木耳蟲草膠囊對高脂血癥大鼠的降血脂作用

吳　俐，沈恒勝，陳君琛，翁敏劼，李怡彬

(福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所，福建　福州　350003)

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木耳蟲草膠囊對高脂血癥大鼠的降血脂作用

吳俐，沈恒勝，陳君琛*，翁敏劼，李怡彬

(福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所，福建福州350003)

采用高脂飲食法復(fù)制高血脂動物模型。研究木耳蟲草膠囊對飲食性高脂血癥大鼠的降血脂功能。動物試驗設(shè)置空白對照組、高脂模型對照組、木耳蟲草膠囊-低、中、高劑量處理組；木耳蟲草膠囊-低、中、高3個劑量組分別灌胃27.0、54.0、81.0 mg·kg-1·d-1木耳蟲草膠囊28 d，空白對照組和高脂模型對照組灌胃等體積生理鹽水；觀察木耳蟲草膠囊對高脂血癥大鼠血清、肝臟脂質(zhì)代謝和小腸吸收代謝的影響。與高脂模型對照組比較，木耳蟲草膠囊低劑量組低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)降低，中劑量組總膽固醇(TC)降低，高劑量組TC、LDL-C、甘油三酯(TG)均顯著降低 (P<0.01)，同時各處理組血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)與模型對照組的HDL-C 沒有差異；中、高劑量組能極顯著降低動脈粥樣硬化指數(shù)(AI)；各處理組的肝臟指數(shù)、肝小葉結(jié)構(gòu)和脂肪變性的嚴重程度較模型對照組改善； 各處理組的小腸絨毛高度和隱窩深度的比值較模型組明顯減小。木耳蟲草膠囊具有輔助降低血脂、膽固醇、甘油三酯功能和降低動脈粥樣硬化指數(shù)的作用，并可部分改善高脂飲食對肝臟的損害，降低絨毛高度和隱窩深度的比值，從而減少飼料中脂肪的吸收。

木耳；蛹蟲草；高血脂動物模型；降血脂；脂肪肝

高血脂是描述人體血漿中一種或多種脂質(zhì)含量提高的統(tǒng)稱，血脂主要包括膽固醇、甘油三酯、磷脂、脂肪酸等，高血脂和動脈粥樣硬化已經(jīng)成為發(fā)達國家中風和心血管疾病的兩大主要危險因素[1]。木耳[Auriculariaauricula(L. ex Hook) Underwood]，是一種常見食藥兩用膠質(zhì)真菌[2]，經(jīng)典防止出血、防治缺鐵性貧血、降脂預(yù)防動脈粥樣硬化的功能性營養(yǎng)食材之一，因受其原料處理復(fù)雜、烹飪難度較高、烹調(diào)方法單一等局限，長期食用木耳，會產(chǎn)生厭食木耳的現(xiàn)象，難以堅持食用[3]。國內(nèi)外研究報道集中在黑木耳多糖的分離純化[2,4-6]、結(jié)構(gòu)鑒定[7]以及降脂[5-6,8 ]等生物活性的研究等方面，然而將木耳及其提取物作為功能食品基料的研究報道不多。前期研究以木耳及其提取物為主要原料，以蛹蟲草為載體，開發(fā)了木耳蟲草膠囊，并發(fā)現(xiàn)木耳蟲草膠囊具有明顯降低小鼠血清丙二醛(MDA)、提高超氧化物歧化酶(SOD)和總抗氧化力(T-AOC)的優(yōu)勢(P<0.01)。為了進一步研究該產(chǎn)品的降血脂功效，通過混合型高脂血癥大鼠模型，研究其對高脂血癥大鼠的降血脂功效，為該功能食品的功效提供科學依據(jù)的同時方便人們長期食用?，F(xiàn)將試驗結(jié)果報道如下。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

木耳蟲草膠囊由福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究中心研制?？偰懝檀?TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒，為南京建成生物工程公司產(chǎn)品；其余試劑均為分析純。

1.2儀器與設(shè)備

電子天平(Sartrius，德國)；高速冷凍離心機(Health Force Neofuge 15R，上海安亭科學儀器廠)；石蠟切片機(LEICA RM 2126，上海徠卡儀器有限公司)；數(shù)碼顯像攝像機(Nikon ECLIPSE E200，上海市衡浩儀器有限公司)。

