miR-17-92在急性肝臟損傷中的功能和作用

王若素，高慧英，賽巖，崔春萍

miR-17-92在急性肝臟損傷中的功能和作用

王若素，高慧英，賽巖，崔春萍

目的 利用體外細胞模型和基因敲低模型評價 miR-17-92在急性肝臟損傷中的作用。

方法 利用慢病毒 LV-miR-17-92 感染正常人肝細胞系L02，獲得穩(wěn)定過表達 miR-17-92 肝臟 L02 細胞，利用四氯化碳模擬肝細胞損失，MTS 法檢測 miR-17-92 高表達L02 細胞和對照細胞的存活率。利用 Alb-cre 轉(zhuǎn)基因小鼠和 miR-17-92-loxp 轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，獲得肝臟組織特異的miR-17-92 基因敲低小鼠。利用四氯化碳和伴刀豆球蛋白A，分別建立兩種急性小鼠肝損傷模型。取肝臟組織進行 HE染色，眼球取血檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶，進而評價miR-17-92 在急性肝臟損傷中的功能和作用。

結(jié)果 Q-PCR 結(jié)果顯示慢病毒感染顯著提高了 L02 細胞中 miR-17-92 的表達。MTS 結(jié)果顯示四氯化碳處理明顯抑制了 L02 細胞的生長，而與對照組相比，miR-17-92 過表達提高了四氯化碳處理后細胞的存活率（P ＜ 0.05）。基因組PCR 結(jié)果和肝臟 Q-PCR 分析均顯示肝臟特異 miR-17-92基因敲低小鼠肝臟中 miR-17-92 的表達顯著降低。小鼠腹腔四氯化碳給藥能夠顯著誘導(dǎo)野生型小鼠肝臟 miR-17-92的水平，而基因敲低小鼠中 miR-17-92 表達無明顯變化。在四氯化碳和伴刀豆球蛋白 A 肝臟損傷模型中，與對照組相比，miR-17-92 肝臟特異性敲低小鼠的肝臟病理學(xué)損傷明顯加重，提示 miR-17-92 可能參與了急性肝損傷的修復(fù)過程。

結(jié)論 肝臟損傷能夠誘導(dǎo) miR-17-92 表達增加，而miR-17-92 過表達對四氯化碳誘導(dǎo)的肝細胞損傷具有保護作用，miR-17-92 敲除則加重了四氯化碳和伴刀豆球蛋白 A誘導(dǎo)的急性肝損傷。因此，miR-17-92 在急性肝臟損傷中起保護作用。

miR-17-92； 肝損傷； Alb-cre-loxp 系統(tǒng)；CCl4； 伴刀豆球蛋白 A

www.cmbp.net.cn 中國醫(yī)藥生物技術(shù), 2016, 11(5):407-414

我國是病毒性肝炎高發(fā)國家，目前約有 3000萬的慢性乙肝患者以及 1.2 億乙肝病毒攜帶者，每年因肝炎引起的急性肝衰竭和肝硬化死亡的人數(shù)超過 30 萬。此外，隨著生活水平的提高，因肥胖、營養(yǎng)過剩、飲酒以及藥物所引起的肝損傷發(fā)生率也高達 26% ～ 34%［1］。因此，探索急性肝臟損傷及修復(fù)的分子機制，尋找新的藥物靶標(biāo)，對于發(fā)展新的急性肝臟病治療藥物十分重要。微 RNAs（miRNAs）是一類由 21 ～ 25 個核苷酸組成的小段非編碼 RNA，約占人類總基因的 3%，能夠通過與靶基因 mRNA 的 3' 非翻譯區(qū)或 mRNA 序列結(jié)合，進而導(dǎo)致 mRNA 的降解或抑制 mRNA翻譯的方式，調(diào)控靶基因的表達，從而參與多種生命過程［2］。已有的研究顯示，相當(dāng)多的 miRNA 參與了不同因素誘導(dǎo)的肝臟損傷［3］，如 miR-122 作為一個在肝臟中表達豐度較高的 miRNA，肝臟細胞受損后，表達水平顯著提高，并分泌到血液中，常被作為一個急性肝臟損傷的標(biāo)志物［4］。miR-33、miR-103、miR-104 和 miR-370 也被報道參與了肝臟脂代謝和糖代謝的過程，進而在肝臟損傷修復(fù)過程中發(fā)揮作用［5］。

