• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    水體中磺胺甲惡唑的存在及其毒性研究機(jī)理

    2016-11-04 03:14:49卜兆宇俞世霖
    關(guān)鍵詞:磺胺斑馬魚(yú)太湖

    卜兆宇,俞世霖

    (1. 揚(yáng)州市建筑設(shè)計(jì)研究院有限公司,江蘇 揚(yáng)州 225000, 2.河海大學(xué),江蘇 南京210008)

    ?

    水體中磺胺甲惡唑的存在及其毒性研究機(jī)理

    卜兆宇1,俞世霖2

    (1. 揚(yáng)州市建筑設(shè)計(jì)研究院有限公司,江蘇 揚(yáng)州 225000, 2.河海大學(xué),江蘇 南京210008)

    通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)太湖水體中的磺胺甲惡唑進(jìn)行研究,探究磺胺甲惡唑的存在濃度,并且結(jié)合靜態(tài)暴露實(shí)驗(yàn),研究磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)的代謝毒性作用,對(duì)水環(huán)境中磺胺甲惡唑的安全濃度設(shè)置具有重要的指導(dǎo)作用。

    磺胺甲惡唑;濃度;斑馬魚(yú);代謝毒性

    抗生素類物質(zhì)是目前使用較多的一種藥物,并且在常規(guī)水體中被頻繁檢出,對(duì)生態(tài)環(huán)境與人類健康造成了巨大的威脅[1]。目前,抗生素類物質(zhì)開(kāi)始引起廣大學(xué)者的廣泛關(guān)注,在現(xiàn)有水環(huán)境中檢出的抗生素類藥物中,磺胺類藥物的檢出頻率最高[2]?;前奉愃幬锸且环N廣泛使用的抗菌藥,由合成氨苯磺胺類結(jié)構(gòu)物質(zhì)衍生而成,廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療一類感染性疾病。由于磺胺類藥物的大量使用,水體中磺胺類物質(zhì)的濃度明顯升高。在這類磺胺類藥物中,磺胺甲惡唑的水環(huán)境檢出濃度最高,能達(dá)到200 ng/L。目前針對(duì)中國(guó)太湖流域磺胺甲惡唑的濃度研究相對(duì)較少,并且針對(duì)磺胺甲惡唑進(jìn)行毒性研究的資料更少。因此,針對(duì)水環(huán)境中的磺胺甲惡唑的存在濃度及生物毒性進(jìn)行研究十分必要[3]。

    本次實(shí)驗(yàn)針對(duì)江蘇太湖水環(huán)境中的磺胺甲惡唑濃度進(jìn)行研究,并且采用斑馬魚(yú)作為模式動(dòng)物,在實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行靜態(tài)染毒實(shí)驗(yàn),綜合研究磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)的代謝系統(tǒng)毒性作用。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)材料

    本次實(shí)驗(yàn)所采用的斑馬魚(yú)為德國(guó)Tubingen品系,均由南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)室提供。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,斑馬魚(yú)的養(yǎng)殖參照Westerfield在1995年所發(fā)表的斑馬魚(yú)飼養(yǎng)方法:斑馬魚(yú)養(yǎng)殖照明條件為14 h光照、1 h黑暗交替進(jìn)行;養(yǎng)殖水溫控制在28.5±1℃;水體每隔3 h進(jìn)行曝氣充氧,保證水體中的溶解氧量為5 mg/L以上;pH控制在7.02~7.25;總硬度采用德國(guó)度計(jì),控制在8.02~8.15[4]??股鼗前芳讗哼?符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))購(gòu)買于中國(guó)藥品檢定所。在靜態(tài)染毒實(shí)驗(yàn)中,斑馬魚(yú)的培養(yǎng)液參照Z(yǔ)ebra fish Book進(jìn)行配置[5]。其中,磺胺甲惡唑采用助溶劑DMSO助溶(終濃度<0.1%),斑馬魚(yú)的代謝酶(GST、MDA、CAT、SOD)采用代謝酶試劑盒進(jìn)行測(cè)定,均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