1.3試驗方法

1.3.1動物試驗[9-10]①試驗動物：健康成年雄性SD大鼠(Sprague-Dawley rats)40只，適應(yīng)期結(jié)束時，體重為(200±20)g，購于福建醫(yī)科大學[動物證號SCXK(閩)2012-0001]；②飼料[11]：維持飼料：玉米粉52%，大豆粉23%，麥麩l1%，面粉9%，鈣鹽2%，混合維生素3%。模型飼料：在維持飼料63.6%的基礎(chǔ)上，添加20%蔗糖、1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉、15%豬油，適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。飼料均由北京華阜康生物科技股份有限公司提供；③造模方法：健康雄性SD大鼠 40只，飼喂維持飼料適應(yīng)5 d后，8只喂食維持飼料作空白對照組，32只喂食模型飼料作模型組2周，每周定時稱量空腹體重1次，2周后不禁食眼內(nèi)眥采血，測定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C，確定模型可信度；④分組及處理：空白對照組繼續(xù)給予維持飼料，模型對照組及處理組繼續(xù)給予模型飼料；根據(jù)TC水平將模型組分為模型對照組、木耳蟲草膠囊-低、中、高劑量組，3個處理組分別灌胃27、54、81 mg·kg-1·d-1的木耳蟲草膠囊(木耳蟲草膠囊成人推薦量0.3 g·粒-1×6粒·d-1，按人體體重50 kg，大鼠體重300 g換算低、中、高劑量組分別為推薦量的2.5、5、7.5倍)，模型對照組和空白對照組同時給予同等體積無菌蒸餾水，灌胃期4周；定期稱量體重，用于指導(dǎo)調(diào)整大鼠灌胃量(灌胃體積按每300 g灌喂4 mL，每周用無菌蒸餾水配制灌胃料，置于4℃)。試驗結(jié)束時不禁食采血，組織采樣。

1.3.2樣品采集及測定方法①臟器指數(shù)(肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù))：大鼠采血后，分別摘取肝臟、脾臟、胸腺等臟器，經(jīng)生理鹽水淋洗、濾紙吸凈后稱重，按公式計算臟器指數(shù)[臟器指數(shù) =臟器鮮重 (mg) / 體重 (g) ]；②TC、TG、LDL-C、HDL-C：造模和灌胃期結(jié)束時，分別2次從大鼠眼眶靜脈叢采血(1.5 mL·只-1)；4℃，3 000 r·min-1，10 min 全血離心收集血清，置于4℃；采用南京建成生物工程公司試劑盒，按操作程序測定；按公式[12]計算動脈粥樣硬化指數(shù)[AI=(TC-HDL-C) /HDL-C ]；③肝臟、小腸組織切片：沿肝右葉離邊緣1 cm處，整塊切取約0.5 cm 大小的肝臟組織。在十二指腸(從幽門到十二指腸結(jié)腸韌帶)中部縱向截取1.0 cm的組織樣(距離幽門5 cm處取1 cm長的組織)，生理鹽水沖洗殘余內(nèi)容物，用干凈的濾紙吸干。將肝臟和小腸組織樣品置于10%福爾馬林溶液中固定；每組取樣3只。常規(guī)石蠟包埋切片(組織塊在4℃下進行脫水、透明；在60℃以下進行浸蠟、包埋)，蘇木素伊紅染色，常規(guī)脫水，透明，中性樹脂封片。數(shù)碼顯微攝像機(Nikon ECLIPSE E200)攝片觀察肝臟病理學變化[13]。小腸切片在10×10倍光鏡(數(shù)碼顯微攝像系統(tǒng)，Nikon ECLIPSE E200)進行攝片和圖像分析(Images-pro plus 6.0專業(yè)圖片自動分析軟件)，測量小腸絨毛高度、隱窩深度[14]。每組取3個大鼠的小腸標本，每個標本選取切片1張，每張選取5個視野，每個視野分別測定10組數(shù)據(jù)，其平均值作為1個測定數(shù)據(jù)。

