‘蓓蕾’藍靛果中花色苷組成鑒定及抗氧化能力比較分析

安小琦，王月華，孟憲軍*

（沈陽農(nóng)業(yè)大學食品學院，遼寧 沈陽 110866）

‘蓓蕾’藍靛果中花色苷組成鑒定及抗氧化能力比較分析

安小琦，王月華，孟憲軍*

（沈陽農(nóng)業(yè)大學食品學院，遼寧 沈陽 110866）

對藍靛果中花色苷的組成進行鑒定，并對其抗氧化能力進行比較分析。實驗以藍靛果（‘蓓蕾’品種）為原料，采用有機溶劑60%乙醇（0.1%鹽酸酸化）溶液，超聲輔助提取90 min；利用D101大孔樹脂對獲得的粗提物進行純化，之后冷凍干燥制得粉末物質。通過pH示差法和福林-酚法分別測定總花色苷含量和總多酚含量，分別為（353.35±0.79）、（474.01±2.12）mg/g；并用高效液相色譜-質譜聯(lián)用法對花色苷組成進行鑒定，共發(fā)現(xiàn)11 種花色苷，其中矢車菊-3-葡萄糖苷為主要花色苷（90.679%）。此外，實驗還通過總抗氧化能力測定和2，2’-聯(lián)氨-二（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽自由基、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力測定，比較分析藍靛果花色苷提取物、矢車菊-3-葡萄糖苷、VC的抗氧化能力，結果表明，3 種物質的抗氧化能力排序為：矢車菊-3-葡萄糖苷＞花色苷提取物＞VC。

蓓蕾藍靛果；花色苷；高效液相色譜-質譜聯(lián)用；抗氧化能力

藍靛果忍冬（Lonicera caerulea），又叫藍靛果、羊奶子、黑瞎子果、山茄子果等，屬茜草目，忍冬科，忍冬屬，具有“第三代水果”之稱［1］。其果實不僅含有豐富的營養(yǎng)物質如維生素、礦物質、有機酸等，而且含有花青素、酚類物質、黃酮等功效成分［2-3］。目前，國內外有關藍靛果的研究主要選用野生藍靛果為原料，對栽培品種的研究甚少?！砝佟{靛果是東北農(nóng)業(yè)大學人工培育出的國內第一個非野生藍靛果新品種，其果實比野生藍靛果大，卵圓形，兩端鈍圓，果肉幾乎是黑色，表皮有薄薄一層蠟質果霜，且味優(yōu)［4］，尤其是花色苷含量較野生藍靛果的更為豐富，適合作為天然色素原材料［5］。

花色苷屬于類黃酮物質中一類重要的化合物，主要存在于藍、紫色果蔬植物中。相關研究表明，花色苷具有抗氧化、緩解炎癥、改善視覺、抗心管疾病、抗糖尿病、減肥、改善肝功能及抗癌等功效［6-11］。國內外有關水果中花色苷的研究報道較多，例如藍莓、越橘等［12-14］。但是關于‘蓓蕾’藍靛果中花色苷組成鑒定及抗氧化能力的研究尚未報道。因此，對‘蓓蕾’藍靛果中花色苷組成及其抗氧化能力進行分析具有重要意義。

本實驗通過對‘蓓蕾’藍靛果果實中的花色苷進行提取、純化，并對其組成及抗氧化能力進行比較分析，為其品種的推廣及功能性評價提供理論依據(jù)，并為天然色素及功能性食品原材料的尋找提供一定的參考。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

成熟、完好的‘蓓蕾’藍靛果果實于2015年6月采自黑龍江省海林市，采收當天立即運回沈陽農(nóng)業(yè)大學食品學院實驗室，置于-20 ℃冰箱中冷凍保存，備用。

無水乙醇（分析純）、鹽酸（分析純）、乙腈（色譜純）、甲酸（色譜純）、氯化鉀、無水乙酸鈉 沈陽化學試劑廠；總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）試劑盒、2，2’-聯(lián)氨-二（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（2，2’-azinobis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate），ABTS）、K2S2O8、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1- diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、矢車菊-3-葡萄糖苷標準品、福林-酚試劑 北京鼎國生物試劑有限公司。

