痰培養(yǎng)與痰培養(yǎng)+痰涂片結(jié)果比較談痰涂片的重要性

賀雯　營口經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)中心醫(yī)院?。ㄟ|寧 營口　115007）

痰培養(yǎng)與痰培養(yǎng)+痰涂片結(jié)果比較談痰涂片的重要性

賀雯營口經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)中心醫(yī)院（遼寧 營口115007）

內(nèi)容提要： 目的：通過對(duì)本院2014年1月至2015年12月間200例收住院患者的痰標(biāo)本使用不同方法進(jìn)行檢測，強(qiáng)調(diào)痰涂片的重要性，并舉一例說明。方法：對(duì)200例痰標(biāo)本用兩種方法檢測，痰培養(yǎng)和痰培養(yǎng)+涂片，舉例患者同時(shí)抽取靜脈血做血培養(yǎng)。結(jié)果：通過對(duì)比，痰培養(yǎng)和痰培養(yǎng) + 痰涂片對(duì)同一痰標(biāo)本的致病菌的檢出率比較差異較大。舉例患者痰標(biāo)本，涂片見大量酵母菌，而細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果是肺炎克雷伯菌+++，該患者做血培養(yǎng)后，培養(yǎng)出季也蒙假絲酵母菌。結(jié)論：痰涂片中可以提供重要的信息，顯著提高痰培養(yǎng)致病菌的檢出率和正確性。所以痰培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)先做痰涂片。

痰培養(yǎng)痰涂片血培養(yǎng)肺炎克雷伯菌季也蒙假絲酵母菌

痰細(xì)菌培養(yǎng)前進(jìn)行樣品合格性的檢查是痰細(xì)菌培養(yǎng)至關(guān)重要的一環(huán)，直接影響到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性［1］。痰標(biāo)本涂片進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查的主要是對(duì)送檢標(biāo)本進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，確認(rèn)其是否應(yīng)該進(jìn)入下一步檢驗(yàn)流程；其次，可初步判斷標(biāo)本性質(zhì)屬于感染性還是非感染性（例如單純性未合并細(xì)菌感染的肺癌、矽肺、過敏性支氣管炎、哮喘、支氣管擴(kuò)張等肺病的病理性痰液就屬于非感染性），分析標(biāo)本是否需要進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。另外痰標(biāo)本涂片進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查的主要是通過觀察有無細(xì)菌，細(xì)菌的形態(tài)特征和染色特點(diǎn)，細(xì)菌的數(shù)量、分布，以及各種細(xì)菌與炎癥滲出的白細(xì)胞之間的相互作用（吞噬、包裹、伴行），分析判斷標(biāo)本中與感染相關(guān)的病原菌，將其與正常菌群或定植菌相鑒別，并根據(jù)形態(tài)特征推斷其大致種類，并有助于形態(tài)特殊微生物的快速診斷，有利選擇恰當(dāng)?shù)氖状囵B(yǎng)基［2］。最重要的意義是痰涂片顯微鏡檢驗(yàn)對(duì)整個(gè)痰培養(yǎng)流程起到?jīng)Q定性導(dǎo)航作用，與次日的固體培養(yǎng)基上的菌落觀察相結(jié)合，篩選出有意義的菌落進(jìn)行下一步試驗(yàn)。決定痰培養(yǎng)報(bào)告的最終準(zhǔn)確性和臨床符合率。

此外由呼吸道感染引發(fā)菌血癥或血流感染占12%，僅次于血管內(nèi)裝置（19%）和泌尿生殖道（17%）來源。因此，在對(duì)肺部感染患者進(jìn)行下呼吸道標(biāo)本檢驗(yàn)同時(shí)，提醒臨床醫(yī)生應(yīng)送檢血培養(yǎng)，可以提高肺部感染病原菌診斷的正確率［3］。

1.資料與方法

1.1一般資料

1.1.1病例選擇：選取本院2014年1月至2015年12月間200例收住院患者的痰標(biāo)本。

1.1.2試劑和儀器：革蘭氏染色液、血平板（鄭州安圖生物工程股份有限公司）、中國蘭平板（杭州濱和微生物試劑有限公司）、血培養(yǎng)瓶、微生物真菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)測試板（珠海美華醫(yī)療科技有限公司）、革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒32100（法國梅里埃公司）。ATB微生物鑒定藥敏分析儀（購自法國梅里埃公司）、Versa Treck血培養(yǎng)箱、35?C恒溫培養(yǎng)箱。