    1.2實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1水體中磺胺甲惡唑的檢測(cè)方法

    本次實(shí)驗(yàn)針對(duì)江蘇太湖水體中的磺胺甲惡唑進(jìn)行檢測(cè),采用定位檢測(cè)的方法,針對(duì)太湖東西南北側(cè)設(shè)定4個(gè)檢測(cè)點(diǎn)進(jìn)行取樣檢測(cè),所取水樣在48 h內(nèi)進(jìn)行測(cè)定,每個(gè)檢測(cè)點(diǎn)采取三個(gè)平行樣,每個(gè)樣品進(jìn)行三次檢測(cè),保證檢測(cè)精度。

    實(shí)驗(yàn)采用Waters公司Oasis HLB 6cc (500 mg, Waters, USA)對(duì)水樣進(jìn)行萃取濃縮,并且采用安捷倫公司超高清液相色譜儀(1260)與三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀(6460)對(duì)濃縮液中的磺胺甲惡唑進(jìn)行檢測(cè),具體濃縮與檢測(cè)步驟參照Yan等人的方法[6],檢測(cè)回收率為84±2.1%,檢測(cè)限為1.6 ng/L?;前芳讗哼驒z測(cè)條件如表1所示。

    表1 磺胺甲惡唑檢測(cè)條件

    1.2.2靜態(tài)染毒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

    考慮到大濃度下的暴露實(shí)驗(yàn)會(huì)放大生物毒性效應(yīng)便于有毒物質(zhì)的研究,在本次針對(duì)磺胺甲惡唑的靜態(tài)染毒實(shí)驗(yàn)中,按照等比例區(qū)間進(jìn)行濃度設(shè)置,在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置五組濃度梯度與一組空白對(duì)照,即0、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、500 μg/L、1 mg/L。實(shí)驗(yàn)中,在相同暴露條件下的特定檢測(cè)時(shí)間段對(duì)6組中的斑馬魚(yú)酶活性進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)研究,暴露期限為7 d,特定檢測(cè)時(shí)間為暴露1 d后、暴露3 d后、暴露7 d后。

    1.2.3代謝酶活性測(cè)定

    本次實(shí)驗(yàn)酶活性均采用南京建成生物工程研究所酶活性試劑盒進(jìn)行測(cè)定,具體操作參照試劑盒說(shuō)明。其中,GST酶測(cè)定參照Habig的方法、MDA含量測(cè)定參照硫代巴比妥酸的方法、CAT酶測(cè)定參照Gott的方法、SOD酶測(cè)定參照Marklund的方法[7]。同時(shí),采用綜合酶活性統(tǒng)計(jì)法對(duì)四種酶活性進(jìn)行加權(quán)統(tǒng)計(jì),便于綜合反應(yīng)磺胺甲惡唑的生物毒性作用,具體統(tǒng)計(jì)步驟參照Beliaeff的方法[8]。

    1.2.4數(shù)據(jù)分析

    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用生物毒理學(xué)專用分析軟件Graph pad Prism5.0進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(Mean±SD)形式,數(shù)據(jù)用單尾檢驗(yàn)法進(jìn)行比較,p<0.05為顯著差異。

    2 結(jié)果與討論

    2.1水體中磺胺甲惡唑的存在濃度

    為了檢測(cè)太湖水中磺胺甲惡唑的存在濃度,我們?cè)谔|(E)西(W)南(S)北(N)四個(gè)方向進(jìn)行取樣,對(duì)水樣中的磺胺甲惡唑進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1所示。

    圖1 不同取樣點(diǎn)處磺胺甲惡唑的濃度

    由圖1可以看出:在太湖四個(gè)方向水樣中的磺胺甲惡唑濃度各有差異。其中太湖西部水樣中的磺胺甲惡唑的平均濃度為41 ng/L,最高檢出濃度達(dá)到了最高達(dá)到了45 ng/L;太湖北側(cè)水樣,磺胺甲惡唑平均濃度為24 ng/L,最高檢出濃度達(dá)到了27 ng/L;太湖東側(cè)水樣,磺胺甲惡唑平均濃度為21 ng/L,最高檢出濃度達(dá)到了24 ng/L。檢出濃度最低的是太湖南側(cè)水樣,磺胺甲惡唑平均濃度為13 ng/L,最高檢出濃度達(dá)到了16 ng/L。