1.2儀器與設備

V5800型紫外-可見分光光度計 上海光析儀器有限公司；酸度計、電子天平 賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；SB25-12DTN超聲波清洗機 寧波新芝生物科技股份公司；JYL-C012九陽榨汁機 九陽股份有限責任公司；旋轉蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；層析實驗冷柜、BT-100B數(shù)顯恒流泵 上海滬西分析儀器廠有限公司；LGO.2型真空冷凍干燥機 信陽速凍設備制造有限公司；高效液相色譜儀（配DAD檢測器）、質譜儀美國Agilent公司；酶標儀 美國Bio-Tek公司。

1.3方法

1.3.1花色苷的提取

稱取600 g藍靛果果實常溫條件下避光解凍，用打漿機打漿后放入6 個2 000 mL燒杯中（每個燒杯中放入100 g），再分別加入1 000 mL 含0.1%鹽酸酸化的60%無水乙醇，玻璃棒攪拌后用保鮮膜封口，超聲輔助提取90 min，提取溫度為40 ℃。提取液經(jīng)抽濾、旋轉蒸發(fā)除去乙醇得到花色苷濃縮液，4 ℃條件下冷藏備用。

1.3.2花色苷的純化

根據(jù)前期花色苷純化優(yōu)化實驗結果，花色苷純化條件如下：稱取一定量的D101型大孔樹脂，活化后濕法裝柱，在層析實驗冷柜中用恒流泵將200 mL蒸餾水以4 mL/min的流速平衡過濾柱，平衡后以相同流速泵入花色苷濃縮液，泵入量為大孔樹脂體積的3/4，然后靜止吸附12 h。花色苷充分吸附后用400 mL蒸餾水以15 r/min的轉速洗掉花色苷中的糖等水溶性雜質，之后用無水乙醇以8 r/min的轉速對花色苷進行洗脫，收集洗脫液。得到的洗脫液經(jīng)旋轉蒸發(fā)除去乙醇后進行冷凍干燥，得到的花色苷粉末（純度由未純化前的4.76%提升到35.34%）分裝于2 mL離心管中，密封，于-20 ℃條件下貯藏備用。

1.3.3總花色苷及總多酚含量測定

采用pH示差法［15-16］測定提取物粉末中總花色苷含量。稱取提取物粉末0.01 g置于試管中，用10 mL蒸餾水溶解，將得到的溶液稀釋10 倍后，進行光譜掃描，確定其最大吸收波長。各取稀釋后樣品1 mL，分別加入pH 1.0、4.5的緩沖溶液9 mL，常溫平衡20 min后，于最大吸收波長λmax和700 nm波長處測定其吸光度A，以蒸餾水為空白，按式（1）計算總花色苷含量。

式中：ΔA=（Aλmax-A700nm）pH1.0-（Aλmax-A700nm）pH4.5；ε為矢車菊-3-葡萄糖苷的消光系數(shù)（26 900）；n為稀釋倍數(shù)；M為矢車菊-3-葡萄糖苷的相對分子質量（449.2）；V為待測樣品體積/mL；m為樣品質量/g。

采用福林-酚法［17-18］測定提取物粉末中總多酚含量。稱取花色苷粉末0.01 g，10 mL蒸餾水溶解后稀釋10 倍，準確量取1 mL稀釋液于20 mL試管中，依次加入5.0 mL蒸餾水、1 mL福林-酚顯色劑及3 mL 7.5%Na2CO3溶液，用渦輪振蕩器振蕩均勻，避光顯色2 h，在765 nm波長處測其吸光度。以沒食子酸為標準品繪制標準曲線，得到回歸方程為：y=0.081 05+5.011 43x（R2=0.999 6），沒食子酸在0～0.1 mg/mL范圍內具有良好的線性關系，根據(jù)標準曲線方程求出稀釋液中總多酚質量濃度。總多酚含量按式（2）計算。

