小鼠自由飲10%酒精3個(gè)月對(duì)肝臟的影響*

徐　燕，曾　勇， 陳育堯

(1.贛南醫(yī)學(xué)院；2.贛州市食品藥品監(jiān)督管理局，江西　贛州　341000；3.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東　廣州　510515)

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小鼠自由飲10%酒精3個(gè)月對(duì)肝臟的影響*

徐燕1，3，曾勇2， 陳育堯3

(1.贛南醫(yī)學(xué)院；2.贛州市食品藥品監(jiān)督管理局，江西贛州341000；3.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州510515)

目的:探討成年小鼠自由飲10%酒精，連續(xù)3個(gè)月后對(duì)肝臟、部分肝功能及血脂的影響。方法：將小鼠分為飲酒組和正常對(duì)照組，雌雄各半，每組10只。飲酒組自由飲10%酒精3個(gè)月，正常對(duì)照組自由飲自來(lái)水。各組小鼠自由進(jìn)食，3個(gè)月后空腹摘除眼球采血，測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性及甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)含量；取小鼠肝稱(chēng)重，計(jì)算肝指數(shù)。并取肝左葉用10%中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，HE染色，光鏡下檢查。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，飲酒組組小鼠血清AST活性明顯升高(P<0.01)；血清TG含量也有一定程度的升高(P=0.076)；飲酒組小鼠肝指數(shù)明顯增加(P<0.01)，肝臟明顯脂肪變及壞死(P<0.01、P<0.05)。結(jié)論：小鼠自由飲10%酒精3個(gè)月，會(huì)造成肝細(xì)胞腫脹、脂肪變及壞死。

小鼠；酒精；血脂；轉(zhuǎn)氨酶；病理組織檢查

本實(shí)驗(yàn)采用小鼠長(zhǎng)期飲酒3個(gè)月，觀察酒精對(duì)小鼠血脂、肝功能及肝臟的影響。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物昆明種小鼠，SPF級(jí)，20只，雌雄各半，體重18～22 g，動(dòng)物由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(粵)2006-0015。

1.2試劑及儀器無(wú)水乙醇，批號(hào)：20100327，由廣東光華化學(xué)廠有限公司生產(chǎn)。CX9全自動(dòng)生化分析儀，美國(guó)Beckman coulter 公司生產(chǎn)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法將20只小鼠分為飲酒組、正常對(duì)照組，每組10只，雌雄各半。飲酒組小鼠給予10%酒精替代水。兩組小鼠均攝食普通顆粒飼料，自由進(jìn)食。3個(gè)月后空腹摘除眼球采血，分離血清，送南方醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科，測(cè)ALT、AST活性及TG、TC含量；取小鼠肝稱(chēng)重，計(jì)算肝指數(shù)。并取小鼠肝左葉，用10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，HE染色，光鏡下檢查。

2　結(jié)　果

2.1小鼠體重、肝重及肝指數(shù)變化與正常對(duì)照組比較，飲酒組小鼠在實(shí)驗(yàn)第1天及實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，體重?zé)o顯明差異。飲酒組小鼠肝濕重有所增加，但無(wú)明顯差異，肝指數(shù)顯著增加(P<0.01)。見(jiàn)表1。

2.2小鼠血清ALT、AST活性及TG、TC含量的變化飲酒組小鼠與正常對(duì)照組比較，血清AST活性顯著升高(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表1　小鼠體重、肝重及肝指數(shù)變化±s

表2　小鼠血清ALT、AST活性及TG、TC含量的變化

2.3小鼠肝臟病理組織學(xué)變化病理組織學(xué)檢查可見(jiàn)飲酒組小鼠均有不同程度的肝細(xì)胞腫脹、氣球樣變，肝細(xì)胞小泡性、大泡性脂肪變性，肝小葉內(nèi)壞死灶明顯增多，多數(shù)表現(xiàn)為凝固性伴出血性點(diǎn)狀、灶狀、片狀壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)。表明小鼠肝臟損傷病變處在脂肪肝和肝炎階段；正常對(duì)照組大部分小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞排列整齊，無(wú)變性壞死，匯管區(qū)未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。只有少量小鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)輕度的腫脹及點(diǎn)、灶狀壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)。見(jiàn)表3、圖1。

