寧宮止血膠囊提取工藝研究*

河北省石家莊市第四醫(yī)院藥劑科

張紅霞　王朝卿△　馮梅梅　李彩霞(石家莊 050017)

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寧宮止血膠囊提取工藝研究*

河北省石家莊市第四醫(yī)院藥劑科

張紅霞王朝卿△馮梅梅李彩霞(石家莊 050017)

提要目的：優(yōu)選寧宮止血膠囊提取工藝，最大限度提出有效成分，方便服用(減少服用量)。方法：采用正交試驗(yàn)法，以浸膏得率及黃芪甲苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察乙醇濃度(A)、加醇量(B)、提取次數(shù)(C)、提取時(shí)間(D)4個(gè)因素對(duì)提取工藝的影響。根據(jù)篩選出的最佳提取工藝條件，做3批驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果：寧宮止血膠囊醇提部分最佳提取工藝為加8倍量90%的乙醇，煎煮3次，每次1 h。結(jié)論：根據(jù)方差分析及3批驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果，考慮到生產(chǎn)實(shí)際情況，寧宮止血膠囊醇提部分最佳提取工藝為：加8倍量90%乙醇，提取3次，每次1 h。

寧宮止血膠囊；正交試驗(yàn)；黃芪甲苷；醇提；HPLC；崩漏；提取工藝；優(yōu)選

寧宮止血膠囊處方出自長(zhǎng)期從事中醫(yī)婦科疾病治療的臨床專家，為臨床醫(yī)生治療崩漏(功能失調(diào)性子宮出血)的應(yīng)用多年的經(jīng)驗(yàn)處方，處方由女貞子、黃芪、墨旱連、白芍、當(dāng)歸、茜草、三七、海螵蛸、甘草等組成。以湯劑廣泛用于臨床，九十年代后又改為口服液(三七另服)在醫(yī)院廣為應(yīng)用。止血作用快，服藥時(shí)間短，療效確切，服用安全，應(yīng)用前景廣闊。但是口服液口味難矯，易生成沉淀，不太穩(wěn)定，攜帶、運(yùn)輸、貯存不方便，且三七粉另外沖服也不便于患者服用。為了使本方推向社會(huì)，更好地服務(wù)于患者，筆者對(duì)其進(jìn)行了劑型改革，進(jìn)而對(duì)其提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選研究。

根據(jù)方中各藥味文獻(xiàn)資料報(bào)道的有效成分的理化性質(zhì)，并考慮到生產(chǎn)、臨床應(yīng)用情況，為達(dá)到最大限度提出有效成分，方便服用(減少服用量)的目的，提取部分分成兩個(gè)工藝路線，即以乙醇為溶媒的醇提工藝路線和以水為溶媒的水提工藝路線。本文僅對(duì)寧宮止血膠囊的醇提工藝路線加以研究。

1　儀器與試藥

1.1儀器9FW-320B型粉碎機(jī)(丹東市制藥機(jī)械廠)；KQ2200E型醫(yī)用超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)；日本島津LC-10A系列高效液相色譜儀；BP211D型電子天平(德國(guó)賽多利斯股份公司)。

1.2試藥試驗(yàn)藥材女貞子、黃芪、墨旱連、白芍、當(dāng)歸、茜草、三七、海螵蛸、甘草等均購自安國(guó)藥材市場(chǎng)，并經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室聶鳳禔教授鑒定。試驗(yàn)所用乙醇、甲醇、正丁醇等試劑均為分析純。