式中：X為樣品中總多酚含量/（mg/g）；ρ為標準曲線上查得的稀釋液的總多酚質量濃度/（mg/mL）；V為待測液體積/mL；N為稀釋倍數(shù)；m為樣品質量/mg。

1.3.4花色苷組成鑒定

樣品準備：準確稱取10 μg樣品，溶于2 mL色譜級甲醇中，經(jīng)0.45 μm膜過濾，-4 ℃?zhèn)溆梅治觥?/p>

根據(jù)預實驗結果，高效液相色譜測定條件：1100高效液相色譜儀，配DAD檢測器；色譜柱：C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A：乙腈；流動相B：0.1%甲酸水溶液；梯度洗脫程序：0～45 min，A：0～45%；45～50 min，A：0%。流速：0.7 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量20 μL；檢測波長：520 nm。

質譜條件：正離子模式，全自動二級質譜掃描，掃描范圍m/z 50～1 000；干燥氣壓力30 psi；流速12 L/min；溫度350 ℃，毛細管電壓3 500 V。

1.3.5T-AOC測定

釆用T-AOC法測定‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物、矢車菊-3-葡萄糖苷和VC的T-AOC，具體操作參照T-AOC試劑盒說明書進行。實驗重復3 次，取平均值。T-AOC單位定義為在37℃時，每分鐘每毫克待測樣品，使反應體系的吸光度每增加0.01時，為一個T-AOC單位（U）。T-AOC按式（3）計算。

1.3.6ABTS+·清除能力測定

參照Li Xican等［19］的方法略作修改。將0.2 mL 7.4 mmol/L ABTS與0.2 mL 2.6 mmol/L K2S2O8室溫避光放置12 h，將混合液稀釋40～50 倍至A734nm=0.70±0.02得到ABTS工作液。量取0.8 mL ABTS工作液于1.5 mL離心管中，加入0.2 mL 80%乙醇，振蕩10 s以充分混勻，靜置6 min后在734 nm波長處測定反應液吸光度A0；再量取0.8 mL ABTS工作液于1.5 mL離心管中，加入0.2 mL樣品溶液，振蕩10 s以充分混勻，靜置6 min后在波長734 nm波長處測定反應液吸光度A。ABTS+·清除率按式（4）計算。

1.3.7DPPH自由基清除能力測定

參考呂春茂等［20］的方法并略作修改。稱取0.198 4 g DPPH用無水乙醇溶解，定容至50 mL，作為儲備液。吸取2 mL DPPH儲備液，用無水乙醇定容至100 mL，作為DPPH工作液待測。配制反應液：1）100 μL DPPH溶液+100 μL 70%乙醇；2）100 μL DPPH 溶液+100 μL樣品溶液；3）100 μL 70%乙醇+100μL樣品溶液。在常溫條件下避光反應30 min 后，以70%乙醇作空白，分別在517 nm波長處測定3 種反應液的吸光度依次為A0、Ai、Aj。DPPH自由基清除能力按式（5）計算。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進行數(shù)據(jù)顯著性及相關性分析，采用單因素方差分析的Tukey’s test用于顯著性分析，且P＜0.05，采用Origin 8.0 軟件作圖。

2　結果與分析

2.1‘蓓蕾’藍靛果中總花色苷含量及總酚含量

本實驗提取、純化、冷凍干燥后得到花色苷粉末12 g，提取率為2%。采用pH示差法測定‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物中總花色苷含量為（353.35±0.79） mg/g，換算成鮮果含量為（706.70±1.58）mg/100 g鮮果；用福林-酚法測定其總酚含量為（474.01±2.12）mg/g，換算成鮮果含量為（948.02±4.25）mg/100 g鮮果。經(jīng)分析，總花色苷含量占總酚含量的74.54%，說明‘蓓蕾’藍靛果主要的多酚類物質為花色苷類化合物。

2.2‘蓓蕾’藍靛果中花色苷高效液相色譜-質譜（high performance liquid chromatography-mass spectrum/ mass spectrum，HPLC-MS/MS）聯(lián)用法分析