1.4數(shù)據(jù)處理

2　結(jié)果與分析

2.1木耳蟲草膠囊對大鼠血清TC、TG、LDL-C、 HDL-C的影響

表1顯示，灌胃試驗開始前(高脂飼料飼喂2周后)，大鼠血清的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)比空白對照組極顯著提高(P<0.01)，大鼠高脂模型構(gòu)建成功。灌胃試驗開始時，模型對照組和各處理組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C差異無顯著(P>0.05)，灌胃4周后再將各處理組TC、TG、LDL-C、HDL-C與模型對照組的對應(yīng)指標進行比較，各指標均有降低，其中，低劑量組LDL-C明顯降低(P<0.01)，中劑量組TG降低(P<0.01)，高劑量組TC(下降率30.13%)、TG(下降率53.11%)、LDL-C(下降率43.68%)均極顯著降低(P<0.01)，同時各劑量組HDL-C不顯著低于模型對照組。

表1　木耳蟲草膠囊對大鼠血清TC、TG、LDL-C、 HDL-C的影響

注： “*”表示各組與空白對照組的同一分析指標相比差異顯著，“**”表示差異極顯著；“#”表示各處理組與模型對照組的同一分析指標相比差異顯著，“##”表示差異極顯著。下同。

2.2木耳蟲草膠囊對大鼠動脈粥樣硬化指數(shù)(AI)的影響

表2可以看出，與空白對照組相比，模型對照組AI極顯著提高；與高脂模型組相比，木耳蟲草膠囊低劑量組的AI 明顯降低，中、高劑量組AI極顯著降低(P<0.01)，值得注意的是高劑量組AI與空白對照組的HDL-C/TC沒有差異，以上結(jié)果表明木耳蟲草膠囊對冠心病及動脈粥樣硬化能夠起到明顯的預(yù)防作用。

表2　木耳蟲草膠囊對大鼠動脈粥樣硬化指數(shù)(AI)的影響

2.3木耳蟲草膠囊對大鼠肝臟的影響

2.3.1木耳蟲草膠囊對大鼠臟器指數(shù)的影響從臟器指數(shù)中可以看出(表3)，與空白對照組相比，模型對照組和木耳蟲草膠囊處理組的肝臟指數(shù)極顯著提高，但產(chǎn)品3個劑量組之間的肝臟指數(shù)與模型組的肝臟指數(shù)相比均無差異；而所有組的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均無差異。肝臟指數(shù)的結(jié)果說明了高脂大鼠模型已建立，高脂飲食對大鼠的肝臟產(chǎn)生明顯的不良作用，但木耳蟲草膠囊對肝臟因飲食攝入過量脂肪，引起的甘油三酯堆積而增重的癥狀沒有明顯改善。

表3　高脂模型大鼠臟器指數(shù)

2.3.2木耳蟲草膠囊對大鼠肝細胞形態(tài)的影響從外觀上看，對照組的大鼠肝臟呈深紅色，有彈性，表面光滑，邊緣銳利。而其他各組肝臟色澤鮮紅、豆渣樣，質(zhì)脆有油膩感，體積明顯增大，肝重增加，邊緣鈍圓，為脂肪肝外觀[13]。高脂模型組的肝重比對照組增加39.0%，與高血脂模型組相比，處理組肝臟外觀有改善，處理組的肝重比模型組降低。從HE染色切片100倍(圖1)可以看出，空白對照組肝小葉中央有一條血管，肝細胞以血管為中心向周圍呈放射狀排列，形成肝索，細胞排列緊密(圖1-A)。高脂模型對照組肝組織結(jié)構(gòu)完好，可見肝小葉，肝索排列雜亂，肝細胞排列松散，細胞體積增大，胞漿疏松、淺染。(圖1-B)。低劑量、中劑量、高劑量處理組肝小葉肝索排列呈放射狀排列，細胞較為緊密(圖1-C、D、E)，處理組的肝小葉結(jié)構(gòu)和高脂模型對照組相似，但脂肪肝的嚴重程度(淺染面積)較模型對照組輕，其中高劑量組改善效果最明顯。

2.3.3木耳蟲草膠囊對大鼠肝細胞脂肪變性的影響從HE染色切片640倍(圖2)可以看出，空白對照組肝細胞排列整齊、規(guī)則，細胞中央有大而圓的細胞核，細胞界限清晰，肝細胞內(nèi)未見脂肪滴(脂肪滴——在制片過程中被乙醇和二甲苯溶解，形成空泡)(圖2-A)。高脂模型對照組肝細胞排列雜亂，細胞胞漿出現(xiàn)大小不等的圓形空泡，有的空泡較大，將細胞核擠向邊緣，細胞邊界不清，甚至破碎(圖2-B)。低劑量處理，肝細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)略有改善(圖2-C)。中劑量、高劑量處理組肝細胞形態(tài)改善較為明顯：細胞核位置接近中央，有細胞界限，空泡的面積明顯減少(圖2-D、E)。