2　方法

2.1提取工藝選擇依據(jù)[1-3]女貞子：文獻(xiàn)報(bào)道女貞子水煎劑可提高肌體的免疫功能，有扶正固本的作用。而其所含標(biāo)識(shí)性成分，齊墩果酸為廣譜抗菌素，對(duì)金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌等都有抗菌作用。且齊墩果酸在水中溶解度很小。黃芪：文獻(xiàn)報(bào)道，黃芪的化學(xué)成分主要有皂苷、多糖、黃酮、氨基酸等，其水煎液有補(bǔ)氣固表，扶正固本之功效。黃芪甲苷作為黃芪主要有效成分之一，具有抗炎、降壓、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的作用，對(duì)免疫器官也有影響，但黃芪甲苷在水中的溶解度小。墨旱蓮：其主要成分為皂苷、煙堿、鞣質(zhì)、維生素A、鱧腸素、多種噻吩化合物、蟛蜞菊內(nèi)酯等，在水中有一定的溶解度，采用傳統(tǒng)的水煎煮法提取。白芍主要成分為芍藥苷。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，用水提取芍藥苷，效果優(yōu)于用甲醇、乙醇及丙酮等提取。當(dāng)歸：主要成分為揮發(fā)油及非揮發(fā)性成分，在本方中當(dāng)歸養(yǎng)血和營(yíng)，臨床上取其補(bǔ)血和血之功效，故不另提揮發(fā)油，直接用水煎煮法提取。茜草：主要成分為蒽醌類、萘醌類(茜草酸苷、大葉茜草素、茜草內(nèi)酯)、萜類等。藥理試驗(yàn)證明，茜草中含有的水溶性成分具有止血作用，故采用水煎煮法。三七：主要成分為三七總皂苷、揮發(fā)油、三七素、氨基酸等。另據(jù)報(bào)道，三七含有大量淀粉，打粉后可代替輔料使用。海螵蛸：主要成分為碳酸鈣、殼角質(zhì)、黏液質(zhì)、大環(huán)內(nèi)酯類物質(zhì)及氨基酸、無機(jī)鹽和多種微量元素。現(xiàn)代藥理研究證明，它具有收斂止血作用，臨床上常用水煎煮法提取。甘草：主要成分為甘草甜素、甘草酸、甘草次酸、甘草萜醇、甘草苷、甘草素、甘草香豆素等，屬于三萜類化合物及黃酮類化合物，基本上能溶解于水，故采用水煎煮法提取。

根據(jù)本方的功能主治和方中各味藥的主要化學(xué)成分及其藥理作用，確定了方中各藥味的提取方法：女貞子、黃芪采用乙醇提取，藥渣與白芍、墨旱蓮等再用水為溶媒提取。

2.2藥材前處理取方中藥材，分別凈選，分別處理，按處方量稱量。

2.3醇提工藝研究[4-6]女貞子具有滋腎養(yǎng)肝之功，黃芪具有補(bǔ)氣作用，女貞子主要成分為齊墩果酸、多量葡萄糖、女貞子苷，黃芪主要成分為黃芪甲苷、黃芪多糖等，在乙醇中溶解性好。因此，女貞子、黃芪采用乙醇為提取溶媒，以浸膏得率及黃芪甲苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法進(jìn)行二者提取工藝的考察。

2.4正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[7-9]根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)和參考文獻(xiàn)，提取工藝以乙醇為提取溶劑，以影響提取工藝的因素乙醇濃度(A)、加乙醇量(B)、提取次數(shù)(C)、提取時(shí)間(D)作為考察因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，按L9(34)表進(jìn)行正交試驗(yàn)，以干膏得率、黃芪甲苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選寧宮止血膠囊的最佳提取工藝，因素水平設(shè)計(jì)表見表1。

2.4.1各評(píng)價(jià)指標(biāo)的測(cè)定方法

2.4.1.1出膏率的測(cè)定：[6-7]按處方比例稱取女貞子30 g，黃芪藥材45 g，共9份。在平行條件下，按L9(34)正交表提取，濾液于45℃條件下減壓濃縮至流浸膏，置已恒重的蒸發(fā)皿中，60℃水浴蒸發(fā)近干，減壓干燥至恒重，計(jì)算浸膏得率。測(cè)定結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1　正交試驗(yàn)因素水平表

2.4.1.2黃芪甲苷含量測(cè)定[9]：分別精密稱取各試驗(yàn)號(hào)的干浸膏細(xì)粉約1.20 g，置錐形瓶中，加20 mL甲醇超聲處理30 min，濾過，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?0 mL水分次溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿提取4次(20、20、20、10 mL)，棄去氯仿層，再用水飽和的正丁醇提取4次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液提取4次(20、20、15、10 mL)，棄水層，正丁醇層用水洗至中性，水浴揮干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。照高效液相法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄V ID)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果詳見表2，方差分析詳見表4。