    經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn),在太湖西側(cè),工業(yè)企業(yè)眾多,且均有制藥廠分布,大量的生產(chǎn)廢水經(jīng)內(nèi)部小型污水處理裝置收集處理后直接排入大湖中。由于常規(guī)處理工藝并不能對(duì)這類藥物進(jìn)行完全去除,因此造成了西部水體中的磺胺甲惡唑濃度較高。同時(shí),采樣點(diǎn)西部多為水灣地區(qū),由于水灣的封閉性作用,并不能促進(jìn)水體進(jìn)行交換,從而導(dǎo)致水體中的磺胺甲惡唑累積,最終導(dǎo)致該處的磺胺甲惡唑濃度較高。

    在太湖北部和東部,雖然工業(yè)企業(yè)較多,并且水灣較多。由于太湖北部有大量的水生植物生態(tài)修復(fù)區(qū),水體中的水生植物有著發(fā)達(dá)的根系,會(huì)對(duì)水體中的抗生素進(jìn)行吸收,起到水體凈化作用,因此北部水體中磺胺甲惡唑的濃度比西部低。同時(shí)在太湖的東部地區(qū),為了保證太湖水源質(zhì)量,政府在太湖東部進(jìn)行了引長(zhǎng)江水進(jìn)太湖水的工程,長(zhǎng)江具有極強(qiáng)的水體流動(dòng)性與交換性,大量的長(zhǎng)江水引入會(huì)促進(jìn)太湖東部地區(qū)水體發(fā)生交換,最終提高了東部的水質(zhì),降低了該地區(qū)的磺胺甲惡唑的濃度。

    太湖南部,工藝企業(yè)較少,且與東部、西部、北部工業(yè)區(qū)相距較遠(yuǎn),水體的流動(dòng)性與稀釋性導(dǎo)致此處的磺胺甲惡唑濃度相比其他三個(gè)地區(qū)最低,并且此處岸線平滑、少水灣、污染物累積作用較弱,因此該處的水質(zhì)相對(duì)較好。

    通過(guò)以上研究發(fā)現(xiàn),太湖水體中的磺胺甲惡唑濃度最高出現(xiàn)在太湖西側(cè),最高達(dá)到了45 ng/L。同時(shí),生態(tài)修復(fù)區(qū)的建立與引水工程的實(shí)施會(huì)對(duì)水體中的污染物進(jìn)行凈化,保證水體的優(yōu)良水質(zhì)。

    2.2磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)單一代謝酶活性的影響

    為研究磺胺甲惡唑?qū)λw生物的代謝毒性作用,采用斑馬魚(yú)作為模式動(dòng)物,研究靜態(tài)暴露下的磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)的代謝酶的毒性作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。

    由圖2可以看出,隨著暴露濃度與暴露的增加,斑馬魚(yú)體內(nèi)的四種代謝酶活性均發(fā)生額了不同變化。GST酶產(chǎn)生了先上升后下降的趨勢(shì)并且在第3天酶活性達(dá)到最大值;MDA含量也產(chǎn)生了先上升后下降的趨勢(shì)并且在第3天酶活性達(dá)到最大值;CAT酶活性隨著暴露時(shí)間與濃度的升高不斷下降,并且在第7天達(dá)到最低值;SOD酶活性與GST、MDA酶趨勢(shì)相同,并且在第3天酶活性達(dá)到最大值。

    GST酶活性在生物代謝系統(tǒng)去除生物體內(nèi)具有毒性、致突變、致癌性的親電子時(shí)有著不可或缺的作用[9]。GST酶可以促進(jìn)生物體內(nèi)釋放三肽谷胱甘肽,并且促進(jìn)三肽谷胱甘肽與以內(nèi)的外源性物質(zhì)相互結(jié)合,最終促進(jìn)這類物質(zhì)排出生物體內(nèi)。由圖2可以看出,在暴露實(shí)驗(yàn)的第3天,GST酶達(dá)到最大值,隨后濃度降低,這可能是因?yàn)樵诒┞兜?天磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)代謝酶進(jìn)行誘導(dǎo),而在第7天斑馬魚(yú)體內(nèi)適應(yīng)了磺胺甲惡唑的代謝毒性。

