生精膠囊對精子DNA和頂體完整率及體外受精結(jié)局影響*

何泳志，李大文，肖　鑫，龔國通

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)與遺傳中心,南寧 530021)

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·經(jīng)驗交流·doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.26.027

生精膠囊對精子DNA和頂體完整率及體外受精結(jié)局影響*

何泳志，李大文△，肖鑫，龔國通

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)與遺傳中心,南寧 530021)

目的臨床觀察生精膠囊對少弱精子癥患者精子DNA完整率(DFI)、精子頂體完整率及行體外受精結(jié)局的影響。方法選取2014年1月至2014年10月來該中心門診就診的300例少弱精子癥患者，口服生精膠囊進行治療3個月(試驗組)200例、未口服生精膠囊100例(對照組)。結(jié)果(1)3個月后試驗組精子頂體完整率及精子DNA完整率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；試驗組患者服用生精膠囊后前向運動精子數(shù)、精子頂體完整率、精子DNA完整率顯著優(yōu)于用藥前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(2)試驗組受精率及優(yōu)胚率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；兩組患者卵裂率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；對照組精子正常患者的受精率、優(yōu)胚率高于弱精癥患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；試驗組行IVF的臨床妊娠率高于對照組(58.4%vs. 42.9%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論生精膠囊可以有效提高精子頂體及精子DNA完整率,有利于提高IVF的受精率、優(yōu)胚率及臨床妊娠率。

生精膠囊；體外受精；精子DNA完整率；精子頂體完整率

不孕不育癥發(fā)病率占育齡夫婦的8%～10%，是值得關(guān)注的社會人群和生殖健康的重要事件[1]。其中由男方因素引起不孕不育約占40%，并有逐年上升趨勢。大量研究表明少精、弱精、頂體不完整及高水平的DFI是男性不育癥的重要因素。近年來，許多生殖工作者應(yīng)用中醫(yī)中藥治療男性不育癥取得了較好的療效。值得一提的是，生精膠囊的廣泛應(yīng)用更是為廣大不育患者帶來了福音。本研究旨在探討生精膠囊對不育癥患者精子頂體完整率、DFI及行體外受精結(jié)局的影響。

1　資料與方法

1.1一般資料回顧分析2014年1月至2014年10月來本中心就診的300例少弱精子癥患者，將其分為兩組：口服生精膠囊(遵義廖元和堂藥業(yè)有限公司)治療200例(試驗組，未行其他治療)，服藥方法：4粒，每日3次，口服，療程為3個月。未口服生精膠囊的患者100例(對照組，未行其他治療)。入選患者女方基礎(chǔ)性激素檢查及B超示卵巢功能正常，輸卵管造影示女方輸卵管正常。納入研究的男性不育患者兩次以上精液檢查前向運動精子總數(shù)為(5～10)×106(男性因素行體外受精的指標(biāo))。3個月后兩組患者均行體外受精-胚胎移植助孕。

1.2方法

1.2.1精子的收集 男方禁欲2～7 d，在室溫25～35 ℃下，手淫取精液于干燥消毒量杯內(nèi)，置于37 ℃恒溫箱內(nèi)液化。

1.2.2精液常規(guī) 參照《人類精液檢查與處理實驗室手冊》第5版。使用計算機精子輔助分析(CASA)測定精子密度及活力，各項參考值：兩次以上精液檢查密度(P)≤15×106/mL為少精子癥；兩次以上精液檢查前向運動精子(PR)≤32%或PR+非前向運動精子(NP)≤40%為弱精子癥。

1.2.3檢測精子DNA斷裂率精子DNA 的檢測采用精子染色質(zhì)擴散試驗。主要染色試劑為瑞氏-姬姆薩(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)，普通顯微鏡觀察精子核DNA 碎片的判斷標(biāo)準(zhǔn)計數(shù)為500 條精子，并觀察精子光暈大小。

1.2.4檢測頂體完整率PSA-FITC豌豆凝集素(Sigma公司，美國)用異硫氰酸熒光素FITC標(biāo)記。結(jié)果評估：用450～490 nm激發(fā)光，于1 000倍油鏡下觀察涂片。精子分類如下：(1)頂體完整(AI)：精子頭部一半以上熒光染色明亮且均勻。(2)已發(fā)生頂體反應(yīng)(AR):精子僅在赤道帶出現(xiàn)熒光帶，或者頂體區(qū)根本沒有熒光染色。(3)頂體異常：除上述兩類精子外的所以其他精子。

1.2.5促排卵方案 采用促性腺激素激動劑(Diphereline，益普生公司)/促卵泡生成素(Gonal-F，瑞士)或(和)人絕經(jīng)期促性腺激素(HMG，麗珠制藥)/注射用絨促性素(HCG,麗珠藥業(yè))長方案超促排卵。自用促性腺激素4 d后開始B超監(jiān)測卵泡發(fā)育;當(dāng)有2個卵泡直徑大于18 mm時，當(dāng)晚9:00 左右予10 000 U肌內(nèi)注射，36 h后取卵。