灌胃試驗前后，雖然攝入高脂飲食的大鼠體重與空白對照組大鼠的體重均未見顯著差異，由于大鼠在試驗開始時體重已經(jīng)較大，不再處于快速成長期所致；雖然如此，高脂飲食仍然對大鼠的肝臟產(chǎn)生了明顯的不良作用，表現(xiàn)為攝入高脂的大鼠肝臟指數(shù)和肝細胞損傷變性明顯高于空白對照組的大鼠；攝入高脂后，處理組雖然部分緩解肝細胞的損傷變性，但對肝臟指數(shù)沒有作用，表明木耳蟲草膠囊雖然可以部分改善高脂對肝臟的損害，但不能根本逆轉(zhuǎn)這一過程。

2.3.4木耳蟲草膠囊對大鼠小腸絨毛高度和隱窩深度的影響小腸絨毛高度和隱窩深度常作為腸道形態(tài)和功能成熟性的一種測量指標。小腸絨毛高度與隱窩深度的比值(VCR)是消化吸收功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，比值大，說明腸內(nèi)膜面積較大，消化吸收能力較強，比值小，說明腸內(nèi)膜變態(tài)反應(yīng)大，消化吸收能力差[15]。高脂飲食組具有相同的變化趨勢：VH變長，CD變淺，VCR比值變大。與模型組比，處理組降低了絨毛VCR，腸道吸收能力降低，從而減少了飼料中脂肪的吸收(表4)。已有文獻報道木耳具有促進腸道蠕動，促進腸道脂肪排泄，減少脂肪吸收的功效。

注：同一列中不同小寫字母者表差異顯著(P<0.05)；VCR 代表絨毛高度和隱窩深度的比值。

3　討論與結(jié)論

由于生活節(jié)奏變快，工作壓力變大和運動量減少等綜合因素的影響，導(dǎo)致人體脂質(zhì)代謝紊亂，形成脂肪肝；同時血液中脂類、醇類物質(zhì)逐漸增多，易與游離的礦物質(zhì)離子結(jié)合形成血栓，進一步引發(fā)高血壓、出血性心腦血管疾病和缺血性心腦血管疾病等，它們已位居我國突發(fā)性心腦血管疾病死亡原因的首位[16-17]。高膽固醇、高低密度脂蛋白膽固醇、高甘油三酯血癥以及低高密度脂蛋白膽固醇被認為是動脈粥樣硬化的主要危險因素；此外，科學合理的調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，補充降血脂功能食品，能夠糾正血脂異常，利于降低心腦血管疾病發(fā)生率[18-19]。木耳蟲草膠囊具有抗氧化、降血脂功效，對高血脂、動脈粥樣硬化和脂肪肝等起到一定的預(yù)防作用。

3.1木耳蟲草膠囊的降血脂及抗動脈粥樣硬化的作用

由于脂肪代謝紊亂使血液一種或多種脂質(zhì)高于正常稱為高脂血癥，與動脈粥樣硬化密切相關(guān)。相關(guān)研究表明，木耳多糖不僅具有顯著的降血脂功能，還具有抗動脈粥樣硬化的作用[2,20]。國內(nèi)外文獻報道顯示，木耳水溶性多糖是降血脂作用的有效成分[21-22]，食用菌多糖是3-羥基3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG-CoA)抑制劑，起到降低膽固醇合成，增加LDL受體，降低血液中低密度脂蛋白膽固醇的作用[14]。木耳多糖可能通過降低基質(zhì)金屬蛋白酶-13、基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達，從而抑制膠原纖維的生成，阻礙動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。該實驗證實，以模型組比較，木耳蟲草膠囊處理能極顯著降低TC、TG、LDL-C等血清血脂指標和抗動脈粥樣硬化因子，說明木耳蟲草膠囊同時具有降血脂功能和抗動脈粥樣硬化的作用。