miR-17-92 基因簇是一個高度保守的基因簇，編碼 miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1 和 miR-92-1 七個 miRNAs，有 miR-106a-363 和 miR-106b-25 基因簇兩個旁系同源體。miR-17-92 基因簇是目前研究最多的miRNA 簇，研究發(fā)現(xiàn) miR-17-92 基因簇在機體正常生長發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、心血管疾病和衰老等過程中發(fā)揮非常重要的作用［6］，并且有許多研究表明，miRNA 及其旁系同源體在不同腫瘤中表現(xiàn)原癌基因特性［7］，例如 B 細胞淋巴瘤、急性骨髓性白血病、成視網(wǎng)膜細胞瘤、胰腺癌、乳腺癌等。miR-17-92 在肝臟疾病中的報道還不多，僅有 miR-17-92 缺失導(dǎo)致 p21 和 PTEN 蛋白表達升高，抑制肝臟再生［8］。

此研究中，我們構(gòu)建了 miR-17-92 肝臟特異性敲低小鼠，利用四氯化碳（CCl4）和伴刀豆球蛋白A（ConA）肝損傷模型，評價 miR-17-92 對急性肝臟損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

miR-17-92-loxp 轉(zhuǎn)基因小鼠（STOCK Mir17-92tm1.1Tyj/J）和 Alb-cre 轉(zhuǎn)基因小鼠［B6.Cg-Tg（Alb-cre）21Mgn/J］購自美國 Jackson Lab；C57BL/6J 小鼠購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司；人正常肝臟細胞系 L02 購自中國科學(xué)院上海細胞庫。胎牛血清（FBS）、胰酶、RPMI 1640 培養(yǎng)液等購自美國 Hyclone 公司。ConA IV購自美國 Sigma 公司；CCl4、橄欖油為國產(chǎn)試劑。Cell Proliferation Assay（MTS）購自美國 Promega公司；血液組織細胞基因組提取試劑盒和 Taq PCR Master Mix 購自天根生化科技（北京）有限公司。Trizol 購自美國 Invitrogen 公司；Taqman MicroRNA Reverse Transcription Kit 購自美國 ABI公司；miR-17-92 探針由 Applied Biosystems 合成；PCR 引物由北京奧科鼎盛公司合成，引物序列見表 1。

表 1 miR-17-92 基因簇序列Table 1 miR-17-92 gene cluster sequence

1.2 方法

1.2.1 miR-17-92 穩(wěn)定高表達 L02 細胞的建立和鑒定 感染前一天，按每孔 4 × 105個細胞接種L02 細胞至六孔板中，37 ℃、5% CO2、飽和水汽條件下培養(yǎng)過夜后，按照 10 MOI 的量加入慢病毒LV-pcDH-miR-17-92 及對照慢病毒 LV-pcDH-CMV（慢病毒均由本實驗室自行包裝），常規(guī)培養(yǎng) 4 ～6 h 后更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng) 48 h。消化傳代感染后的 L02-17-92OE 和 L02-NTC 細胞，待25 cm2細胞培養(yǎng)瓶中細胞密度合適時，提取細胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄，Taqman Q-PCR 檢測 miR-17-92 的表達。

1.2.2 CCl4肝細胞損傷模型的建立 取對數(shù)生長期 L02-17-92OE 和 L02-NTC 細胞，按 3 × 103個/100 μl 接種于 96 孔細胞培養(yǎng)板，設(shè)置不加細胞的培養(yǎng)基空白對照，常規(guī)培養(yǎng) 24 h 后，加入不同濃度 CCl4（5、10、15、20、25 mmol/L），設(shè)置只加培養(yǎng)基的正常對照組，12 h 更換為每孔 20 μl MTS 和 100 μl DMEM 繼續(xù)培養(yǎng)，1 ～ 2 h 后用酶聯(lián)免疫檢測儀在 490 nm 波長下測定各孔吸光度（A），按照以下公式計算細胞存活率：

1.2.3 miR-17-92 肝臟特異性敲低小鼠建立 利用 miR-17-92 基因突變小鼠和 Alb-cre 轉(zhuǎn)基因小鼠，根據(jù) Jackson Lab 的飼養(yǎng)繁殖和鑒定方法，將兩個品系小鼠進行雜交，于 F1 代得到雜合子小鼠，繼續(xù)進行交配，于 F2 代得到 miR-17-92肝臟特異性突變小鼠。處死小鼠，取肝臟，固定，送北京雪邦生物技術(shù)公司，蠟塊包埋，切片，HE染色。