圖1　‘蓓蕾’藍靛果提取物中花色苷HPLC圖Fig.1　HPLC of anthocyanins from ‘Beilei’ Lonicera caerulea berry extracts

表1　HPLC-MS/MS法鑒定‘蓓蕾’藍靛果提取物中花色苷組成Table1　Identification of anthocyanins in ‘Beiilleeii’ Lonicera caerulea berry extracts by HPLC-MS/MMSS

通過HPLC-MS/MS對‘蓓蕾’藍靛果中花色苷進行成分鑒定分析，得到色譜圖（圖1）及質譜圖（圖2）。結合各物質的色譜保留時間、分子離子峰和碎片離子峰，鑒定出‘蓓蕾’藍靛果中有11 種花色苷（表1，其中第11 種花色苷trA矢車菊-3-蕓香糖苷只能在質譜條件下被檢測到，未在表中顯示）。

圖2　矢車菊-3，5-二己糖苷的一級（A）、二級（B）質譜圖（峰1物質）Fig.2　MS （A） and MS/MS （B） spectra of cyanidin-3，5-dihexoside（corresponding to peak 1）

圖3　矢車菊-3-乙?；禾擒盏囊患墸ˋ）、二級（B）質譜圖（峰9物質）Fig.3　MS （A） and MS/MS （B） spectra of cyanidin3-（6” acetylhexoside）（corresponding to peak 9）

圖4　矢車菊-3-蕓香糖苷的一級（A）、二級（B）質譜圖（trA物質）Fig.4　MS （A） and MS/MS （B） spectra of cyanidin-3-rutinoside（corresponding to peak trA）

［23-24］可知，碎片離子m/z 287為矢車菊素的配離子峰，m/z 301為芍藥素的配離子峰，m/z 271為天竺葵素的配離子峰。以峰1物質質譜圖例進行詳細分析，其他物質質譜圖不一一列出。由圖2可知，峰1物質分子離子m/z 611，其碎片離子m/z 499是由母離子失去一分子己糖［M-162］+得到，m/z 287與m/z 499之間也相差一分子己糖，表明峰1為含有2 個己糖的矢車菊花色苷，則峰1物質為矢車菊-3，5-二己糖苷［25］。同理，峰4物質為芍藥素-3，5-二己糖苷。表1中5、6、7號峰分子離子分別為m/z 449、m/z 433、m/z 463，均為失去一分子葡萄糖［M-162］+得到，結合其保留時間可知，峰5～7物質分別為矢車菊-3-葡萄糖苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷和芍藥素-3-葡萄糖苷。峰2物質分子離子m/z 737，其碎片離子m/z 575，是由母離子失去一分子己糖［M-162］+得到，m/z 287與m/z 575之間相差質量數(shù)為308，但殘基物質不能確定，所以峰2物質為矢車菊-3-己糖苷衍生物，這與Veberic等［21］研究結果一致。峰8物質分子離子m/z 609，其碎片離子為m/z 463和m/z 301，是由母離子連續(xù)失去一分子脫水甲基戊糖（m/z 146）和一分子己糖（m/z 162）而得，所以峰8物質為芍藥素-3-蕓香糖苷［22，26］。峰9物質分子離子m/z 491，其碎片離子m/z 287是由母離子失去一分子乙?；禾牵╩/z 204）得到［27］，所以峰9物質為矢車菊-3-乙?；禾擒?，該物質被首次在藍靛果花色苷提取物中發(fā)現(xiàn)，其二級質譜圖見圖3。峰3和峰10物質分子離子相同均為m/z 897，其碎片離子分別為m/z 735、m/z 573、m/z 287、m/z 735和m/z 573，根據(jù)其保留時間及文獻［23-24］分析可知峰3物質為矢車菊-己糖苷聚合體，峰10物質為矢車菊-3-己糖苷聚合體。此外，trA矢車菊-3-蕓香糖苷在質譜條件下被檢測到（圖4），但是該物質在液相色譜中沒有出峰，這與Lohachoompol等［28］的研究結果相一致，出現(xiàn)該現(xiàn)象的原因可能是矢車菊-3-蕓香糖苷含量很少，在較為靈敏的質譜檢測系統(tǒng)中可以檢測到。所有花色苷單體中矢車菊-3-葡萄糖苷含量最高，占峰面積的90.679%，與Chen Liang等［29］對野生藍靛果中花色苷成分分析的研究結果相似。

