子宮內膜腺癌組織中Vasohibin-1與MVD的表達及其相關關系的研究*

周龍書黃嬋史文靜

子宮內膜腺癌組織中Vasohibin-1與MVD的表達及其相關關系的研究*

周龍書①黃嬋①史文靜①

目的：探討血管生成抑制蛋白-1（Vasohibin-1）、微血管密度（micro vessel density，MVD）在子宮內膜腺癌組織中的表達及兩者之間的相關關系。方法：應用SP法檢測Vasohibin-1在23例正常子宮內膜組織、28例子宮內膜非典型增生組織及69例子宮內膜腺癌組織中的表達情況；并應用CD34抗體標記上述組織中血管內皮細胞，測定MVD值，分析兩者在子宮內膜腺癌的相關關系。結果：Vasohibin-1在子宮內膜腺癌組織中的陽性表達率顯著高于子宮內膜不典型增生組織與正常增殖期子宮內膜組織（P＜0.05）。子宮內膜腺癌組織中MVD測定值顯著高于子宮內膜不典型增生與正常增殖期子宮內膜（P＜0.01）。Vaoshibin-1在子宮內膜腺癌組織中的表達與手術病理分期、肌層浸潤、淋巴結轉移、年齡差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。在子宮內膜腺癌組織中，Vasohibin-1的表達與MVD值呈正相關（r=0.337，P＜0.05）。結論：在子宮內膜腺癌中存在Vasohibin-1、MVD的高表達，且兩者在子宮內膜腺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起協(xié)同作用。

子宮內膜腺癌； 血管生成抑制蛋白-1； 微血管密度

First-author's address：The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510260，China

子宮內膜腺癌今年的發(fā)病率呈上升趨勢，但其發(fā)病機制目前尚不十分明確。血管生成抑制因子（Vasohibin）由Watanabe等［1］和Soslow等［2］首次發(fā)現(xiàn)，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一一個血管生成負反饋抑制因子，成為腫瘤血管生成機制研究的新熱點。本研究通過檢測增殖期子宮內膜、非典型增生子宮內膜和子宮內膜腺癌組織中Vasohibin-1和MVD的表達情況，探討兩者的相關關系和在子宮內膜腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究收集2009年1月-2013年12月廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院經(jīng)手術切除并經(jīng)病理證實的子宮內膜腺癌石蠟包埋標本69例為研究對象，年齡37～65歲，中位年齡51歲，術前均未經(jīng)任何放、化療和激素治療等。按2009年國際婦產科聯(lián)盟（FIGO）的分期標準，Ⅰ期33例，Ⅱ期24例，Ⅲ期10例，Ⅳ期2例；按有無淋巴結轉移的情況分為：有淋巴結轉移15例，無淋巴結轉移54例；按腫瘤細胞分化級別分為G1、G2、G3級，每級分別為23、29、17例；按腫瘤浸潤情況分為：無肌層浸潤10例，浸潤淺肌層（＜1/2為37例，深肌層或漿膜浸潤（≥1/2）22例。隨機抽取同期存檔的子宮內膜非典型增生組織蠟塊28例及因子宮肌瘤、宮頸原位癌切除子宮的增殖期子宮內膜組織蠟塊23例作為對照。年齡32～58歲，中位年齡45歲。以上標本切片均由廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院病理科提供，并由兩位高年資病理醫(yī)師確診。

1.2 試劑 主要試劑：Vasohibin-1兔抗人多克隆IgG抗體，產品編號：bs-1505R（北京博奧森生物技術有限公司），CD34兔抗人多克隆IgG抗體，產品編號：BA0912（北京博奧森生物技術有限公司），即用型免疫組化UltrasensitiveTMS-P超敏試劑盒（北京中杉會橋生物技術有限公司），3，3-二氨基聯(lián)苯胺（3，3-diaminobenzidine，DAB）濃縮型試劑盒：ZLI-9032（北京中杉會橋生物技術有限公司）。

1.3 結果判斷標準

1.3.1 免疫組化結果判斷標準 Vasohibin-1陽性表達為細胞漿和/或細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。子宮內膜腺癌組織中Vasohibin-1、VEGF陽性結果均主要表達于細胞胞質。在雙盲條件下，由兩名病理科醫(yī)師對切片進行觀察，每張切片均隨機選5個高倍視野（×400倍），200個細胞/視野，共計1000個細胞，取其平均數(shù)。根據(jù)目前廣泛應用的免疫組化計分標準，具體如下：（1）染色強度（staining intensity，SI）：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分（染色深淺需與背景著色相對比）。（2）陽性細胞數(shù)（positive percentage，PP）：陰性0分，陽性細胞≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～80%為3分，＞80%為4分［3-4］。半定量積分=染色強度評分×陽性細胞數(shù)評分。