色譜條件：色譜柱，Diamonsil(鉆石)C184.6×250 mm 5 μL；流動(dòng)相︰乙腈︰水=37︰63。

檢測(cè)器漂移管溫度：105℃；載氣流速：2.7 L/min；撞擊器：關(guān)。

表2　正交試驗(yàn)安排及結(jié)果表

表3　以干膏得率為指標(biāo)的方差分析表

注：F0.05(2,2)=19.00

表4以黃芪甲苷提取量為指標(biāo)的方差分析表

來源SSfFSPA4.565722.282816.30B0.776320.38822.77C15.001427.500753.58*D0.279920.14001.00誤差0.279920.1472

注：F0.05(2,2)=19.00

3　結(jié)果

3.1以干膏得率為考察指標(biāo)，極差R值大小顯示，各因素作用的主次為A>C>B>D；由表3得知，A因素、C因素(提取次數(shù))的影響差異具有顯著性(P<0.05), B、D差異無顯著性(P>0.05)，A3B3C3D1為寧宮止血膠囊最佳提取工藝。

3.2以黃芪甲苷提取量為考察指標(biāo)，極差R值大小顯示，各因素作用的主次為C>A>D>B；由表4得知，C因素(提取次數(shù))的影響差異具有顯著性(P<0.05), B、A、D差異無顯著性(P>0.05)，A1B3C3D3為寧宮止血膠囊最佳提取工藝。

3.3考慮到醇提工藝的目的，黃芪甲苷提取量指標(biāo)較為重要，A1B3C3D3為最佳工藝。而B、D因素對(duì)兩個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)均無顯著性意義，極差又小，考慮到生產(chǎn)實(shí)際情況，最終確定寧宮止血膠囊最佳提取工藝條件為A1B2C3D2，即：加8倍量90%乙醇，提取3次，每次1 h。據(jù)此篩選出的工藝提取條件，做3批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。

3.4驗(yàn)證比較試驗(yàn)按處方比例稱取女貞子30 g，黃芪藥材45 g，共3份。按寧宮止血膠囊最佳組合試驗(yàn)條件A1B2C3D2進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見表5。

表5　寧宮止血膠囊提取工藝驗(yàn)證對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表

由上表結(jié)果可知，選定的寧宮止血膠囊醇提部分提取工藝最佳組合條件與最高實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致，可暫定為寧宮止血膠囊實(shí)際生產(chǎn)中醇提部分的生產(chǎn)提取條件。

4　討論

女貞子為方中君藥，文獻(xiàn)報(bào)道女貞子水煎劑可提高肌體的免疫功能，有扶正固本的作用。而其所含標(biāo)識(shí)性成分，齊墩果酸為廣譜抗菌素，對(duì)金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌等都有抗菌作用。且齊墩果酸在水中溶解度很小。黃芪為方中臣藥，文獻(xiàn)報(bào)道，黃芪的化學(xué)成分主要有皂苷、多糖、黃酮、氨基酸等。其水煎液有補(bǔ)氣固表，扶正固本之功效。黃芪甲苷作為黃芪主要有效成分之一，具有抗炎、降壓、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的作用，對(duì)免疫器官也有影響。但黃芪甲苷在水中的溶解度小。齊墩果酸、黃芪甲苷等易溶于乙醇，為達(dá)到最大限度提出有效成分，方便服用(減少服用量)的目的，因此確定女貞子、黃芪二者用乙醇提取。

由正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析，結(jié)合3批驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果，最終確定寧宮止血膠囊醇提部分最佳提取工藝條件為A1B2C3D2，即：加8倍量90%乙醇，提取3次，每次1 h。

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(2016-06-02收稿)

R284.2

A

1007-5615(2016)03-0049-03

*河北省石家莊市科技局資助項(xiàng)目：No.14163073

△河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部(石家莊 050051)