    MDA含量通常用來(lái)判斷體內(nèi)外源性物質(zhì)對(duì)代謝系統(tǒng)的毒性作用,其可直接反應(yīng)體內(nèi)細(xì)胞膜受到的毒性作用[10]。由圖2可以看出,MDA酶在第3天達(dá)到最大值,可能是因?yàn)樵诒┞兜谌旎前芳讗哼驅(qū)Π唏R魚(yú)的代謝毒性作用最大。而在暴露第7天MDA的含量降低,回歸第一天的含量,可能是因?yàn)榘唏R魚(yú)體內(nèi)的代謝酶對(duì)磺胺甲惡唑產(chǎn)生了代謝作用,最終降低了磺胺甲惡唑?qū)?xì)胞的代謝作用。

    CAT酶和SOD酶是同階段的代謝酶,對(duì)外源性物質(zhì)在斑馬魚(yú)體內(nèi)產(chǎn)生的自由基有著重要的去除作用,并且兩者之間具有重要的聯(lián)系[11-12]。當(dāng)斑馬魚(yú)體內(nèi)產(chǎn)生自由基時(shí),SOD酶會(huì)對(duì)斑馬魚(yú)體內(nèi)的超氧化物陰離子自由基團(tuán)產(chǎn)生歧化作用,轉(zhuǎn)化為氧化作用相對(duì)較低的過(guò)氧化氫。隨后,CAT酶會(huì)對(duì)過(guò)氧化氫發(fā)生作用,促進(jìn)體內(nèi)的過(guò)氧化氫轉(zhuǎn)化為氧氣和水,最終實(shí)現(xiàn)代謝系統(tǒng)內(nèi)的自由基的去除。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出:在暴露的第3天斑馬魚(yú)體內(nèi)的SOD濃度明顯上升,這是由于體內(nèi)的自由基濃度上升對(duì)SOD酶產(chǎn)生了誘導(dǎo)作用,而在第7天SOD濃度下降,這是因?yàn)轶w內(nèi)自由基被逐漸轉(zhuǎn)化,濃度降低。而CAT酶一直處于降低的狀態(tài),這可能因?yàn)榘唏R魚(yú)體內(nèi)的過(guò)氧化氫濃度較高,CAT酶負(fù)荷過(guò)大,產(chǎn)生了抑制作用。

    圖2 磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)單一酶活性作用

    2.3磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)綜合代謝酶活性的影響

    圖3 磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)綜合酶活性作用

    為綜合探究磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)代謝系統(tǒng)的綜合毒性作用,對(duì)斑馬魚(yú)體內(nèi)的單一代謝酶活性結(jié)果進(jìn)行了綜合統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果見(jiàn)圖3。由圖3可以看出:在暴露的7 d內(nèi),磺胺甲惡唑?qū)Π唏R魚(yú)的代謝毒性作用在暴露第3天最為強(qiáng)烈,且隨著暴露的濃度增加,綜合酶活性指標(biāo)逐漸增加?;前芳讗哼?qū)Π唏R魚(yú)體內(nèi)代謝系統(tǒng)的生物毒性作用隨著暴露濃度的增加而增加,并且磺胺甲惡唑的代謝毒性在染毒第3天作用最為強(qiáng)烈,應(yīng)該引起重視。

    3 結(jié)論

    (1)在太湖水樣中,太湖西部水樣中的磺胺甲惡唑濃度最高,太湖南部水樣中的磺胺甲惡唑濃度最低,經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)生態(tài)修復(fù)工程與引水工程會(huì)降低水體中磺胺甲惡唑的濃度。

    (2)通過(guò)代謝酶活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)磺胺甲惡唑會(huì)對(duì)斑馬魚(yú)的代謝系統(tǒng)產(chǎn)生毒性作用,因此值得后期實(shí)驗(yàn)進(jìn)行深入研究。

    (3)通過(guò)綜合酶活性分析發(fā)現(xiàn),磺胺甲惡唑的代謝毒性作用在暴露的第3天作用最為強(qiáng)烈,并且隨著暴露濃度的上升,綜合活性指標(biāo)逐漸變大。因此,磺胺甲惡唑的代謝毒性作用應(yīng)當(dāng)受到研究者重視。

    [1]Sun Q,Li M H,Ma C.,et al.Seasonal and spatial variations of PPCP occurrence,removal and mass loading in three wastewater treatment plants located in different urbanization areas in Xiamen,China [J].Environ.Pollut,2016,208:371-381.

