肝細(xì)胞癌患者血清中循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA、甲胎蛋白及a-L-巖藻糖苷酶聯(lián)合檢測(cè)的意義

陳懇，丁益宏，朱郁飛，魏群，李峰，張弘

(1.如皋市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 如皋　226500；2.南通大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 如皋　226000)

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肝細(xì)胞癌患者血清中循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA、甲胎蛋白及a-L-巖藻糖苷酶聯(lián)合檢測(cè)的意義

陳懇1，丁益宏1，朱郁飛1，魏群2，李峰2，張弘2

(1.如皋市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 如皋226500；2.南通大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 如皋226000)

目的探討循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA(cfDNA)在肝細(xì)胞癌(HCC)中檢測(cè)的價(jià)值及其與甲胎蛋白(AFP)、a-L-巖藻糖苷酶(AFU)聯(lián)合檢測(cè)的臨床診斷價(jià)值。方法收集39例HCC患者血清以及45例正常對(duì)照血清，采用分支DNA(branched DNA,bDNA)技術(shù)檢測(cè)血清中cfDNA的濃度，同時(shí)采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中AFP的濃度，比色法測(cè)定血清AFU的活性，并討論這三種生物標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的意義。結(jié)果39例HCC患者血清中有 22例cfDNA含量增高，45例正常對(duì)照血清中有2例cfDNA含量增高，HCC患者血清cfDNA陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于正常對(duì)照者(P<0.05)；cfDNA與AFP、AFU的一項(xiàng)或者兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)敏感性分別為71.8%、87.2%、89.7%，明顯高于單獨(dú)一項(xiàng)檢測(cè)敏感性分別為56.4%、53.8%、66.7%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)相關(guān)性分析，cfDNA、AFP與AFU這三種生物標(biāo)志物均無(wú)相關(guān)性。結(jié)論定量分析cfDNA的方法用于HCC的檢測(cè)是一種敏感、有效的方法，與AFP、AFU 聯(lián)合檢測(cè)可以大大提高HCC的臨床診斷。

癌,肝細(xì)胞;無(wú)細(xì)胞系統(tǒng);α-L-巖藻糖苷酶;甲胎蛋白類(lèi);癌癥早期檢測(cè)

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率占腫瘤發(fā)病率中的第3位，惡性腫瘤死亡率排在第2位。肝癌未能切除者1年生存率低于30%，即使行肝癌根治術(shù)，五年復(fù)發(fā)率達(dá)80%左右，小肝癌的復(fù)發(fā)率也高達(dá)40%～50%，可見(jiàn)其治療的關(guān)鍵在于早期發(fā)現(xiàn)和早期診斷[1]。目前臨床常用的診斷指標(biāo)有甲胎蛋白(a-fetoprotein，AFP)、GGT-Ⅱ、a-L-巖藻糖苷酶(a-L-fucosidase，AFU)、酸性同工鐵蛋白等[2-3]，迄今為止，AFP仍然是診斷HCC最特異的標(biāo)志，其在診斷、判斷療效、估計(jì)預(yù)后、預(yù)防復(fù)發(fā)中有肯定的作用。但是單靠AFP不能診斷所有的HCC，有30%左右的HCC患者AFP呈陰性。AFU、GGT-Ⅱ等在AFP陰性HCC的診斷有輔助意義，但仍不能取代AFP在HCC診斷中的意義，故臨床上需要一種優(yōu)于或者類(lèi)似于AFP的檢測(cè)指標(biāo)來(lái)提高HCC的診斷率。本研究以分支DNA技術(shù)為基礎(chǔ)的Alu含量測(cè)定方法，用于在HCC患者血清中定量檢測(cè)循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA(circulating free cell DNA，cfDNA)的含量，并評(píng)估其臨床診斷價(jià)值。同時(shí)，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)同批患者血清中AFP的濃度，以及比色法測(cè)定血清中AFU的活性，探討這三種生物標(biāo)志物對(duì)HCC診斷的相互關(guān)系，并討論這三種生物標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的意義。

1　材料和方法

1.1材料選取如皋市人民醫(yī)院2011年5月至2011年10月病史資料完備，經(jīng)臨床和影像學(xué)診斷為肝細(xì)胞癌患者血清標(biāo)本39例，男32例，女7例，年齡40～85歲;隨機(jī)選取如皋市人民醫(yī)院體檢各項(xiàng)指標(biāo)均正常的人員血清標(biāo)本45例，男36 例，女 9例，年齡 28～83歲。于清晨空腹條件下采集血液，離心后將血清吸入eppendorf管，分裝后置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2主要試劑QuantiGene 2.0 DNA Assay(美國(guó)Panomix 公司)；甲胎蛋白試劑盒 ARCHITECT AFP Reagent Kit(美國(guó)雅培制藥有限公司)；AFU檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海海軍醫(yī)學(xué)研究所生物技術(shù)中心。