3.2木耳蟲草膠囊的保肝作用

肝臟是脂肪攝取、脂肪酸代謝、膽固醇、磷脂和脂蛋白合成和分泌的重要器官。正常情況下，脂類代謝在肝臟中保持動態(tài)平衡，一旦飲食攝入脂質(zhì)過多，平衡被破壞，肝內(nèi)脂肪的增加超過肝細胞氧化利用和合成脂蛋白運輸出去的能力，使肝細胞脂肪沉積及肝細胞變性，形成脂肪肝。大量研究表明木耳多糖具有降血脂功能[2,6,8,19]，該試驗也證實：以模型組比較，木耳蟲草膠囊具有減輕大鼠體重和肝臟指數(shù)的趨勢，能夠減輕肝細胞脂肪變性、浸潤，并減輕脂肪對肝小葉和細胞形態(tài)的不良影響。

木耳蟲草膠囊是以木耳及其提取物為主料制作成功能食品，選用的混合型高脂血大鼠模型為保健食品輔助降血脂功能通用模型[23]，其降脂功效作用具有可判斷性。依據(jù)《保健食品檢驗與評價規(guī)范》的要求[11]，下一步將進行輔助降血脂功能的人體試食試驗，觀察該產(chǎn)品對人體的降血脂作用。

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(責任編輯：柯文輝)

Efficacy of Muerchongcao on Reducing Serun Lipidin Hyperlipidemic Rats

WU Li, SHEN Heng-sheng, CHEN Jun-chen*, WENG Min-jie, LI Yi-bin

(InstituteofAgri-engineeringTechnology,FujianAcdemyofAgriculturalSciences,Fuzhou,Fujian350003,China)

Efficacy of Muerchongcao capsules (MC)that contained the medicinal ingredients fromAuriculariaauricular(L. ex Hook) Underwood andCordycepsmilitarismilitaris(Fr.) Linkon the serum lipid reduction in Sprague-Dawley rats with hyperlipidemia induced by a high fat diet was studied. A4-week high fat diet followed by another 4 weeks of MC treatments was the feeding program applied on the lab rats. Three levels of dosage,i.e.,27, 54, and 81 mg·kg-1·d-1of MC as low-, medium-, and high-dosegroups, respectively, were administeredby gavage to the rats. A control group without MC treatment along with a blank group fed with the basal diet and physiological saline was used simultaneously during the experiment. The serum lipid, heptic metabolism, and intestinal absorption and metabolism of the hyperlipidemic rats were monitored. The serum low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C) of the rats in the low-dose MC treatment group, the serum total cholesterol(TC) in the medium-dose group, the serum TC,LDL-C, and total triglycerides (TG) in the high-dose group were found significantly lower than those in control group(P<0.01). The high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C)in the treatment groups did not significantly differ from that in control group(P>0.05). The atherogenic index(AI) of the rats in the medium-dose and high-dose groups decreased significantly as compared to control. The liver index, hepatic lobule structure, and fatty degeneration in therats of MC treatment groups were better than those in control group, whereas, the villus:cryptratio (VCR) was significantly reduced. It appearedthat MC demonstrated a hypolipidemic and anti-atherogenic effect on the hyperlipidemic rats, as well as an ability to partially repair the liver damage induced by the high fat diet and reduce VCR inhibiting the absorption of dietary and biliary cholesterol in the small intestine of the rats.

Auriculariaauricular(L.ex Hook) Underwood;Cordycepsmilitarismilitaris(Fr.) Link;hyperlipidemic animal model; hypolipidemia; hepatic adipose infiltration

吳俐，沈恒勝，陳君琛，等.木耳蟲草膠囊對高脂血癥大鼠的降血脂作用[J].福建農(nóng)業(yè)學報，2016，31(6)：657-662.

WU L，SHEN H-S，CHEN J-C，et al.Efficacy of Muerchongcao on Reducing Serun Lipidin Hyperlipidemic Rats[J].FujianJournalofAgriculturalSciences，2016，31(6)：657-662.

2016-04-01初稿；2016-04-25修改稿

吳俐 (1985-)，女，助理研究員，碩士，研究方向為農(nóng)產(chǎn)品加工與動物營養(yǎng)(E-mail: xxj1963@163.com)

陳君琛(1959-)，男，研究員，學士，食用菌精深加工技術(shù)(E-mail: junchencc@sina.com)

農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研(專項)(201303080)；福建省科技計劃項目——省屬公益類科研院所基本科研專項(2014R1015-9)

S 646.9

A

1008-0384(2016)06-657-06