1.2.6體外受精將收集的精液，采用密度梯度離心法加上游法處理，收集高活力的精子，按5×105/mL與卵母細胞混合。受精6 h后去除卵丘細胞，置另一個加有ART-1020培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，放置到37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

2　結(jié)　果

2.1兩組患者一般情況比較兩組男性患者年齡、睪酮、FSH、睪丸體積及采卵數(shù)均差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2兩組患者納入研究時精子情況比較兩組患者前向運動精子數(shù)、精子頂體完整率及DFI比較均差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.3兩組患者3個月精子頂體完整率及DFI情況比較3個月后試驗組精子頂體完整率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；試驗組DFI(DFI與精子DNA完整率呈反比)低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。對照組中精子正常患者精子頂體完整率及精子DNA完整率顯著高于弱精癥患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表4。試驗組患者服用生精膠囊后前向運動精子總數(shù)、精子頂體完整率及精子DNA完整率顯著高于用藥前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表5。

表1　兩組患者一般情況比較 ±s)

表2　兩組患者納入研究時精子情況比較 ±s)

2.4兩組患者行IVF的情況比較試驗組受精率及優(yōu)胚率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；兩組患者卵裂率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表5。對照組(未服用生精膠囊)精子正?；颊叩氖芫?、優(yōu)胚率明顯高于弱精癥患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；精子正?；颊吲c弱精癥患者卵裂率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

表3　兩組患者3個月后精子頂體完整率及DFI比較

2.5兩組患者行IVF最終結(jié)局相比較對照組患者100例，其中2例取消周期，移植周期98個，臨床妊娠42個周期，臨床妊娠率為42.9%；試驗組患者200例，其中3例取消周期，移植周期197個，臨床妊娠115個周期，臨床妊娠率為58.4%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.294，P=0.049)。

表4　對照組弱精及精子正常患者精子頂體、DNA及行IVF的情況比較±s)

表5　試驗組患者用藥前后精子功能質(zhì)量的比較±s)

表6　兩組患者行IVF的情況比較

3　討　論

自從1978年第一例試管嬰兒誕生以來,輔助生殖技術(shù)(ART)在全世界蓬勃發(fā)展,給成千上萬的不孕患者帶來福音。在 ART技術(shù)中,體外受精-胚胎移植(IVF-ET)是當(dāng)今生殖領(lǐng)域里程碑性的ART技術(shù)之一,是治療不孕癥的主要方法。但是，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采取輔助生殖技術(shù)，抗感染治療，營養(yǎng)療法及激素治療以增強睪丸的生精功能等方法治療男性不育癥，都存在不同程度的缺陷[2-3]。為此，很多學(xué)者應(yīng)用中醫(yī)中藥來治療男性不育癥。對于男性精液質(zhì)量低下所致的不孕不育癥，應(yīng)用生精膠囊可有效達到補腎養(yǎng)血益精，調(diào)節(jié)陰陽平衡的作用，從而提高精子發(fā)生、成熟率[4]。生精膠囊組方成分主要有銀杏葉、馬鞭草、大血藤、杜仲、覆盆子、金櫻子、仙茅、淫羊藿；骨碎補、補骨脂、桑葚、何首烏、沙苑子、人參、枸杞子、菟絲子、黃精、冬蟲夏草及鹿茸等味藥組成。杜仲和銀杏葉等具有活血化瘀之效，對生殖系統(tǒng)的供血狀況有良好改善作用。菟絲子、鹿茸、淫羊藿等有溫補腎陽作用，可有效促進性腺激素與雄性激素樣，改善增強生精功能，提高精子活力及密度。諸藥并用具有滋陰壯陽，補腎益精之功效。生精膠囊還可以促進性器官發(fā)育，提高精子數(shù)量及活力，降低精子畸形率的作用。本研究主要觀察生精膠囊對精子DNA斷裂率、精子頂體完整率及行體外受精結(jié)局的臨床療效。

近年來,頂體酶活力及精子膜功能完整性已成為評價精子功能的重要指標(biāo)，且精子頂體完整率與頂體內(nèi)酶的含量及活力明顯相關(guān)。學(xué)者發(fā)現(xiàn)在常規(guī)精液分析結(jié)果正常的不明原因不育的男性患者中,有13%的患者精子與透明帶結(jié)合異常，還有28%患者精子與透明帶結(jié)合正常，但透明帶誘發(fā)頂體反應(yīng)缺陷，對這部分患者如采用IVF治療，受精率很低甚至完全不受精[5]?，F(xiàn)國內(nèi)已有大量關(guān)于使用生精膠囊等治療少弱精子癥的報道[6-8]，但生精膠囊對精子頂體完整率臨床療效的報道卻很少。近10年來,頂體指數(shù)、頂體完整率和精子DNA完整率均可作為選擇行輔助生殖技術(shù)的重要依據(jù)。本研究發(fā)現(xiàn)生精膠囊可以提高精子頂體完整率,且療效顯著。