2.3‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物抗氧化能力比較分析

2.3.1T-AOC比較分析

圖5　‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物、矢車菊-3-葡萄糖苷和VC的T-AOC比較Fig.5　T-AOC of ‘Beilei’ L. caerulea berry anthocyanin extracts，cyanidin-3-glucoside and VC

用T-AOC法分別測定‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物、矢車菊-3-葡萄糖和VC的T-AOC，每種物質做3 組平行實驗，數(shù)據(jù)取3 個平行組的平均值，結果見圖5。結果表明，矢車菊-3-葡萄糖苷的T-AOC值最高為27.6 U/mg，其次為‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物（10.47 U/mg）。并且Tukey’s test分析表明，矢車菊-3-葡萄糖苷的T-AOC顯著高于‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物和VC（4.395 U/mg）（P＜0.05）?！砝佟{靛果花色苷提取物的T-AOC比VC高6.07 U/mg，但二者無顯著性差異（P＞0.05）。‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物的T-AOC低于矢車菊-3-葡萄糖苷，可能是因為提取物中矢車菊-3-葡萄糖苷含量相對較低。此外，相關性分析表明，‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物的T-AOC與總花色苷和總酚含量呈顯著正相關（P＜0.05，R2=0.881；P＜0.05，R2=0.902）。

2.3.2ABTS+·清除能力比較分析

圖6　‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物、矢車菊-3-葡萄糖苷和VC的ABTS+·清除能力比較Fig.6　ABTS+? scavenging activity of ‘Beilei’ L. caerulea berry anthocyanin extracts， cyanidin-3-glucoside and VC

ABTS+·清除能力測定是評估化合物抗氧化能力的重要指標。實驗分別測定相同質量濃度（50 μg/mL）‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物、矢車菊-3-葡萄糖和VC的ABTS+·清除率，每種物質做3 組平行實驗，數(shù)據(jù)取3 個平行組的平均值，結果見圖6。結果表明，矢車菊-3-葡萄糖苷和‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物的ABTS+·清除率分別為94.34%、93.68%，且二者并無顯著差異（P＞0.05）。矢車菊-3-葡萄糖苷和‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物的ABTS+·清除率均顯著高于VC（60.00%）（P＜0.05）。相關性分析表明，‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取的ABTS+·清除能力與總花色苷和總酚含量呈顯著正相關（P＜0.05，R2=0.804；P＜0.05，R2=0.882）。

2.3.3DPPH自由基清除能力比較分析

圖7　‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物、矢車菊-3-葡萄糖苷和VC的DPPH自由基清除率比較Fig.7　DPPH radical scavenging activity of ‘Beilei’ L. caerulea berry anthocyanin extracts， cyanidin-3-glucoside and VC

分別測定相同質量濃度（50 μg/mL）‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物、矢車菊-3-葡萄糖和VC的DPPH自由基清除率，每種物質做3 組平行實驗，數(shù)據(jù)取3 個平行組的平均值，結果見圖7。結果表明，3 種不同物質的DPPH自由基清除能力具有顯著差異（P＜0.05）。矢車菊-3-葡萄糖苷的DPPH自由基清除率最高，為72.13%，其次為花色苷提取物和VC，分別為44.45%和21.33%。此外，顯著性分析表明，矢車菊-3-葡萄糖苷的DPPH自由基清除率顯著高于‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物和VC（P＜0.05）；同時，‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取物的DPPH自由基清除率顯著高于VC（P＜0.05）。此外，相關性分析表明，‘蓓蕾’藍靛果花色苷提取的DPPH自由基清除能力與總花色苷和總酚含量呈顯著正相關（P＜0.05，R2=0.831；P＜0.05，R2=0.892）。