1.3cfDNA的定量檢測(cè)所有血清標(biāo)本取5 μL，用雙蒸水稀釋到100 L。人類(lèi)基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)液用TE緩沖液進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)瑵舛确謩e為0、50、100、200、400 μg·L-1。檢測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均稀釋后置于干鍋95℃ 5 min加熱，使DNA解鏈成單鏈，迅速放入冰上，保持單鏈狀態(tài)。96孔板上每孔加入含有50%溶菌混合液和1 g·L-1蛋白酶K的90 μL WPS和10 μL檢測(cè)樣本(均做三孔檢測(cè))，用錫箔紙封閉，置于雜交箱55℃過(guò)夜，用洗滌緩沖液洗滌3遍96孔板后，依次加入前放大探針(preamplifer probe)、放大探針(amplifer probe)，每次55 ℃1 h，洗滌3次，然后加入標(biāo)記探針(labeled probe)，50 ℃1 h，洗滌3次，最后一次洗滌后，加入堿性磷酸酶底物催化劑dioxetane，用錫箔紙封閉，室溫下靜置5～10 min，顯影發(fā)光標(biāo)記，用一種微孔板發(fā)光計(jì)檢測(cè)出每孔光子讀數(shù)。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫座標(biāo)和檢測(cè)出的光子數(shù)為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出濃度與光子數(shù)相關(guān)方程式。然后，按方程式計(jì)算每孔的cfDNA的濃度，再乘以20得出每孔稀釋前的cfDNA含量。

1.4AFP的定量檢測(cè)血清標(biāo)本AFP的檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法，按雅培公司甲胎蛋白試劑盒(ARCHITECT AFP Reagent Kit)說(shuō)明書(shū)操作，根據(jù)校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線計(jì)算各標(biāo)本的濃度值。

1.5AFU的定量檢測(cè)血清標(biāo)本AFU的檢測(cè)采用比色法，按上海海軍醫(yī)學(xué)研究所生物技術(shù)中心試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，計(jì)算AFU活性。

1.6結(jié)果判讀

1.6.1cfDNA參考值

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得方程式，計(jì)算每個(gè)樣本的cfDNA含量，做受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)，選取靈敏度和特異度最高的約登指數(shù)[4](Youden's index = Sensitivity+Specificity-1)為最佳篩查陽(yáng)性界值(cut-off值)。故大于等于此值為陽(yáng)性，小于此值為陰性。

1.6.2AFP參考值

根據(jù)中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)制定的肝癌的臨床診斷和分期標(biāo)準(zhǔn)，排除妊娠、生殖系統(tǒng)的胚胎腫瘤、活動(dòng)性肝炎、轉(zhuǎn)移性肝癌，血清AFP含量大于等于400 μg·L-1為陽(yáng)性，小于400 μg·L-1為陰性。

1.6.3AFU參考值

血清AFU活性(μmol·L-1·h-1)=(A測(cè)定管-A對(duì)照管)/平均A標(biāo)準(zhǔn)管×400。大于650 μmol·L-1·h-1為陽(yáng)性，550～650 μmol·L-1·h-1為可疑，小于550 μmol·L-1·h-1為陰性。

2　結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將人類(lèi)基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)液400 μg·L-1做倍比稀釋?zhuān)瑵舛确謩e為0、50、100、200、400 μg·L-1。每個(gè)濃度去3孔光子數(shù)的平均值，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和檢測(cè)出的光子數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出方程式Y(jié)=610.01X，R2=0.961 3(圖1)。

圖1　循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2cfDNA定量檢測(cè)的結(jié)果39例HCC患者血清cfDNA含量最高12 866.8 μg·L-1，最低0 μg·L-1，中位數(shù)557.59 μg·L-1。45例正常對(duì)照者血清cfDNA含量最高 569.2963 μg·L-1，最低0 μg·L-1，中位數(shù)240.07 μg·L-1。采用u檢驗(yàn)，u=3,4963>u0.01=2.58，得P<0.01兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(圖2)。根據(jù)ROC曲線，cfDNA診斷HCC的ROC曲線下面積(AUC)為0.742±0.058，最佳分界值為509.9774 μg·L-1。當(dāng)以cfDNA≥509.9774 μg·L-1來(lái)預(yù)測(cè)HCC，其診斷的敏感度為56.4%、特異度為95.6%、準(zhǔn)確度為77.4%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為91.7%、陰性預(yù)測(cè)值為71.7%、陽(yáng)性似然比為12.692、陰性似然比為0.048、Youden指數(shù)為0.520。cfDNA濃度為509.9774 μg·L-1時(shí)，Youden指數(shù)取最大值，故將509.9774 μg·L-1定為陽(yáng)性界定值。