    [2]Brown KD,Kulis J,Thomson B,et al.Occurrence of antibiotics in hospital,residential,and dairy,effluent,municipal wastewater,and the Rio Grande in New Mexico.[J].Sci Total Environ,2006,366:772-783.

    [3]Daughton C G,Ternes T A,Pharmaceuticals and personal care products in the environment:agents of subtle change[J].Environ.Health Perspec.1999,107:907-938.

    [4]Westerfield M.The zebrafish book.A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).3rd Edition[M].Eugene:University of Oregon Press,1995.

    [5]Hallare A,Nagel K,K hler HR.Comparative embryotoxicity and proteotoxicity of three carrier solvents to Zebrafish (Daniorerio) embryos [J].Ecotoxicol Environ Saf,2006,63(3):378-388.

    [6]Yan Z H,Yang X F,Lu G H,et al.Potential environmental implications of emerging organic contaminants in Taihu Lake,China:comparison of two ecotoxicological assessment approaches.[J].Sci.Total Environ.2014,470-471:171-179.

    [7]Yu S L,Lin T,Chen W,Tao H.The toxicity of a new disinfection by-product,2,2-dichloroacetamide (DCAcAm),on adult zebrafish (Danio rerio) and its occurrence in the chlorinated drinking water.[J].Chemosphere,2015,139:40-46

    [8]Beliaeff B,Burgeot T.Integrated biomarker response:a useful tool for ecological risk assessment.Environ.Toxicol.[J].Chem.2002,21:1316-1322.

    [9]Huang D J,Zhang Y M,Song G,et al.Contaminantsinduced oxidative damage on the carp Cyprinus carpio collected from the upper Yellow River,China.[J].Environ.Monit.Assess.2007,128:483-488.

    [10]Yang F,Zhang J,Chu W H,Yin D Q,Templeton M R.Haloactamides versus halomethanes formation and toxicity in chloraminated drinking water.J.Hazard.Mater.[J].2014,274:156-163.

    [11]Liu J C,Lu G H,Wang Y H,et al.Bioconcentration,metabolism,and biomarker responses in freshwater fish Carassius auratus exposed to roxithromycin.[J].Chemosphere 2014,99:102-108.

    [12]Valavanidis A,Vlahogianni T,Dassenakis M,Scoullos M.Molecular biomarkers of oxidative stress in aquatic organisms in relation to toxic environmental pollutants.Ecotoxicol.[J].Environ.Saf.2006,64:178-189.

    Occurrence of sulfamethoxazole in aquatic environment and its toxicity on zebrafish

    BO Zhao-yu1,YU Shi-lin2

    (1.YangzhouArchitecturalDesign&ResearchInstituteCo.,Ltd,Yangzhou225000,China;2.HohaiUniversity,Nanjing210008,China)

    This experiment studied the sulfamethoxazole concentration and the metabolic toxicity of sulfamethoxazole on zebrafish in Taihu.The results of this study would provide a better reference for safe concentration setting towards sulfamethoxazole.