精子DNA完整率已成為評估男性不育的重要參數(shù)之一。有學(xué)者認為DFI值是臨床妊娠的顯著預(yù)測因子[9]。國內(nèi)外研究表明，精子DNA和染色質(zhì)的損傷與男性不育和女性自然受孕率降低有明顯的關(guān)聯(lián)[10-11]。精子DFI與精液參數(shù)顯著相關(guān)，包括精子活力、能動性、形態(tài)等[12]。DFI水平增加與男性的年齡有關(guān),它能影響精子能動性；DFI=10%可以被認為是一個評估體外受精妊娠率的關(guān)鍵，但它行IVF優(yōu)胚率和受精率等無顯著相關(guān)[13]。有人持不同觀點，DFI水平影響常規(guī)體外受精的受精率、優(yōu)胚率及妊娠率[14]。王英俊等[15]通過精子染色質(zhì)擴散試驗，檢測精子DNA完整率并觀察精子DNA 完整率對輔助生殖結(jié)局的影響，發(fā)現(xiàn)DFI對預(yù)測IVF妊娠結(jié)果起作用。Jiang等[16]探討精子染色質(zhì)完整性測試的預(yù)測價值(SCIT)在輔助生殖技術(shù)(ART)的關(guān)系，并通過精子染色質(zhì)完整性(SCI)分析IVF-ET和ICSI技術(shù)的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)單精子注射的臨床妊娠率顯著高于高水平DFI組體外受精妊娠率,高、低DFI組之間在行體外受精或ICSI技術(shù)結(jié)局沒有顯著差異。Zhang等[17]進行薈萃分析全面了解和評估精子DNA碎片之間的關(guān)系指數(shù)(DFI)和體外受精(IVF)或胞漿內(nèi)精子注射(ICSI)技術(shù)治療妊娠結(jié)局，發(fā)現(xiàn)DFI對體外受精或ICSI技術(shù)結(jié)局的預(yù)測價值并沒有在薈萃分析得到證實，仍需進一步設(shè)計研究更好的解決這個問題。本研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用生精膠囊可以有效降低DFI,提高精子DNA完整率。

在小鼠運動實驗研究中證明，生精膠囊具有促進性器官發(fā)育，促進睪丸細胞增殖，提高生精功能，多方位改善精子質(zhì)量(精子數(shù)量、密度、活力、活率，精子畸形率)，增強精子生育能力作用[18]。生精膠囊中的枸杞子能影響下丘-垂體-性腺軸功能，可增強生殖系統(tǒng)功能，有抗氧化、抗衰老作用；黃芪能改善血液流變各項特性，可提高造血功能，使細胞的生理代謝作用增強，促進核酸、蛋白質(zhì)的合成，抗氧化，還能增加精子線粒體活性，提高精子ATP含量[19]。故此生精膠囊可能是通過提高患者整體的精子質(zhì)量，繼而也提高了精子頂體完整率和精子DNA完整率。

近30年來，隨著對體外受精-胚胎移植技術(shù)的不斷深入研究，發(fā)現(xiàn)其結(jié)局與很多因素相關(guān)。有學(xué)者報道年齡、基礎(chǔ)促卵泡生成素值、促性腺激素用量、人絨毛膜促性腺激素日孕酮 /雌二醇值、移植出血量、獲卵數(shù)、受精率、胚胎累積評分、移植胚胎數(shù)是影響體外受精-胚胎移植臨床妊娠的重要因素[20]。本研究發(fā)現(xiàn)口服生精膠囊可以提高男性不育患者行IVF-ET的受精率、優(yōu)胚率及臨床妊娠率。生精膠囊提高體外受精妊娠率的作用機制可能是：生精膠囊可以有效地提高精液量、精子活力、密度、正常形態(tài)百分率、精子DNA完整率及精子頂體完整率，從而提高了行體外受精時的受精率和優(yōu)質(zhì)胚胎率，進而提升了臨床妊娠率。

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廣西衛(wèi)生廳科研課題(Z2014191,Z2011435)；廣西醫(yī)療衛(wèi)生適宜技術(shù)與開發(fā)課題(S201421-03)。作者簡介：何泳志(1988-)，在讀碩士，主要從事生殖男科專業(yè)的研究。△

，E-mail:Lidawendavid@aliyun.com。

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