1.2.4 miR-17-92 肝臟特異性突變小鼠基因型鑒定 剪鼠尾 0.5 cm，根據(jù)血液組織細胞基因組提取試劑盒提取小鼠總 DNA，PCR 擴增，瓊脂糖凝膠電泳驗證小鼠基因型。

1.2.5 miR-17-92 效率鑒定 處死小鼠，取肝臟100 mg，用液氮冷凍后研磨，加入 1 ml Trizol，混勻，按照 RNA 提取步驟提取小鼠肝臟 RNA，反轉(zhuǎn)錄，Taqman Q-PCR 檢測 miR-17-92 的表達。

1.2.6 ConA 肝損傷模型建立 取相同周齡雄性miR-17-92 肝組織特異性敲低小鼠和野生型（WT）C57BL/6J 小鼠各 6 只，小鼠按 15 mg/kg 的量尾靜脈注射 2.5 mg/ml ConA 生理鹽水混合液，常規(guī)飼養(yǎng) 24 h 后，眼球取血，血清送北京北方生物技術(shù)研究所檢測血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）。處死小鼠，取肝臟，固定，送北京雪邦生物技術(shù)公司，蠟塊包埋，切片，HE 染色。

1.2.7 CCl4肝損傷模型建立 取相同周齡雄性 miR-17-92 肝組織特異性敲低小鼠和野生型C57BL/6J 小鼠各 6 只，造模前禁食水 12 h，40% CCl4的橄欖油混合液，按照 2 ml/kg 體重的量灌胃小鼠，灌胃后繼續(xù)禁食水 4 h，常規(guī)飼養(yǎng) 24 h 后，眼球取血，血清送北京北方生物技術(shù)研究所檢測血漿 ALT、AST。處死小鼠，取肝臟，固定，送北京雪邦生物技術(shù)公司，蠟塊包埋，切片，HE 染色，另外取 100 mg 肝臟檢測 miR-17-92 表達。

1.2.8 肝細胞損傷分級 根據(jù)文獻［9］，將肝細胞損傷分為五級并計分：①G0 期，匯管區(qū)及周圍無炎癥，肝小葉內(nèi)無炎癥，得分 0；②G1 期，匯管區(qū)炎癥，肝細胞變性，有少量壞死，得分 1；③G2期，匯管區(qū)及周圍輕度碎屑壞死，肝細胞變性，出現(xiàn)點、灶狀壞死，出現(xiàn)嗜酸小體，得分 2；④G3 期，匯管區(qū)及周圍中度碎屑壞死，肝細胞變性、壞死，融合或出現(xiàn)橋接壞死，得分 3；⑤G4 期，匯管區(qū)及周圍重度碎屑壞死，廣泛的橋接壞死，累及多個肝小葉，得分 4。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 穩(wěn)定過表達 miR-17-92 的 L02 人正常肝細胞（miR-17-92OE）的建立

圖1 慢病毒感染后熒光顯微鏡下 GFP 的表達Figure 1 The expression of GFP after lentivirus injected under fluorescence microscope

圖2 慢病毒感染后 L02-17-92OE 細胞與 L02-NTC 細胞中 miR-17-92 的表達Figure 2 The expression of miR-17-92 after lentivirus injected in L02-17-92OE and L02-NTC

圖3 不同濃度 CCl4處理后 L02-17-92OE 細胞和L02-NTC 細胞的存活率Figure 3 The survival rate of L02-17-92OE and L02-NTC after exposed on different concentrations of CCl4

圖4 miR-17-92-loxp（A）和 Alb-cre（B）基因型Figure 4 Genotype of miR-17-92-loxp （A） and Alb-cre （B）

圖5 miR-17-92liver-/-小鼠與野生型小鼠肝臟 HE 染色（100 倍光鏡下）Figure 5 The liver HE staining of miR-17-92liver-/-mice and WT mice （under × 100 light microscope）

用制備的慢病毒 LV-pcDH-miR-17-92 和對照病毒 LV-pcDH-CMV-GFP 分別感染 L02 細胞，常規(guī)培養(yǎng)兩周后，熒光顯微鏡下觀察細胞中 GFP 的表達，由圖 1 可見，感染慢病毒后，細胞中有明顯GFP 的表達。同時，收集細胞，Trizol 法提取細胞總 RNA，Taqman Q-PCR 法檢測細胞中 miR-17-92的表達。圖 2 結(jié)果顯示，L02-miR-17-92OE 細胞中 miR-17-92 基因簇 6 個成員表達均比對照細胞L02-NTC 增加 10 倍以上。

