产| 国产精品一区二区在线观看99| 一本大道久久a久久精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产成人aa在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲成人一二三区av| 超色免费av| 欧美3d第一页| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产永久视频网站| 最近的中文字幕免费完整| 国产极品天堂在线| 激情视频va一区二区三区| 一区在线观看完整版| 亚洲av综合色区一区| 99热国产这里只有精品6| 乱人伦中国视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品国产一区二区三区四区第35| 日韩大片免费观看网站| 国产精品久久久av美女十八| 777米奇影视久久| 亚洲丝袜综合中文字幕| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲在久久综合| 卡戴珊不雅视频在线播放| 免费观看在线日韩| 蜜桃国产av成人99| 国产精品免费大片| 久久久久久久久久人人人人人人| 99热全是精品| 黑人高潮一二区| 九草在线视频观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 黄片无遮挡物在线观看| 成人综合一区亚洲| 国产av国产精品国产| 男的添女的下面高潮视频| 国产在线一区二区三区精| 丰满迷人的少妇在线观看| 男女免费视频国产| 中文字幕免费在线视频6| 多毛熟女@视频| 人体艺术视频欧美日本| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲欧洲日产国产| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 婷婷成人精品国产| 国产激情久久老熟女| 亚洲成人av在线免费| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲综合色网址| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产亚洲一区二区精品| 2018国产大陆天天弄谢| 国产男女超爽视频在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产成人精品在线电影| 欧美3d第一页| 一级a做视频免费观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美国产精品一级二级三级|