圖2　39例肝細(xì)胞癌患者血清和45例健康對(duì)照者血清循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA水平

2.3AFP和AFU定量檢測(cè)的結(jié)果39例HCC患者血清AFP含量最高>10 000 μg·L-1，最低3.92 μg·L-1，陽(yáng)性率為53.8%(21/39)。45例正常人血清AFP含量最高526.10 μg·L-1,最低1.31 μg·L-1l，假陽(yáng)性率為8.9%(4/45)。兩樣本均數(shù)的比較采用u檢驗(yàn)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

39例HCC患者血清AFU含量最高2366 μg·L-1，最低362 μg·L-1，陽(yáng)性率為66.7%(26/39)。45例健康人血清AFU含量最高792 μg·L-1，最低121 μg·L-1，假陽(yáng)性率為24.4%(11/45)。兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4cfDNA與AFP、AFU相關(guān)性的比較用SPSS13.0繪制散點(diǎn)圖，計(jì)算Person相關(guān)系數(shù)分析三個(gè)指標(biāo)兩兩之間的相關(guān)性。經(jīng)Pearson相關(guān)系數(shù)分析，cfDNA與AFP相關(guān)系數(shù)r=0.243，t=1.524，P>0.05，故cfDNA與AFP沒(méi)有相關(guān)關(guān)系。經(jīng)Pearson相關(guān)系數(shù)分析，cfDNA與AFU相關(guān)系數(shù)r=-0.0735，t=0.448，P>0.05，故cfDNA與AFU沒(méi)有相關(guān)關(guān)系。經(jīng)Pearson相關(guān)系數(shù)分析，AFP與AFU相關(guān)系數(shù)r=-0.085，t=0.537，P>0.05，故AFP與AFU沒(méi)有相關(guān)關(guān)系。

2.5cfDNA聯(lián)合AFP和AFU對(duì)HCC聯(lián)合檢測(cè)其診斷效率與cfDNA 、AFP或AFU單獨(dú)檢測(cè)HCC比較，有不同程度的提高(表2)。

表1　循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA、AFP和AFU對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷價(jià)值評(píng)價(jià)(%)

注：與cfDNA+AFP組比較,aP<0.05；與cfDNA+AFU組比較,bP<0.05；與cfDNA+AFP+AFU組比較,cP<0.05。

3　討論

循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA(cfDNA)是存在于體液中的碎裂的核酸片段，可以在健康人和患者的血清中檢測(cè)到，cfDNA在體液中處于一種動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程，與很多疾病密切相關(guān)，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、糖尿病、腦卒中、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心肌梗死、肺栓塞、先兆子癇、Whipple’s綜合征和各種惡性腫瘤[5]，研究發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷、器官衰竭和多器官功能障礙可導(dǎo)致釋放到血漿中的cfDNA的含量增加。器官移植的病人cfDNA水平也會(huì)升高[6]。胎兒的cfDNA可以在母體的血漿中檢測(cè)到，并且可以用于胎兒發(fā)育異常的產(chǎn)前診斷[7]。外傷和燒傷也可以導(dǎo)致cfDNA釋放到血液循環(huán)中[8]。多數(shù)研究報(bào)道，在各種惡性和良性疾病患者血清中cfDNA水平明顯高于健康對(duì)照者，在健康人中，可以推測(cè)循環(huán)DNA起源于淋巴細(xì)胞或其他有核細(xì)胞，但是在惡性腫瘤中的起源仍然未知。

關(guān)于HCC患者血清中cfDNA水平的研究，尚有一些報(bào)道。HBV攜帶者血清cfDNA水平顯著高于正常對(duì)照者血清水平[9]。Ren等發(fā)現(xiàn)血清cfDNA水平與HCC的預(yù)后呈負(fù)相關(guān),大多數(shù)病例與HBV感染有關(guān)，表明cfDNA可能是預(yù)測(cè)HBV相關(guān)HCC的前兆性標(biāo)記物。cfDNA較易從循環(huán)中分離出來(lái)，因此cfDNA是一種潛在的非侵襲性的腫瘤標(biāo)記物[10]。cfDNA水平高的HCV相關(guān)HCC患者經(jīng)肝切除術(shù)后生存時(shí)間明顯短于cfDNA水平較低患者,血清cfDNA水平與HCV相關(guān)HCC的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),39例HCC患者血清中cfDNA含量明顯高于45例正常對(duì)照血清中含量，其中，HCC伴肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移者cfDNA含量大幅度增高，男性患者對(duì)cfDNA含量也有較大影響，可見(jiàn)，肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移和性別均與HCC密切相關(guān)。提示血清cfDNA含量的升高與腫瘤的分化程度和是否發(fā)生轉(zhuǎn)移有關(guān)，推測(cè)可以在HCC的病情監(jiān)測(cè)中起到一定的作用。