2.2 miR-17-92 過表達提高 CCl4損傷下肝細胞存活率

常規(guī)培養(yǎng) L02-miR-17-92OE 細胞和 L02-NTC細胞中加入不同濃度［10］的 CCl4（5、10、15、20、25 mmol/L）培養(yǎng) 12 h，利用 MTS 法檢測細胞的存活率。圖 3 結(jié)果顯示，不同濃度 CCl4處理后，細胞數(shù)量顯著減少，但 L02-miR-17-92OE 細胞的存活率明顯高于 L02-NTC 對照細胞（P ＜ 0.05）。

2.3 肝組織特異 miR-17-92 基因敲低小鼠建立

miR-17-92 和 Alb-cre 轉(zhuǎn)基因小鼠提取鼠尾基因組 DNA，利用 PCR 分別鑒定。結(jié)果如圖 4所示，miR-17-92 基因突變純合子小鼠（STOCK Mir17-92tm1.1Tyj/J）的 loxp 基因條帶位于 289 bp處，野生型的基因條帶位于 255 bp 處。Alb-cre 轉(zhuǎn)基因純合子小鼠［B6.Cg-Tg（Alb-cre）21Mgn/J］基因條帶位于 100 bp 處，野生型的基因條帶位于390 bp 處。兩種轉(zhuǎn)基因小鼠雜交后的第一代均為Alb-cre-miR-17-92 雜合子。雜交后第二代中miR-17-92 基因突變純合子同時 Alb-cre 轉(zhuǎn)基因純合子小鼠即為實驗所需的 miR-17-92 肝組織特異性敲低小鼠（miR-17-92liver-/-）。肝組織 HE 染色顯示，miR-17-92 肝組織特異性敲低小鼠的肝組織結(jié)構(gòu)與野生型小鼠無差別（圖 5），但是 Q-PCR 結(jié)果顯示，miR-17-92 肝組織特異性敲低小鼠肝臟中miR-17-92 各成員的表達均低于野生型小鼠，且表達量均低于 40%（圖 6）。

圖6 miR-17-92liver-/-小鼠與野生型小鼠肝臟 miR-17-92的表達Figure 6 The expression of miR-17-92 in liver of miR-17-92liver-/-mice and WT mice

圖7 miR-17-92liver-/-小鼠與野生型小鼠 CCl4處理前后肝臟 miR-17-92 的表達Figure 7 The expression of miR-17-92 in liver of miR-17-92liver-/-mice and WT mice after exposed on CCl4

2.4 CCl4處理后肝臟中 miR-17-92 表達上調(diào)

為了檢測肝臟損傷后 miR-17-92 表達變化，在腹腔注射 CCl4后 24 h，提取小鼠肝組織總 RNA，檢測 miR-17-92 表達，結(jié)果如圖 7 所示， WT 小鼠在 CCl4處理后，肝組織 miR-17-92 的表達明顯上升（P ＜ 0.05），而 miR-17-92liver-/-小鼠相對于CCl4處理前，miR-17-92 表達稍有上調(diào)，但無明顯差異。

2.5 miR-17-92 在 CCl4肝臟損傷中的作用

在 CCl4引起的肝臟損傷中，miR-17-92liver-/-組的肝指數(shù) 55.79 ± 0.23 高于 WT 小鼠的肝指數(shù)3.60 ± 0.44，提示 miR-17-92liver-/-組小鼠肝臟的腫脹程度和炎細胞浸潤程度高于 WT 組。在 CCl4引起的肝臟損傷中，miR-17-92liver-/-組的血清 ALT為（2862 ± 392.39）U/L，AST 為（1051.17 ± 791.30）U/L，WT 組的血清 ALT 為（1701.5 ± 239.93）U/L，AST 為（674.83 ± 120.05）U/L，miR-17-92liver-/-組均高于 WT 組（P ＜ 0.05），如圖 8 所示。在肝臟組織 HE 染色中（圖 9），miR-17-92liver-/-組肝細胞壞死廣泛而嚴重，肝細胞索解離，肝細胞溶解，出現(xiàn)彌漫性大片壞死，橋接壞死，肝小葉及匯管區(qū)大量炎細胞浸潤。肝小葉中央出現(xiàn)肝細胞壞死，小片嗜酸性變性的肝細胞團殘留在小葉周邊，溶解壞死的肝細胞結(jié)構(gòu)消失，殘留網(wǎng)狀支架。WT 組鏡下，可見匯管區(qū)及中央靜脈周圍大量炎細胞浸潤，肝腺泡 I 區(qū)肝細胞呈水樣變性和脂肪樣變性，可見肝細胞片狀壞死，肝竇充血、出血，但肝組織結(jié)構(gòu)仍可見。按照標(biāo)準肝組織損傷評分標(biāo)準，miR-17-92liver-/-組得分 2.8 ± 0.35，WT 得分 0.9 ± 0.2，表示同樣條件下，miR-17-92liver-/-組肝臟損傷程度重于 WT組（P ＜ 0.05）。

