2013～2015年泰州地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監(jiān)測(cè)與分析

孫 謙

（泰州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇泰州　225300）

2013～2015年泰州地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監(jiān)測(cè)與分析

孫 謙

（泰州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇泰州225300）

對(duì)2013～2015年泰州地區(qū)不同監(jiān)測(cè)地點(diǎn)進(jìn)行了豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）的免疫抗體水平監(jiān)測(cè)，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)2343個(gè)群體的22219份豬血清學(xué)樣品，結(jié)果顯示，PRRS免疫抗體合格率均達(dá)到80%以上。通過(guò)對(duì)泰州地區(qū)不同監(jiān)測(cè)地點(diǎn)的豬血清免疫抗體監(jiān)測(cè)，分析預(yù)測(cè)豬群中暴發(fā)PRRS的風(fēng)險(xiǎn)，為科學(xué)有效防控PRRS提供技術(shù)支撐。

豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監(jiān)測(cè)與分析

豬繁殖與呼吸綜合征（又名豬藍(lán)耳病，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬的一種高度接觸性傳染病，以母豬流產(chǎn)、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬呼吸困難、敗血癥、高死亡率等為主要特征[1］。2006年，我國(guó)爆發(fā)了豬“無(wú)名高熱病”的疫情，其死亡率高并且呈多發(fā)態(tài)勢(shì)，造成了一定程度的恐慌，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)生產(chǎn)安全，最終確定了豬藍(lán)耳病病毒變異株是豬“無(wú)高熱病”主要病原，并定名為高致病性藍(lán)耳病[2］。

本試驗(yàn)應(yīng)用ELISA方法對(duì)2013～2015年泰州地區(qū)2343個(gè)群體的豬進(jìn)行了PRRS免疫抗體水平監(jiān)測(cè)，以了解泰州地區(qū)高致病性豬藍(lán)耳病疫苗免疫效力，分析豬群中暴發(fā)PRRS的風(fēng)險(xiǎn)。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1檢測(cè)樣品 豬繁殖與呼吸綜合征病毒活疫苗免疫28d后，采集2343個(gè)不同群體的豬血清樣品22219份，置于冰箱4 ℃保存，備檢。

1.1.2主要儀器與試劑 豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)置于法國(guó)LSI公司；酶標(biāo)儀購(gòu)置于Bio-Rad公司；微量移液器；一次性移液器吸頭；96孔U型稀釋板。

1.2方法

1.2.1操作步驟 按試劑盒說(shuō)明書，采集的待檢豬血清用兩步法進(jìn)行200倍稀釋，先將待檢血清5μL樣品加入到稀釋板95μl樣品稀釋液中，混勻；取5μl已稀釋好的樣品加入到酶標(biāo)板45μl樣品稀釋液中，混勻；同時(shí)做2份陽(yáng)性對(duì)照和2份陰性對(duì)照，每孔50μl添加到酶標(biāo)板上；封板，37 ℃作用1 h；棄去酶標(biāo)板中的溶液，酶標(biāo)板每孔加300 μl洗滌液洗滌3次；用吸水紙拍干；向洗滌好的酶標(biāo)板每孔加50 μl酶標(biāo)記物HRPO抗豬的單克隆抗體；封板，37 ℃作用1 h；棄去酶標(biāo)板中的溶液，酶標(biāo)板每孔加300 μl洗滌液再洗滌3次；用吸水紙拍干；向洗滌好的酶標(biāo)板每孔加50 μl底物TMB溶液，室溫20℃～25℃避光作用10 min；最后再向酶標(biāo)板每孔加終止液 50 μl終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀測(cè)定OD450值。

1.2.2實(shí)驗(yàn)成立條件 陽(yáng)性對(duì)照OD450值＞0.6，而且陽(yáng)性對(duì)照平均值/陰性對(duì)照平均值 ＞4.0。

1.2.3結(jié)果判定 按試劑盒給定計(jì)算公式進(jìn)行判定，PRRS免疫抗體IRPC =（樣品OD450值-陰性對(duì)照OD450平均值）/（陽(yáng)性對(duì)照OD450平均值-陰性對(duì)照OD450平均值）×100，IRPC大于20為陽(yáng)性，IRPC小于或者等于20為陰性。