1.2方法

1.2.1痰標(biāo)本送來后，將標(biāo)本分為兩份，一份是立即四區(qū)劃線接種血平板，中國蘭平板及巧克力平板，然后放入35?C恒溫培養(yǎng)箱，巧克力板放燭缸中孵育。另一份即刻涂片，先涂濕片，在不染色狀態(tài)下進(jìn)行，將接種針前端5mm處折彎，曲成直角做成接種鉤，挑取黃豆大小痰塊，在載玻片上涂布開，使成2×2cm2大小的涂膜，低倍鏡下觀察，根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》提供的標(biāo)準(zhǔn)，鱗狀上皮細(xì)胞≤10個(gè)/低倍鏡視野；白細(xì)胞≥25個(gè)/低倍鏡視野者為合格痰標(biāo)本，對(duì)于合格痰涂片，我們將它火焰固定，做革蘭染色，油鏡下觀察細(xì)菌情況，對(duì)于不合格標(biāo)本，退回與臨床溝通使其重新采集標(biāo)本。

1.2.2合格的痰標(biāo)本，涂片后將痰標(biāo)本四區(qū)劃線分別接種于血平板、中國蘭平板、巧克力平板，以及根據(jù)涂片情況接種其他特殊培養(yǎng)基。然后放于35?C恒溫培養(yǎng)箱，巧克力板放燭缸中孵育20h后，挑取優(yōu)勢致病菌落制備菌懸液，加入鑒定板，用ATB微生物鑒定儀做細(xì)菌鑒定，其他的菌則由相應(yīng)方法來鑒定。

1.2.3其中舉例患者同時(shí)做了兩套血培養(yǎng)瓶，將其放入血培養(yǎng)箱培養(yǎng)，兩套需氧瓶培養(yǎng)3d時(shí)報(bào)警，我們分別抽取瓶中培養(yǎng)液做了細(xì)菌涂片，革蘭染色和傳代培養(yǎng)，分別接種血平板、中國蘭平板、巧克力平板和真菌培養(yǎng)基，溫箱中培養(yǎng)過夜。

2.結(jié)果

2.1合格談標(biāo)本統(tǒng)計(jì)及舉例標(biāo)本鏡檢結(jié)果：送檢痰標(biāo)本大部分為合格痰標(biāo)本，但也有部分被拒收重新采集的標(biāo)本，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見下表1。舉例痰標(biāo)本，低倍鏡下可見上皮細(xì)胞1～4個(gè)/低倍鏡視野；白細(xì)胞20～30個(gè)/低倍鏡視野，油鏡下可見大量酵母菌和少量革蘭陰性桿菌。

2.2痰培養(yǎng)后結(jié)果及舉例痰標(biāo)本培養(yǎng)后結(jié)果：根據(jù)痰涂片的結(jié)果，結(jié)合平板上細(xì)菌生長情況綜合判斷，選取致病菌進(jìn)行鑒定藥敏。對(duì)于不含有致病菌的標(biāo)本，48h報(bào)告陰性結(jié)果。舉例標(biāo)本，可見三個(gè)平板上長出粘液狀融合大菌落+++，經(jīng)ATB鑒定后為肺炎克雷伯菌，藥敏結(jié)果全部敏感，而無酵母菌生長，與涂片的結(jié)果不符。該患者痰標(biāo)本被連續(xù)送檢3次，涂片和培養(yǎng)都是上述結(jié)果。

2.3舉例標(biāo)本兩套血培養(yǎng)后結(jié)果：涂片做革蘭染色，油鏡下可見少量酵母菌，傳代培養(yǎng)，幾種平板上長出的也都是酵母菌，通過鑒定板鑒定為季也蒙假絲酵母菌。

2.4痰培養(yǎng)和痰培養(yǎng)+痰涂片致病菌檢出情況比較：對(duì)同一個(gè)痰標(biāo)本分作兩份，分別使用痰培養(yǎng)和痰培養(yǎng) + 痰涂片進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果顯示痰培養(yǎng) + 痰涂片具有更高的致病菌檢出率，見表2。