表3　小鼠肝臟病理組織學(xué)變化

注：脂肪肝變化[1]：+表示肝小葉結(jié)構(gòu)尚存，肝組織結(jié)構(gòu)大致正常，部分肝細(xì)胞索排列紊亂，匯管區(qū)周?chē)?xì)胞腫脹、輕度空泡變及氣球樣變；++表示肝小葉結(jié)構(gòu)模糊不清，部分肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)消失，肝細(xì)胞排列紊亂，大部分肝細(xì)胞腫脹、氣球樣變及空泡變，部分動(dòng)物可見(jiàn)肝細(xì)胞點(diǎn)狀及局灶狀壞死，匯管區(qū)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；+++表示肝小葉結(jié)構(gòu)輪廓消失，肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，絕大部分肝細(xì)胞腫脹呈氣球樣變，并可見(jiàn)部分肝細(xì)胞空泡變性，也可見(jiàn)部分動(dòng)物出現(xiàn)肝細(xì)胞點(diǎn)狀或片狀壞死，匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

A.正常組：正常肝組織。B.正常組：肝細(xì)胞輕度腫脹、點(diǎn)狀壞死。C.飲酒組：肝細(xì)胞腫脹、大泡性及小泡性脂肪變。D.飲酒組：肝細(xì)胞腫脹，凝固性壞死.。

圖1小鼠肝臟病理組織學(xué)變化(HE染色，×200)3討論

酒精性肝病是由于長(zhǎng)期大量飲酒所致的肝臟損害及其一系列病變，是慢性酒精中毒最常見(jiàn)和最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。目前，我國(guó)酒精性肝病已成為僅次于病毒性肝炎的第2大肝病，嚴(yán)重威脅國(guó)民健康[2-3]。

本實(shí)驗(yàn)采用小鼠不間斷地自由飲10%酒精3個(gè)月，造成小鼠脂肪肝及肝炎。通過(guò)實(shí)驗(yàn)過(guò)程粗略計(jì)算，平均20 g小鼠1天喝1 mL酒精度為50度的高度白酒。按照體表面積換算，相當(dāng)于1個(gè)成人每天喝7～8兩高度白酒，連續(xù)3個(gè)月(90天)。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)表明，長(zhǎng)期大量飲酒會(huì)造成肝臟損傷，表現(xiàn)為肝細(xì)胞的脂肪變及壞死、肝臟指數(shù)增加、肝功能異常，血清甘油三酯也有一定程度的升高。再發(fā)展下去可能會(huì)出現(xiàn)酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化。故長(zhǎng)期大量飲酒對(duì)健康極為不利。

[1]陳育堯，陳業(yè)豪，石彩霞.大鼠高血脂及脂肪肝模型的建立[J].中藥藥理與臨床,2007,23(4):64-65.

[2]魯曉嵐，陶明，羅金燕，等.飲酒與肝病流行病學(xué)調(diào)查[J].中華肝臟病雜志，2002，10(6):467-468.

[3]全國(guó)酒精性肝病調(diào)查協(xié)作組.全國(guó)酒精性肝病的多中心調(diào)查分析[J].中華消化雜志，2007，27(4):231-234.

Effects of 3-month Freely Drink with 10% Alcohol on Mouse Livers

XUYan1,3,ZENGYong2,CHENYu-yao3

(1.SchoolofPharmacy,GannanMedicalUniversity; 2.FoodandDrugAdministrationofGanzhou,GanzhouJaingxi341000;3.SchoolofTraditionalChineseMedicine,SouthernMedicalUniversity,GuangzhouGuangdong510515)

Objective：To study the effect of 3-month freely drink with 10% alcohol on partial liver function and blood lipid levels of adult mice. Methods：The mice were divided into drinking group and normal control group with equal number of male and female (10 mice in each group). The mice in drinking group freely drank 10% alcohol for 3 months, and the mice in normal control group freely drank tap water for 3 months. The mice of every group freely ate food. After 3 months, we took blood samples from mouse eyeballs in fasting conditions, and tested the activity of the serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate transaminase (AST) and the levels of the triglyceride (TG) and total cholesterol (TC); We then weighted the livers and calculated the liver index.The left lobe of liver were fixed in 10% neutral formalin, dehydrated, embedded in paraffin, HE stained and inspected under light microscope. Results:In comparison to control group, serum AST activity of mice in drinking group significantly increased (P<0.01)；The serum TG levels also elevated to some extent (P=0.076); The liver index were raised remarkably(P<0.01)and the livers of mice in drinking group showed more fatness and necrosis than controls (P<0.01,P<0.05). Conclusion: Three-month freely drink with 10% alcohol in mice led to swelling of the livers, fat metamorphosis, and necrosis.

Mice; Alcohol; Blood lipid; Aminotransferase; Pathological examination

陳育堯，男，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，研究方向：中藥藥理、毒理、健康食品、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)。E-mail：chyy@fimmu.com

R961

A

1001-5779(2016)03-0362-03

10.3969/j.issn.1001-5779.2016.03.008

2016-02-04)(責(zé)任編輯：劉仰斌)