1.3.2 陰陽性劃分 采用半定量積分對各子宮內膜組織進行陰陽性劃分［5-6］。半定量積分0～1分為陰性（-），2～3分為免疫反應結果弱陽性（+），4～6分為中等陽性（++），＞6分為強陽性（+++）。-～+為表達缺失、低表達；++～+++為過表達；+～+++均為陽性。結果由兩名高年資病理科醫(yī)師統(tǒng)一核準。

1.3.3 MVD判定標準 由CD34標記內皮細胞后，其定位于細胞膜和細胞漿。MVD計數(shù)參照Maeda等［7-8］，采用雙盲法，由兩名病理科醫(yī)師分別進行，再取平均值。先在低倍鏡（×100）下全面觀察整體切片，找出腫瘤內血管最密集處，再在高倍鏡（×200）下計數(shù)5個視野，取其平均值，但管腔大于8個紅細胞直徑的血管不計數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進行卡方檢驗和Spearman等級相關分析，多組均數(shù)的比較采用Kruskal Wallis檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Vasohibin-1在不同子宮內膜組織中的表達情況比較 Vasohibin-1在正常增殖期與非典型增生的陽性表達率均明顯低于內膜樣腺癌（P＜0.05）。正常增殖期與非典型增生陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 不同子宮內膜組織中Vasohibin-1的表達情況

2.2 在不同子宮內膜組織中的MVD計數(shù)情況比較 在正常增殖期子宮內膜組織與非典型增生子宮內膜組織中的陽性表達率均明顯低于子宮內膜腺癌（P＜0.001）。正常增殖期子宮內膜與非典型增生子宮內膜的陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 不同子宮內膜組織中MVD計數(shù)情況（±s）

表2 不同子宮內膜組織中MVD計數(shù)情況（±s）

*與正常增殖期子宮內膜和子宮內膜不典型增生比較，P＜0.05；#與子宮內膜不典型增生和正常增殖期子宮內膜比較，P＜0.001

組織類型MVD（個/HP）P值正常增殖期（n=23）10.32±5.48不典型增生（n=28）17.44±3.59＜0.05*子宮內膜腺癌（n=69）33.63±10.51＜0.001#

2.3 不同子宮內膜組織中Vasohibin-1的表達與子宮內膜腺癌臨床病理特征的關系 Vasohibin-1與子宮內膜癌患者年齡、手術病理分期、肌層浸潤及有無淋巴結轉移均無關（P＞0.05），見表3。

2.4 子宮內膜腺癌中Vasohibin-1表達與MVD的相關關系 子宮內膜腺癌組織中Vasohibin-1表達陽性者37例，MVD計數(shù)為（32.89±1.06）個/HP；陰性者32例，MVD計數(shù)為（28.83±0.89）個/HP，提示子宮內膜癌中Vasohibin-1與MVD的表達呈正相關（r=0.337，P＜0.05）。

表3 Vasohibin-1與子宮內膜腺癌臨床病理特征的關系

3 討論

3.1 血管生成抑制蛋白-1在子宮內膜癌中的表達及意義 人血管生成抑制蛋白-1（Vasohibin-1）基因位于染色體14q24.3上，其蛋白產物有365個氨基酸殘基，是一個非傳統(tǒng)型分泌蛋白［9-10］。有研究表明，Vasohibin-1在體外能有效抑制血管內皮細胞的移行、增殖及網(wǎng)絡形成，體內能有效抑制腫瘤的新生血管形成，從而抑制腫瘤的生長［11-12］。李姝君等［13］報道Vasohibin-1的檢出率從增生期到分泌期內膜、從高分化至低分化子宮內膜癌組織逐漸增高。而文獻［14-15］采用免疫組織化學法檢測Vasohibin-1在子宮內膜腺癌中的表達明顯低于正常子宮內膜中的表達。

本研究結果表明：Vasohibin-1在正常增殖期子宮內膜、子宮內膜不典型增生及子宮內膜腺癌組織中的陽性表達率分別為26.1%、32.1%、53.6%，其中子宮內膜腺癌組織中Vasohibin-1的表達率明顯高于子宮內膜不典型增生及正常增殖期子宮內膜，此結果與Yoshinaga等［6］研究結果相似?？紤]在子宮內膜腺癌中，雖然Vasohibin-1的陽性表達率隨著腫瘤的惡性程度升高而逐漸增加，但是Vasohibin-1的表達上調并不足以抑制子宮內膜腺癌的血管生成，其原因的深入探究尚需后續(xù)研究加以闡明。