3.討論

3.1在細(xì)胞的代謝活動(dòng)、蒸發(fā)作用、微生物降解、光學(xué)作用、化學(xué)反應(yīng)、升華作用的影響下，所采集到的標(biāo)本會(huì)發(fā)生一定程度的改變，從而使分析結(jié)果的準(zhǔn)確性受到直接或間接的影響［4］。要想使送檢標(biāo)本的質(zhì)量符合要求，必須依據(jù)下列兩個(gè)原則采集標(biāo)本：（1）滿足臨床檢驗(yàn)結(jié)果正確性的各項(xiàng)要求；（2）檢驗(yàn)結(jié)果必須真實(shí)客觀地反映患者當(dāng)前的病情。

3.2本研究顯示不同的檢驗(yàn)方法或方案對(duì)臨床微生物檢驗(yàn)結(jié)果存在較大的影響 由舉例可見，痰涂片和痰培養(yǎng)的結(jié)果并不一致，該患者真正的致病菌是季也蒙假絲酵母菌，而痰培養(yǎng)出的肺炎克雷伯菌卻是定植菌。季也蒙假絲酵母菌大量出現(xiàn)在了痰涂片中，卻沒有出現(xiàn)在痰培養(yǎng)中。血培養(yǎng)幫助確診了痰涂片中的酵母菌就是致病菌，臨床上抗真菌治療效果顯著，可見痰涂片多么重要。

3.3造成痰涂片與痰培養(yǎng)的結(jié)果不一致的原因大致有以下幾點(diǎn)：①由于痰標(biāo)本在進(jìn)行培養(yǎng)和涂片時(shí)選取部位不一致造成的；②某些快生長菌所占比例并不多，但由于其生長速度快，營養(yǎng)要求低，能夠在培養(yǎng)過程中迅速變?yōu)閮?yōu)勢菌，掩蓋了其他菌的生長，造成涂片結(jié)果和培養(yǎng)結(jié)果不一致；③標(biāo)本在采集到接種的時(shí)間過長，造成一部分苛養(yǎng)菌死亡，在涂片中看到的只是菌的殘骸，而非活菌。

3.4如何判斷痰中的致病菌：判斷致病菌的方法：①合格標(biāo)本的優(yōu)勢細(xì)菌；合格標(biāo)本連續(xù)3d培養(yǎng)，出現(xiàn)兩次或以上的細(xì)菌作為致病菌。②涂片和培養(yǎng)同時(shí)出現(xiàn)的細(xì)菌，并且是涂片中被吞噬細(xì)胞吞噬的細(xì)菌應(yīng)考慮是致病菌。痰培養(yǎng)標(biāo)本的取樣制片過程容易產(chǎn)生污染和混淆，由于口咽部存在大量定植菌，咳痰標(biāo)本不可避免會(huì)遭受其污染，如何判斷

表1. 痰標(biāo)本合格情況（例）

表2. 痰培養(yǎng)和痰培養(yǎng) + 痰涂片致病菌檢出情況比較（例）

痰標(biāo)本是否進(jìn)行培養(yǎng)以及正確區(qū)分痰培養(yǎng)結(jié)果中的污染菌與感染菌，成為臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作的一個(gè)重點(diǎn)和難點(diǎn)。痰培養(yǎng)前涂片進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查篩選標(biāo)本，可以最大可能地確保檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性，為臨床診治提供可靠的參考。

［1］ 肖卓.痰涂片革蘭氏染色臨床價(jià)值探討［J］.黑龍江醫(yī)學(xué)，2004，28（9）：682.

［2］ 張秀珍，朱德妹.臨床微生物檢驗(yàn)問與答［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014，380-382.

［3］ 王露霞，石玉玲，徐德興，等.化膿性關(guān)節(jié)炎膿液培養(yǎng)從無菌生長到分離出龜分枝桿菌［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2011，29（11）：77-78.

［4］ 馬新英，張示淵，肖曉紅，等.實(shí)驗(yàn)室分析前質(zhì)量管理與控制中存在的問題［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，31（8）：885-886.

1006-6586（2016）03-0040-02

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