圖8 CCl4對 miR-17-92liver-/-小鼠與野生型小鼠血清ALT、AST 的影響Figure 8 The effect of CCl4on serum ALT、AST of miR-17-92liver-/-mice and WT mice

2.6 miR-17-92 在 ConA 肝臟損傷中的作用

在 ConA 誘導(dǎo)的肝臟損傷中，miR-17-92liver-/-組的肝指數(shù) 4.71 ± 0.16，高于 WT 組的肝指數(shù)2.11 ± 0.35，miR-17-92liver-/-組的血清 ALT 為（11298.17 ± 1727.09）U/L，AST 為（11641 ± 1528.28）U/L，WT 組的血清 ALT 為（8399.50 ± 1700.95）U/L，AST 為（8886.83 ± 1922.56）U/L，miR-17-92liver-/-組均高于 WT 組（P ＜ 0.05）（圖 10）。在肝臟組織 HE 染色中， miR-17-92liver-/-組肝實質(zhì)細胞間大量 T 淋巴細胞浸潤，在匯管區(qū)尤為明顯，肝竇內(nèi)紅細胞彌漫性淤積，肝細胞出現(xiàn)脂肪性變，且可見凋亡小體，點、灶狀壞死區(qū)大量淋巴細胞、中性粒細胞浸潤，而在 WT 組（圖 11），肝組織除少量淋巴細胞浸潤外，無明顯異常。按照標(biāo)準肝損傷組織評分標(biāo)準，miR-17-92liver-/-組得分1.9 ± 0.39，WT 得分 0.2 ± 0.11，表示在 ConA 引起的肝損傷中，miR-17-92liver-/-組肝臟損傷程度重于 WT 組（P ＜ 0.05）。

圖9 CCl4對 miR-17-92liver-/-小鼠與野生型小鼠肝臟組織病理學(xué)影響Figure 9 The effect of CCl4on liver tissue pathology of miR-17-92liver-/-mice and WT mice

圖10 ConA 對 miR-17-92liver-/-小鼠與野生型小鼠血清ALT、AST 的影響Figure 10 The effect of ConA on serum ALT、AST of miR-17-92liver-/-mice and WT mice

3 討論

圖11 ConA 對 miR-17-92liver-/-小鼠與野生型小鼠肝臟組織病理學(xué)影響Figure 11 The effect of ConA on liver tissue pathology of miR-17-92liver-/-mice and WT mice

肝臟作為生物體物質(zhì)代謝的重要器官，在分解代謝有毒有害物質(zhì)的同時，易受到各種因素影響而引起損傷。而且許多肝臟疾病在肝臟損傷的基礎(chǔ)發(fā)生、發(fā)展，長期的肝臟損傷最終可能導(dǎo)致肝纖維化，甚至肝癌。所以需要探究肝臟損傷中的調(diào)控機制，為肝臟損傷的治療提供新思路。CCl4是最常用的誘導(dǎo)肝臟損傷的化學(xué)試劑。CCl4致肝臟損傷的機制，目前認為與細胞色素 P450-2E1（Cyp2E1）參與的過氧化反應(yīng)相關(guān)［5］。我們首先利用 CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷模型評價了 miR-17-92 缺失對肝臟損傷修復(fù)的影響。肝指數(shù)指肝臟重量與總體重的比值，在肝臟損傷中可以反映出肝組織充血腫脹程度和炎性細胞浸潤程度［11］。AST 和 ALT 是肝功能檢測中的重要指標(biāo)，反映各種原因引起的肝臟損傷程度。在該研究中，我們發(fā)現(xiàn) miR-17-92 參與了急性肝臟損傷的過程，miR-17-92 敲除可能促進了 CCl4和 ConA 對肝臟的損傷，而 miR-17-92 高表達可能保護肝臟減輕了損傷程度。