    sulfamethoxazole;concentration;zebrafish;metabolic toxicity

    2016-04-07

    卜兆宇(1982—),江蘇揚(yáng)州人,碩士,工程師。

    1674-7046(2016)05-0078-05

    10.14140/j.cnki.hncjxb.2016.05.014

    X171. 1

    A

    猜你喜歡
    磺胺斑馬魚(yú)太湖
    斑馬魚(yú)天生就能辨別數(shù)量
    小斑馬魚(yú)歷險(xiǎn)記
    磺胺嘧啶銀混懸液在二度燒傷創(chuàng)面治療中的應(yīng)用
    太湖思變2017
    玩具世界(2017年4期)2017-07-21 13:27:24
    瓜蔞不同部位對(duì)斑馬魚(yú)促血管生成及心臟保護(hù)作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    太湖攬春
    寶藏(2017年2期)2017-03-20 13:16:42
    太湖
    中亞信息(2016年3期)2016-12-01 06:08:24
    養(yǎng)豬不能濫用磺胺藥
    太湖一角
    兩種磺胺嘧啶鋅配合物的合成、晶體結(jié)構(gòu)和熒光性質(zhì)
    精品日产1卡2卡| 麻豆久久精品国产亚洲av| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 极品教师在线免费播放| 久久这里只有精品19| 两个人看的免费小视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲成人久久性| 日韩成人在线观看一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 久久九九热精品免费| 欧美中文综合在线视频| 超碰成人久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产私拍福利视频在线观看| 麻豆av在线久日| 特大巨黑吊av在线直播 | 欧美成人性av电影在线观看| 国产精华一区二区三区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 午夜免费激情av| 午夜福利视频1000在线观看| 人人妻人人澡人人看| 一进一出抽搐动态| 精品久久蜜臀av无| 国产精品久久电影中文字幕| 最近最新中文字幕大全电影3 | 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久人人精品亚洲av| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产主播在线观看一区二区| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲精品粉嫩美女一区| а√天堂www在线а√下载| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久久久国内视频| 国产精品 欧美亚洲| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 男女之事视频高清在线观看| www国产在线视频色| av电影中文网址| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久久大精品| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 午夜视频精品福利| videosex国产| 最新在线观看一区二区三区| 超碰成人久久| 在线永久观看黄色视频| 久久性视频一级片| 黄色毛片三级朝国网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品日韩av在线免费观看| 麻豆成人午夜福利视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 人人妻人人澡欧美一区二区| 满18在线观看网站| 亚洲av电影不卡..在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲黑人精品在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产亚洲av嫩草精品影院| 91大片在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 不卡一级毛片| 99re在线观看精品视频| 久久香蕉国产精品| 亚洲五月婷婷丁香| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产99久久九九免费精品| 在线国产一区二区在线| 国产精品99久久99久久久不卡| 女性被躁到高潮视频| 国语自产精品视频在线第100页| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 老鸭窝网址在线观看| 美女 人体艺术 gogo| 国产久久久一区二区三区| 免费一级毛片在线播放高清视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲 国产 在线| 免费电影在线观看免费观看| 一二三四社区在线视频社区8| 热re99久久国产66热| 免费观看精品视频网站| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲五月色婷婷综合| 日本免费一区二区三区高清不卡| 午夜福利高清视频| 亚洲精品在线观看二区| 色在线成人网| 亚洲第一青青草原| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产av又大| 后天国语完整版免费观看| xxxwww97欧美| 色av中文字幕| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品野战在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 亚洲专区中文字幕在线| 一区福利在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久中文字幕人妻熟女| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲av熟女| 亚洲avbb在线观看| 婷婷亚洲欧美| 午夜免费成人在线视频| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲成av人片免费观看| 99热这里只有精品一区 | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 一本久久中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 黄色毛片三级朝国网站| 老司机在亚洲福利影院| 久久欧美精品欧美久久欧美| 岛国视频午夜一区免费看| 精品久久久久久久末码| 特大巨黑吊av在线直播 | 国产亚洲欧美在线一区二区| 人成视频在线观看免费观看| 国产成人精品无人区| 麻豆av在线久日| x7x7x7水蜜桃| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲精品av麻豆狂野| 99国产精品一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本免费一区二区三区高清不卡| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲精品粉嫩美女一区| www.www免费av| 午夜久久久在线观看| 麻豆一二三区av精品| 欧美日韩精品网址| 好男人电影高清在线观看| 在线免费观看的www视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美zozozo另类| 欧美黄色淫秽网站| 可以在线观看毛片的网站| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 免费在线观看成人毛片| 90打野战视频偷拍视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 一级毛片高清免费大全| 成年版毛片免费区| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 香蕉国产在线看| 国产亚洲欧美精品永久| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲全国av大片| 宅男免费午夜| 日韩av在线大香蕉| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产在线观看jvid| 黄片小视频在线播放| a级毛片在线看网站| 老司机午夜福利在线观看视频| 