3　結 論

本實驗對藍靛果栽培品種——‘蓓蕾’中花色苷進行提取分離并純化，測定其花色苷提取物中總花色苷和總多酚含量分別為（353.35±0.79）、（474.01±2.12） mg/g。通過HPLC-MS/MS鑒定出11 種花色苷，分別為矢車菊-3，5-二己糖苷、矢車菊-3-己糖苷衍生物、矢車菊-己糖苷聚合體、芍藥素-3，5-二己糖苷、矢車菊-3-葡萄糖苷、矢車菊-3-蕓香糖苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷、芍藥素-3-葡萄糖苷、芍藥素-3-蕓香糖苷、矢車菊-3-乙?；禾擒铡⑹杠嚲?3-己糖苷聚合體。其中矢車菊-3-葡萄糖苷含量最高，占峰面積的90.679%。另外，T-AOC、ABTS+·和DPPH自由基清除能力測定結果均表明，矢車菊-3-葡萄糖苷的T-AOC及ABTS+·和DPPH自由基清除能力均強于花色苷提取物和VC。綜上可知，‘蓓蕾’藍靛果中花色苷含量和種類豐富，且其中含量最高的矢車菊-3-葡萄糖苷有很強的抗氧化能力，其T-AOC為VC的6.28 倍，ABTS+·和DPPH自由基清除能力分別為VC的1.57和3.37 倍。

參考文獻：

［1］ 王振宇， 田福. 藍靛果紅色素穩(wěn)定性的研究［J］. 中國食品添加劑，2007， 18（3）: 102-105. DOI:10.3969/j.issn.1006-2513.2007.03.020.

［2］ 包怡紅， 李文星， 齊君君， 等. 提取條件對藍靛果花色苷抗氧化活性的影響［J］. 食品科學， 2010， 31（22）: 20-25.

［3］ PALíKOVá I， HEINRICH J， BEDNá? P， et al. Constituents and antimicrobial properties of blue honeysuckle: a novel source for phenolic antioxidants［J］. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2008， 56（24）: 11883-11889. DOI:10.1021/jf8026233. 2008. 11.24.

［4］ 劉桂萍， 汪宗仁， 馬炳清， 等. 勃利縣栽培種植藍靛果新品種-蓓蕾栽培技術［J］. 中國林副特產(chǎn)， 2015（3）: 64-65. DOI:10.13268/j.cnki. fbsic.2015.03.031.

［5］ 李英福， 汪宗仁. 淺談藍靛果新品種——“蓓蕾”新技術［J］. 農(nóng)村實用科技信息， 2015（8）: 3. DOI:10.3969/j.issn.1674-0653.2015.08.001.

［6］ BA?KAN K S? TüTEM E， AKYüZ E， et al. Assessment of the contributions of anthocyanins to the total antioxidant capacities of plant foods［J］. European Food Research and Technology， 2015， 241: 529-541. DOI:10.1007/s00217-015-2482-2.

［7］ PHILPOTT M， LIM C C， FERGUSON L R. Dietary protection against free radicals: a case for multiple testing to establish structure-activity relationships for antioxidant potential of anthocyanic plantspecies［J］. International Journal of Molecular Sciences， 2009（10）: 1081-1103. DOI:10.3390/ijms10031081.

［8］ 徐貞貞， 廖小軍. 花色苷生理功能研究進展［J］. 中國食物與營養(yǎng)，2014， 20（10）: 65-68. DOI:10.3969/j.issn.1006-9577.2014.10.017.

［9］ 鄭韻， 董全. 花色苷在體內的藥理活性及其作用機制研究進展［J］. 食品工業(yè)科技， 2014， 35（10）: 396-400. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2014.10.079.

［10］ YI Weiguang， FISCHER J， KREWER G， et al. Phenolic compounds from blueberrise can inhibit colon cancer cell proliferation and induce apoptosis［J］. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2005， 53: 7320-7329. DOI:10.1016/j.semcancer.2007.05.001.