對于急性肝臟損傷，已有的研究顯示 miR-122在肝臟損傷早期表達顯著上升，可能作為一個表征肝臟急性損傷的標(biāo)志物［12］。miR-26a 能夠增強肝臟細胞自噬，保護乙醇誘導(dǎo)的肝臟損傷［7］。但對于miR-17-92 在肝病中的作用，目前報道還很少。

基因敲除小鼠是研究基因功能的較好的模式動物。有研究顯示，miR-17-92 缺失小鼠，因嚴重心肺發(fā)育不全，導(dǎo)致出生后死亡［13］。因此，我們利用 Alb-cre 和 miR-17-92 loxp 轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，獲得了肝臟組織特異的 miR-17-92 敲低小鼠miR-17-92liver-/-，同時，我們利用慢病毒建立了穩(wěn)定高表達 miR-17-92 的肝臟 L02 細胞，從正反兩方面評價 miR-17-92 在肝臟損傷中的作用。已知的miR-17-92 的靶基因有 PTEN 和 E2Fs［8，14］。PTEN參與化學(xué)通路的傳導(dǎo)，可以把信號傳導(dǎo)給細胞，使細胞停止分裂導(dǎo)致細胞凋亡。miR-17-92 可以通過調(diào)控 PTEN 的表達，調(diào)控細胞分裂周期。miR-17-92基因簇也可以通過調(diào)控 E2Fs 家族參與細胞周期，調(diào)控細胞的凋亡。

綜上，本研究顯示 miR-17-92 在體內(nèi)外模型中都表現(xiàn)出對肝臟損傷的保護作用，可能為肝臟損傷的防護和治療提供了新的靶點，但保護調(diào)控分子機制仍待進一步研究發(fā)現(xiàn)。

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Objective To evaluate the effect of miR-17-92 on liver injury by establishing in vitro cell model and gene-knockout mice model.

Methods Human liver cell L02 was infected by lentivirus LV-miR-17-92 and then lentivirus-mediated miR-17-92 stable overexpression human liver cells were harvested. Liver cell injury was simulated by CCl4. Cell livability was detected using MTS method. The hepatocyte-specific miR-17-92 knockout mice were generated by hybriding the Alb-cre transgenic mice and miR-17-92-loxp transgenic mice. Two type of acute liver injuries in mice were induced with CCl4and ConA. Liver tissue was stained by HE staining. ALT and AST were detected in blood serum through eye ball removing. At last， the function and effect of miR-17-92 on liver injury was evaluated.

Results Q-PCR test showed that the infection of lentivirus improved the expression of miR-17-92 in L02 cells. MTS test showed that CCl4suppressed the growth of L02 cells and miR-17-92 overexpression increased the survival rate of L02 cells injured by CCl4（P ＜ 0.05） as compare with control. Both genome PCR test and liver tissue Q-PCR analysis demonstrated that the miR-17-92 expression of hepatocyte-specific miR-17-92 knockout mice was observably suppressed. Enterocoelia injection of CCl4remarkably increased the expression level of miR-17-92 in liver， but the change was not obvious in hepatocyte-specific miR-17-92 knockout mice. In liver injury models， the liver pathological injury of hepatocyte-specific miR-17-92 knockout mice was more potent than that of the control， suggesting that miR-17-92 probably participated in the repair of acute liver injury.

Conclusion Liver injury increases the miR-17-92 expression level and overexpression of miR-17-92 protects the liver cells from CCl4injury. The ablation of miR-17-92 aggravates the injury caused by CCl4and ConA. Therefore， miR-17-92 plays a positive role of protecting the liver from injury.

Author Affiliation： Beijing Institute of Radiation Medicine， Academy of Military Medical Sciences， 100850 Beijing， China

www.cmbp.net.cn Chin Med Biotechnol, 2016, 11(5):407-414

The function and role of miR-17-92 on acute liver injury

WANG Ruo-su， GAO Hui-ying， SAI Yan， CUI Chun-ping

miR-17-92； Liver injury； Alb-cre-loxp system； CCl4； Concanavalin A

CUI Chun-ping， Email： cui_chunping2000@aliyun.com

10.3969/j.issn.1673-713X.2016.05.004

100850 北京，中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所

崔春萍，Email：cui_chunping2000@aliyun.com

2016-04-08