現(xiàn)有的定量血清中cfDNA的方法主要為RT-PCR技術(shù)。由于血循環(huán)中的DNA是一種存在于體液中的細(xì)胞外游離狀態(tài)的DNA，與組織和細(xì)胞中的DNA不同，是游離于細(xì)胞之外的DNA，不含有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，因此血清中的cfDNA含量極少，從中提取游離DNA受到限制，提取的濃度和純度不容易達(dá)到理想的效果。分支DNA雜交技術(shù)是本試驗(yàn)采用新近發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)，即分支DNA信號(hào)放大系統(tǒng)，是一種人工合成的分支DNA，分支DNA的分支可結(jié)合多個(gè)酶標(biāo)記物，從而將捕獲的靶標(biāo)信號(hào)放大，以便進(jìn)行檢測(cè)。此技術(shù)無(wú)需提取血清游離DNA，直接以血清為檢測(cè)樣本，檢測(cè)重復(fù)序列Alu，對(duì)兩組中的血清中cfDNA進(jìn)行定量分析。Alu家族是短散在重復(fù)序列中最大的一個(gè)家族，每個(gè)元件長(zhǎng)約300 bp，具有很高的同源性(70%～98%)[12]。在Alu元件第170位置左右有一段序列AGCT，能被限制性內(nèi)切酶Alu識(shí)別并切割(AG↓CT)，因此得名。目前的研究表明[13]，Alu序列具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征及生理功能，與多種惡性腫瘤相關(guān)。Alu序列之間發(fā)生的同源重組導(dǎo)致基因的缺失、重復(fù)，染色體異位導(dǎo)致的基因重排以及轉(zhuǎn)錄水平的改變均與人類(lèi)的疾病相關(guān)。本試驗(yàn)中，應(yīng)用bDNA技術(shù)，只放大雜交信號(hào)，不擴(kuò)增靶序列，操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、省時(shí)，有很好的可重復(fù)性，可以作為檢測(cè)HCC的一種很好的檢測(cè)方法。

在眾多的HCC標(biāo)記物中，一般認(rèn)為，AFP是HCC相對(duì)特異的腫瘤標(biāo)志物，AFP持續(xù)升高是發(fā)生HCC的危險(xiǎn)因素。AFP現(xiàn)已廣泛用于HCC的普查、診斷、判斷治療效果、預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)[14]。AFP也可見(jiàn)于其他癌癥,如:睪丸癌、畸胎瘤以及胃癌，胰腺癌等。但是單靠AFP不能診斷所有HCC，因?yàn)樯杏?0%左右HCC病人AFP陰性。在某些非惡性腫瘤病變也可存在假陽(yáng)性：如病毒性肝炎，肝硬化的也會(huì)升高，妊娠婦女的血和尿中的AFP也會(huì)持續(xù)升高，但升高不如HCC明顯，大多小于300 μg·L-1。AFU是一種廣泛存在于人體組織中的溶酶體酸性水解酶，以肝腎等組織活性較高。關(guān)于AFU在HCC患者血清中含量升高的機(jī)理，有研究認(rèn)為是HCC時(shí)AFU合成增加，但也有研究認(rèn)為是肝癌細(xì)胞產(chǎn)生了一種AFU抑制劑，使其對(duì)底物水解能力下降，引起底物堆積及AFU含量代償性增加。在肝細(xì)胞癌中，AFU可以作為一種有效的腫瘤標(biāo)記物[15-16]。本實(shí)驗(yàn)中，HCC患者血清AFP含量最高>10 000 μg·L-1，最低3.92 μg·L-1，中位數(shù)392.07 μg·L-1，正常人血清AFP含量最高526.10 μg·L-1,最低1.31 μg·L-1，中位數(shù)6.02 μg·L-1。兩者比較有顯著性差異。HCC患者血清AFU含量最高2 366 μg·L-1，最低362 μg·L-1，中位數(shù)744 μg·L-1，正常人血清AFU含量最高792 μg·L-1，最低121 μg·L-1，中位數(shù)431 μg·L-1。兩者比較亦有差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可以得出，HCC患者血清中AFP含量、AFU含量較正常人血清中含量均明顯增高。