［11］ JUNG H， LEE H J， CHO H， et al. Anthocyanins in Rubus fruits and antioxidant and anti-inflammatory activities in RAW 264.7 cells［J］. Food Science and Biotechnology， 2015， 24（5）: 1879-1886. DOI:10.1007/s10068-015-0246-1.

［12］ 胡濟美， 籍保平， 周峰， 等. 大興安嶺篤斯越橘花色苷成分鑒定研究［J］. 食品科學， 2009， 30（10）: 239-241. DOI:10.3321/ j.issn:1002-6630.2009.10.056.

［13］ JO Y N， JIN D E， JEONG J H， et al. Berry extracts effect of anthocyanins from rabbit-eye blueberry （Vaccinium virgatum） on cognitive function in miceunder trimethyltin-induced neurotoxicity［J］. Food Science and Biotechnology， 2015， 24（3）: 1077-1085. DOI:10.1007/s10068-015-0138-4.

［14］ KRAUJALYT? V， VENSKUTONIS P R， PUKALSKAS A， et al. Antioxidant properties， phenolic composition and potentiometric sensor array evaluation of commercial and new blueberry（Vaccinium corymbosum） and bog blueberry （Vaccinium uliginosum）genotypes［J］. Food Chemistry， 2015， 118： 583-590. DOI：10.1016/ j.foodchem.2015.05.031.

［15］ 宋德群， 孟憲軍， 王晨陽， 等. 藍莓花色苷的pH示差法測定［J］.沈陽農(nóng)業(yè)大學學報， 2013， 43（2）: 231-233. DOI:10.3969/ j.issn.1000-1700.2013.02.019.

［16］ 楊兆艷. pH示差法測定桑椹紅色素中花青素含量的研究［J］. 食品科技， 2007， 32（4）: 201-202. DOI:10.3969/j.issn.1005-9989.2007.04.060.

［17］ 李斌， 雷月， 孟憲軍， 等. 響應面法優(yōu)化超聲波輔助提取藍靛果多酚工藝及其抗氧化活性研究［J］. 食品科學， 2015， 36（22）: 33-39. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201522006.

［18］ 卜彥花， 周娜娜， 王春悅， 等. 福林酚試劑法和紫外分光光度法測定冬棗多酚含量的比較研究［J］. 中國農(nóng)學通報， 2012， 28（1）: 212-217. DOI:10.3969/j.issn.1000-6850.2012.01.041.

［19］ LI Xican， LIN Jing， GAO Yaoxiang， et al. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicfugae［J］. Chemistry Central Journal，2012， 6: 140. DOI:10.1186/1752-153X-6-140.

［20］ 呂春茂， 王新現(xiàn)， 包靜， 等. 越橘果實花色苷的體外抗氧化性［J］. 食品科學， 2010， 31（23）: 27-31.

［21］ VEBERIC R， SLATNAR A， BIZJAK J， et al. Anthocyanin composition of different wild and cultivated berryspecies［J］. LWTFood Science and Technology， 2015， 60（1）: 509-517. DOI:10.1016/ j.lwt.2014.08.033.

［22］ MYJAVCOVá R， MARHOL P， K?EN V， et al. Analysis of anthocyanin pigments in Lonicera （Caerulea） extracts using chromatographic fractionation followed by microcolumn liquid chromatography-mass spectrometry［J］. Journal of Chromatography A，2010， 1217（51）: 7932-7941. DOI:10.1016/j.chroma.2010.05.058.

［23］ 羅赟， 陳宗玲， 宋衛(wèi)堂， 等. 草莓果實花色苷成分組成鑒定及分析［J］. 中國農(nóng)業(yè)大學學報， 2014， 19（5）: 86-94. DOI:10.11841/ j.issn.1007-4333.2014.05.12.

［24］ 趙善倉， 劉賓， 趙領軍， 等. 藍、紫粒小麥籽?；ㄉ战M成分析［J］. 中國農(nóng)業(yè)科學， 2010， 43（19）: 4072-4080. DOI:10.3864/ j.issn.0578-1752.2010.19.020.