91在线观看av| ponron亚洲| 亚洲成人国产一区在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲一区中文字幕在线| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产免费av片在线观看野外av| 91成年电影在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 精品久久久久久,| 欧美在线黄色| 国产精品精品国产色婷婷| bbb黄色大片| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美av亚洲av综合av国产av| 日韩欧美三级三区| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产成人欧美在线观看| 久久热在线av| 亚洲专区国产一区二区| 美女午夜性视频免费| 成在线人永久免费视频| 国产麻豆成人av免费视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 国语自产精品视频在线第100页| 在线观看一区二区三区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 狂野欧美激情性xxxx| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 悠悠久久av| 黄片小视频在线播放| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久午夜亚洲精品久久| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美黑人欧美精品刺激| 好男人在线观看高清免费视频 | 白带黄色成豆腐渣| 国产又爽黄色视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 在线观看午夜福利视频| 特大巨黑吊av在线直播 | 一本一本综合久久| 精品一区二区三区av网在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产精品 国内视频| 级片在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 淫秽高清视频在线观看| 色av中文字幕| 亚洲电影在线观看av| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲中文字幕日韩| 一进一出好大好爽视频| 极品教师在线免费播放| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲熟女毛片儿| 国产高清激情床上av| 99久久无色码亚洲精品果冻| 久久热在线av| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久中文看片网| 久久午夜亚洲精品久久| 麻豆一二三区av精品| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产免费男女视频| 精品人妻1区二区| 免费搜索国产男女视频| 少妇的丰满在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 大型av网站在线播放| 校园春色视频在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 久久国产乱子伦精品免费另类| 91成年电影在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 久久中文看片网| 久久久久九九精品影院| 久久青草综合色| 久久精品人妻少妇| 午夜亚洲福利在线播放| 国产成人啪精品午夜网站| 一区二区三区激情视频| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美日韩一级在线毛片| 一本精品99久久精品77| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 大型黄色视频在线免费观看| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产1区2区3区精品| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲无线在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产精品乱码一区二三区的特点| 午夜免费成人在线视频| 精品免费久久久久久久清纯| 夜夜夜夜夜久久久久| av电影中文网址| 免费看a级黄色片| 日本a在线网址| 精品欧美一区二区三区在线| 老司机福利观看| 国产黄片美女视频| 岛国视频午夜一区免费看| 精品熟女少妇八av免费久了| 黑人欧美特级aaaaaa片| 最新在线观看一区二区三区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产成年人精品一区二区| 嫩草影院精品99| 久久伊人香网站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 丝袜美腿诱惑在线| e午夜精品久久久久久久| 久热爱精品视频在线9| 成人免费观看视频高清| 欧美国产日韩亚洲一区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美激情高清一区二区三区| 正在播放国产对白刺激| 亚洲精品在线观看二区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 中文字幕最新亚洲高清| 999久久久精品免费观看国产| 婷婷六月久久综合丁香| 51午夜福利影视在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品国产国语对白av| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 色综合亚洲欧美另类图片| 香蕉国产在线看| 麻豆一二三区av精品| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲五月婷婷丁香| 91在线观看av| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 波多野结衣av一区二区av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲专区国产一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 久久亚洲精品不卡| 一级作爱视频免费观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 美女午夜性视频免费| a级毛片在线看网站| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美又色又爽又黄视频| 男女视频在线观看网站免费 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产真人三级小视频在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 人人澡人人妻人| 美女大奶头视频| 后天国语完整版免费观看| 韩国av一区二区三区四区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产一卡二卡三卡精品| 久久午夜亚洲精品久久| 9191精品国产免费久久| 欧美午夜高清在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 白带黄色成豆腐渣| 岛国视频午夜一区免费看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久精品91蜜桃| 日韩欧美免费精品| 伦理电影免费视频| ponron亚洲| 亚洲av熟女| 国产99久久九九免费精品| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 脱女人内裤的视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 青草久久国产| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲第一青青草原| 少妇的丰满在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 制服人妻中文乱码| 午夜免费成人在线视频| 99riav亚洲国产免费| 窝窝影院91人妻| 在线观看一区二区三区| 日本一区二区免费在线视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲精品国产一区二区精华液| 