相關(guān)分析是對(duì)現(xiàn)象之間的相關(guān)關(guān)系的方向和程度進(jìn)行分析。本實(shí)驗(yàn)中，采用SPSS13.0繪制散點(diǎn)圖，cfDNA、AFP和AFU三個(gè)指標(biāo)，兩兩作圖，得出相關(guān)點(diǎn)分布狀況的圖形。本實(shí)驗(yàn)中，cfDNA與AFP相關(guān)系數(shù)r=0.243，P>0.05，故cfDNA與AFP沒(méi)有相關(guān)關(guān)系；cfDNA與AFU相關(guān)系數(shù)r=-0.0735，P>0.05，故cfDNA與AFU沒(méi)有相關(guān)關(guān)系；AFP與AFU相關(guān)系數(shù)r=-0.085，P>0.05，故AFP與AFU沒(méi)有相關(guān)關(guān)系。可以得出，cfDNA與AFP、AFU可以作為不相關(guān)的獨(dú)立的檢測(cè)指標(biāo)，用于HCC的臨床診斷。

任何一個(gè)診斷指標(biāo)，都具備三個(gè)最基本的特征，即敏感性、特異性和準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)中，在敏感性方面AFU為66.7%最高，cfDNA與AFP分別為56.4%和53.8%，在特異性方面，AFU僅為75.6%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于cfDNA為95.6%和AFP為91.1%，準(zhǔn)確性cfDNA為77.4%，AFP為73.8%，AFU為71.4%。綜合評(píng)價(jià)，三者準(zhǔn)確性相似，無(wú)明顯區(qū)別，AFU雖敏感性最高，但特異性很低，cfDNA和AFP敏感性較低，但特異性好。cfDNA聯(lián)合AFP或cfDNA聯(lián)合AFU兩項(xiàng)檢測(cè)檢測(cè)，檢測(cè)特異性下降，但敏感性顯著提高，準(zhǔn)確性相似，cfDNA聯(lián)合AFP、AFU三項(xiàng)檢測(cè)，檢測(cè)敏感性稍有提高，特異性下降，準(zhǔn)確性相似，綜合考慮病人經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)等因素，我們認(rèn)為兩項(xiàng)檢測(cè)優(yōu)于三項(xiàng)檢測(cè)。因此，cfDNA與AFP、AFU聯(lián)合檢測(cè)可以大大提高HCC陽(yáng)性檢出率，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

總之，cfDNA用于檢測(cè)HCC具有較高的敏感性和特異性，其臨床診斷價(jià)值可與AFP媲美，且與AFP、AFU沒(méi)有相關(guān)性，聯(lián)合其中一項(xiàng)或兩項(xiàng)檢測(cè)可大大提高HCC的診斷率。

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Significance of combined detection with CfDNA,AFP and AFU in the diagnosis of hepatocelluar carcinoma

CHEN Ken，DING Yihong，ZHU Yufei，et al

(DepartmentofGastroenterology，RenminHospital,Rugao,Jiangsu226500,China)

ObjectiveTo investigate the value of circulating free cell DNA(cfDNA)for the diagnosis of hepatocellular carcinoma(HCC),and to explore the value of combined detection of cfDNA,AFP and AFU for the clinical diagnosis.MethodsSerum samples from 39 HCC patients and 45 normal controls were collected.Branched DNA(bDNA) was used to detect the level of cfDNA,while AFP (a-fetoprotein)and AFU (a-L-fucosidase)were detected by chemiluminescence and colorimetry respectively.The significance of combined detection of the three biomarkers was discussed.ResultscfDNA level was increased in 22 of the 39 HCC samples and 2 of the 45 normal controls.cfDNA level in HCC samples was significantly higher than that in normal controls (P<0.05).The sensitivities of combined detection with one item(cfDNA and AFP，cfDNA and AFU),and with two items(cfDNA ,AFP and AFU) were 71.8%,87.2% and 89.7% versus 56.4%,53.8% and 66.7% for cfDNA and AFP,AFU alone respectively,the difference being statistically significant(P<0.05).By the correlation analysis,there was no significant correlation between cfDNA,AFP and AFU in the detection of HCC.ConclusionsQuantitative analysis of cfDNA is sensitive and feasible,and combined detection of cfDNA with AFP or AFU or both can improve the diagnostic sensitivity for HCC.

Carcinoma,hepatocellular;Cell-free system;alpha-L-Fucosidase;alpha-Fetoproteins;Early detection of cancer

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.09.029

2016-02-23，

2016-04-07)