［25］ 劉德江， 杜漢軍， 申健. 藍靛果花色苷研究進展［J］. 內蒙古農(nóng)業(yè)科技，2012（4）: 44-45. DOI:10.3969/j.issn.1007-0907.2012.04.020.

［26］ 譚亮， 董琦， 曹靜亞， 等. 黑果枸杞中花色苷的提取與結構鑒定［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)， 2014（11）: 1797-1803.

［27］ 舒希凱， 趙恒強， 王岱杰， 等. 高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質譜法鑒定芍藥花色苷［J］. 食品與藥品， 2013， 15（1）: 38-41. DOI:10.3969/ j.issn.1672-979X.2013.01.013.

［28］ LOHACHOOMPOL V， MULHOLLAND M， SRZEDNICKI G， et al. Determination of anthocyanins in various cultivars of highbush and rabbiteye blueberries［J］. Food Chemistry， 2008， 111: 249-254. DOI:10.1016/j.foodchem.2008.03.067.

［29］ CHEN Liang， XIN Xiulan， LAN Rong， et al. Isolation of cyanidin 3-glucoside from blue honeysuckle fruits by high-speed countercurrent chromatography［J］. Food Chemistry， 2014， 152: 386-390. DOI:10.1016/j.foodchem.2013.11.080.

Identification and Comparative Analysis of Antioxidant Ability of Anthocyanins in Lonicera caerulea Berry Extracts

AN Xiaoqi， WANG Yuehua， MENG Xianjun*
（College of Food Science， Shenyang Agricultural University， Shenyang 110866， China）

The identification of anthocyanins composition and antioxidant activity of Lonicera caerulea berry extracts was investigated in this study. ‘Beilei’ L. caerulea berries were ultrasonically extracted with 60% ethanol containing 0.1% HCl for 90 min. D101 macroporous resin was used to purify the obtained extracts. After that， freeze drying was conducted to obtain powder. The contents of total anthocyanins and polyphenols were determined using pH differential and Folinreagent method as （353.35 ± 0.79） mg/g and （474.01 ± 2.12） mg/g， respectively. High performance liquid chromatographytandem mass spectrometry （HPLC-MS/MS） was used for the identification of anthocyanin composition. A total of 11 individual anthocyanins were found with cyanidin-3-glucoside （90.679%） being the major anthocyanin. Additionally， total antioxidant capacity （T-AOC） and 2，2’-azinobis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate） radical （ABTS+·）， 1，1- diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH） radical scavenging activities of L. caerulea berry extracts， cyanidin-3-glucoside and VC were comparatively analyzed， and the results revealed a decreasing order of cyanidin-3-glucoside ＞ L. caerulea berry extract ＞ VC.

Lonicera caerulea berry； anthocyanins； high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（HPLC-MS/MS）； antioxidant activity

10.7506/spkx1002-6630-201619014

TS207.3

A

1002-6630（2016）19-0082-06

安小琦， 王月華， 孟憲軍. ‘蓓蕾’藍靛果中花色苷組成鑒定及抗氧化能力比較分析［J］. 食品科學， 2016， 37（19）： 82-87. DOI：10.7506/spkx1002-6630-201619014. http：//www.spkx.net.cn

AN Xiaoqi， WANG Yuehua， MENG Xianjun. Identification and comparative analysis of antioxidant ability of anthocyanins in Lonicera caerulea berry extracts［J］. Food Science， 2016， 37（19）： 82-87. （in Chinese with English abstract） DOI：10.7506/ spkx1002-6630-201619014. http：//www.spkx.net.cn

2016-03-02

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項（201303073-04）；遼寧省科技攻關項目（2011205001）；遼寧省農(nóng)業(yè)科技（北方果蔬貯藏與加工）創(chuàng)新團隊項目（2014020066-201）

安小琦（1992—），男，碩士研究生，研究方向為農(nóng)產(chǎn)品加工與貯藏工程。E-mail：934311974@qq.com

孟憲軍（1960—），男，教授，博士，研究方向為小漿果深加工。E-mail：mengxjsy@126.com