91字幕亚洲| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 午夜免费激情av| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 久久性视频一级片| 一本综合久久免费| 精品乱码久久久久久99久播| 国产97色在线日韩免费| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 欧美激情高清一区二区三区| 我的亚洲天堂| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久精品91无色码中文字幕| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 青草久久国产| 无限看片的www在线观看| 宅男免费午夜| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 黄色a级毛片大全视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久久久九九精品影院| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 国产成人系列免费观看| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美日韩精品网址| av有码第一页| 久久午夜综合久久蜜桃| 丁香欧美五月| 后天国语完整版免费观看| 亚洲一区中文字幕在线| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 怎么达到女性高潮| 欧美av亚洲av综合av国产av| 最近在线观看免费完整版| 亚洲av五月六月丁香网| 日韩视频一区二区在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 国产不卡一卡二| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 日本成人三级电影网站| 欧美激情高清一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 91麻豆精品激情在线观看国产| 狂野欧美激情性xxxx| 国产高清视频在线播放一区| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲一区二区三区不卡视频| АⅤ资源中文在线天堂| 成人18禁在线播放| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 怎么达到女性高潮| 久久天堂一区二区三区四区| 在线av久久热| ponron亚洲| 高清毛片免费观看视频网站| 色老头精品视频在线观看| av有码第一页| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 两人在一起打扑克的视频| 国产爱豆传媒在线观看 | 最近在线观看免费完整版| 91大片在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 国产视频一区二区在线看| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产真人三级小视频在线观看| 国产日本99.免费观看| 丝袜在线中文字幕| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 成年版毛片免费区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美久久黑人一区二区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲 国产 在线| 久久久国产成人免费| 日韩中文字幕欧美一区二区| av超薄肉色丝袜交足视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 极品教师在线免费播放| 久久国产亚洲av麻豆专区| 十八禁网站免费在线| 精品第一国产精品| 草草在线视频免费看| 成人三级做爰电影| 村上凉子中文字幕在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 少妇 在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 国产97色在线日韩免费| av免费在线观看网站| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲av电影在线进入| 人妻久久中文字幕网| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲欧美激情综合另类| 超碰成人久久| 在线永久观看黄色视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 日本免费a在线| 91大片在线观看| 久久精品人妻少妇| 搡老妇女老女人老熟妇| 欧美久久黑人一区二区| 波多野结衣高清无吗| 性色av乱码一区二区三区2| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美日韩黄片免| 免费观看人在逋| 伦理电影免费视频| 久久精品人妻少妇| 一级片免费观看大全| 怎么达到女性高潮| 国产一区在线观看成人免费| 久久精品成人免费网站| 国产激情欧美一区二区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 波多野结衣高清作品| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲男人天堂网一区| 观看免费一级毛片| 国产精品二区激情视频| 男女那种视频在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久热在线av| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲人成网站高清观看| 1024香蕉在线观看| 国产高清videossex| 国产一卡二卡三卡精品| 最新美女视频免费是黄的| 久久久久久久久久黄片| 欧美一级a爱片免费观看看 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 好男人在线观看高清免费视频 | av视频在线观看入口| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 成人午夜高清在线视频 | 69av精品久久久久久| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 久久国产精品影院| 日韩高清综合在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 国产99白浆流出| 1024手机看黄色片| 少妇粗大呻吟视频| 热99re8久久精品国产| 韩国精品一区二区三区| 夜夜夜夜夜久久久久| 村上凉子中文字幕在线| 少妇的丰满在线观看| avwww免费| 国产久久久一区二区三区| 一区福利在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 黄色毛片三级朝国网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 看黄色毛片网站| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲专区字幕在线| cao死你这个sao货| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 男人的好看免费观看在线视频 | 18禁观看日本| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲欧美日韩无卡精品| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 正在播放国产对白刺激| 亚洲男人天堂网一区| 国产1区2区3区精品| 久久中文字幕一级| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 欧美亚洲日本最大视频资源| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 免费看日本二区| 欧美日韩黄片免| 免费观看人在逋| 在线国产一区二区在线| 黄片小视频在线播放| 成熟少妇高潮喷水视频| av中文乱码字幕在线| 在线观看免费午夜福利视频| 一区二区三区激情视频| a级毛片在线看网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 免费在线观看日本一区| 香蕉av资源在线| 国产激情久久老熟女| 一级a爱片免费观看的视频| 在线看三级毛片| 久久久久久九九精品二区国产 | 婷婷精品国产亚洲av在线| 两性夫妻黄色片|