2　結(jié)果

2.1不同監(jiān)測(cè)地點(diǎn)個(gè)體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)來(lái)自種豬場(chǎng)、規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶、屠宰場(chǎng)的22219份血清樣品進(jìn)行PRRS免疫抗體檢測(cè)，結(jié)果表明，不同類別的豬場(chǎng)PRRS免疫抗體平均個(gè)體合格率為95.7%，種豬場(chǎng)的個(gè)體合格率最高，屠宰場(chǎng)的個(gè)體合格率最低。詳見表1。

表1　不同監(jiān)測(cè)地點(diǎn)PRRS個(gè)體免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2不同監(jiān)測(cè)地點(diǎn)群體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)2343個(gè)不同群體的豬血清樣品進(jìn)行PRRS免疫抗體檢測(cè)，結(jié)果表明，不同群體的豬場(chǎng)PRRS免疫抗體平均群體合格率為96.2%，種豬場(chǎng)的群體合格率最高，屠宰場(chǎng)的群體合格率最低。詳見表2。

表2　不同監(jiān)測(cè)地點(diǎn)PRRS群體免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3不同年份樣品免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)2013～2015年的豬血清樣品進(jìn)行PRRS免疫抗體檢測(cè)，結(jié)果表明，三年間PRRS免疫抗體平均合格率均在95%以上。詳見表3。

表3　不同年份PRRS免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3　小結(jié)

豬繁殖與呼吸綜合征曾在我國(guó)多地出現(xiàn)區(qū)域性流行態(tài)勢(shì)，豬群中PRRS免疫狀態(tài)水平對(duì)于本病的防治具有重要意義，因此PRRS免疫抗體水平是反映豬群免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)[3］。目前，國(guó)內(nèi)外診斷PRRS常用的血清學(xué)方法較多，大致分為兩類，一類以N抗原為包被抗原，另一類以膜抗原為包被抗原，最有代表性的為IDEXX公司生產(chǎn)的ELISA抗體檢測(cè)試劑盒和LSI公司生產(chǎn)的ELISA抗體檢測(cè)試劑盒[4］。本實(shí)驗(yàn)選用LSI公司生產(chǎn)的PRRS抗體檢測(cè)試劑盒，用于檢測(cè)疫苗免疫后產(chǎn)生抗體水平。LSI公司的PRRS抗體檢測(cè)試劑盒操作簡(jiǎn)單快速，降低了試驗(yàn)誤差，穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，適用于大規(guī)模PRRS的抗體檢測(cè)。

本研究對(duì)不同類別、不同群體、不同年份的豬場(chǎng)PRRS免疫抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果顯示，PRRS免疫抗體合格率均達(dá)到80%以上，超過(guò)了國(guó)家規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)，這說(shuō)明泰州地區(qū)豬群PRRS疫苗免疫保護(hù)情況較好，免疫效果達(dá)到較高水平，PRRS防控工作措施開展有效。

泰州地區(qū)種豬場(chǎng)、規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶的PRRS免疫抗體個(gè)體合格率和群體合格率均達(dá)到了95%以上，而屠宰場(chǎng)的PRRS免疫抗體個(gè)體合格率和群體合格率分別為83.0%和82.8%。屠宰場(chǎng)的PRRS免疫抗體合格率降低可能是由于存在免疫失敗、生豬跨區(qū)域調(diào)運(yùn)等方面原因，建議加大屠宰場(chǎng)的生物安全措施，落實(shí)消毒滅源，防止疫病發(fā)生傳播，堅(jiān)持常規(guī)免疫抗體監(jiān)測(cè)，加強(qiáng)疫情監(jiān)測(cè)，采取綜合措施有效控制PRRS。

[1]殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M］.北京：科學(xué)出版社，1997： 619-625.

[2]Zhou Y J，Hao X F，Tian Z J，et al.Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome virus emerged in China[J］. Transbound Emerg Dis，2008，55（3-4）：52-64.

[3]彭曉鈴，邵劍挺，盛卓君.2011年新疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體分析[J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2012，29（8）：54-55.

[4]王宏燕.兩種不同ELISA法在檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征抗體中的選擇與應(yīng)用[J］.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2012，（4）：60-62.