3.2 微血管密度與子宮內膜癌的關系 微血管密度（MVD）是一種反映腫瘤血管形成的指標，隨著腫瘤MVD的增加，腫瘤侵襲轉移等惡性潛能也明顯增加。因此，MVD被認為是預測腫瘤轉移復發(fā)和預后的一項重要指標標［16-17］。文獻［18-19］的研究顯示在子宮內膜癌組織中的MVD計數(shù)明顯高于子宮內膜不典型增生及正常子宮內膜對照組。本研究采用CD34單克隆抗體對子宮內膜腺癌、子宮內膜不典型增生及增殖期子宮內膜各組織血管內皮細胞進行特殊染色，然后測量各組織的MVD值分別為（33.63±10.51）、（17.44±3.59）、（10.32±5.48）個/HP。子宮內膜腺癌組織的MVD值與后兩者比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明MVD的表達與子宮內膜腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關。

3.3 Vasohibin-1、MVD在子宮內膜腺癌中表達的相關關系 眾所周知，子宮內膜癌的復發(fā)與轉移是影響患者生存期的最主要因素，而高密度血管形成在腫瘤復發(fā)和轉移的開始及結束階段都是必須的。Vasohibin-1作為血管生成抑制因子， 在體內能有效抑制腫瘤的新生血管形成，從而抑制腫瘤的生長，MVD是衡量腫瘤血管生成常用的客觀定量指標。在本研究中，子宮內膜腺癌組織中Vasohibin-1的陽性表達率增高，MVD的表達也增強，且兩者間具有正相關關系（P＜0.01）。由此考慮，一方面隨著腫瘤的進展，機體需要反饋性地增加Vasohibin-1的表達來抑制新生血管生成，從而出現(xiàn)子宮內膜腺癌組織中Vasohibin-1的高表達，但可能在某階段存在Vasohibin-1的表達上調并不足以抑制血管生成的情況；另一方面，正常子宮內膜組織中，促血管生成因子和抑制血管生成因子之間存在著平衡，而子宮內膜腺癌中上述兩者間出現(xiàn)了失衡狀態(tài)，從而導致子宮內膜癌中血管異常增生［20］。

綜上所述，Vasohibin-1作為一種新發(fā)現(xiàn)的內源性血管生成負反饋調劑因子，在子宮內膜腺癌中存在高表達，并可能與高表達的MVD在子宮內膜腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起協(xié)同作用。雖然上述機制有待進一步闡明，但隨著研究的不斷深入，Vasohibin-1有望在抗腫瘤血管生成及婦科腫瘤治療中發(fā)揮重要的作用。

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R esearch of E xpression and Its Correlation of V asohibin-1 and MV D in E ndometrial Adenocarcinoma Tissue

ZHOU L ong-shu，HUANG Chan，SHI Wen-jing.//Medical Innovation of China，2016，13（27）：006-009

Objective：To probe the expression of endometrial adenocarcinoma and the relationship between them in angiogenesis inhibitor protein-1（Vasohibin-1） and microvessel density（vessel density micro，MVD）.Method：The expression situation of Vasohibin-1 in 23 cases of normal endometrium，28 cases of atypical endometrial hyperplasia and 69 cases of endometrial adenocarcinoma were detected by SP method.CD34 antibody was used to label the vascular endothelial cells in the tissue，and MVD value was determined.Then，the correlation between endometrial adenocarcinoma between two objects were analyzed.Result：The positive expression rate of Vasohibin-1 in endometrial adenocarcinoma was significantly higher than that in endometrial atypical hyperplasia tissue and normal proliferative phase of endometrial tissue（P＜0.05）.The value of MVD in endometrial adenocarcinoma was significantly higher than that in the endometrial atypical hyperplasia and normal proliferative phase endometrium（P＜0.01）.There was no statistical significance in the expression of Vaoshibin-1 in endometrial adenocarcinoma and the surgical pathologic stage，muscle invasion，lymph node metastasis，age（P＞0.05）.There was positively correlated in the expression of Vasohibin-1 and the MVD values in the endometrial adenocarcinoma tissue（r=0.337，P＜0.05）.Conclusion：There is high expression of MVD and Vasohibin-1 in endometrial adenocarcinoma，and they may be played a synergistic role in the occurrence and development of endometrial adenocarcinoma.

Endometrial adenocarcinoma； Angiogenesis inhibitor protein-1； Microvessel density

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.27.002

廣東省科技計劃項目（2012B031800436）

①廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院 廣東 廣州 510260

史文靜

（2016-06-27） （本文編輯：程旭然）