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    膜法提取L-丙氨酸工藝研究

    2016-10-27 09:14:10李銀行
    生物技術(shù)世界 2016年3期
    關(guān)鍵詞:納濾丙氨酸套用

    李銀行

    (安徽豐原發(fā)酵技術(shù)工程研究有限公司 安徽蚌埠 233000)

    膜法提取L-丙氨酸工藝研究

    李銀行

    (安徽豐原發(fā)酵技術(shù)工程研究有限公司 安徽蚌埠 233000)

    本文研究針對發(fā)酵法生產(chǎn)的L-丙氨酸。首先將L-丙氨酸發(fā)酵液加熱預(yù)處理,用陶瓷超濾膜除去發(fā)酵液中菌體、大分子蛋白等雜質(zhì)得到超濾液,然后將超濾液經(jīng)納濾膜除去色素、小分子蛋白、無機(jī)鹽得納濾液,納濾液再經(jīng)過真空濃縮、結(jié)晶、離心、烘干、包裝得到L-丙氨酸成品。L-丙氨酸離心母液返回至納濾工序套用,最終總提取平均收率大于91%,產(chǎn)品質(zhì)量符合日本味之素企業(yè)(AJI97)和中國企業(yè)(食品級)標(biāo)準(zhǔn)。

    L-丙氨酸 新工藝 提取 超濾 納濾

    L-丙氨酸為無色至白色結(jié)晶性粉末,溶于水、乙醇,不溶于乙醚和丙酮。它主要用于:制造維生素B6、合成泛酸鈣和其他有機(jī)化合物原料;調(diào)味增香劑;用作食品添加劑,飼料、醫(yī)藥中間體等。目前,工業(yè)化生產(chǎn)L-丙氨酸的方法有兩種:一種是酶轉(zhuǎn)化法,一種是發(fā)酵法;隨著國內(nèi)外生物技術(shù)的不斷提高,發(fā)酵法生產(chǎn)L-丙氨酸[1]的優(yōu)勢日益明顯,利用發(fā)酵法生產(chǎn)的L-丙氨酸符合國內(nèi)外消費(fèi)者的綠色、健康的消費(fèi)理念,具有廣闊的市場前景。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    材料主要有:L-丙氨酸發(fā)酵液,安徽豐原發(fā)酵技術(shù)工程研究有限公司;L-丙氨酸標(biāo)準(zhǔn)品,含量99.5%,sigma公司;其他試劑均為分析純。

    1.2 儀器設(shè)備

    陶瓷膜設(shè)備,三達(dá)陶瓷科技有限公司;納濾膜設(shè)備,南京九吾高科技股份有限公司;高效液相色譜儀,Agilent 1260,安捷倫科技有限公司;UV1700PC紫外分光光度計(jì),上海奧析科學(xué)儀器有限公司;SGW-1自動旋光儀,上海精密科學(xué)儀器有限公司;ME104電子分析天平,梅特勒托利多公司;SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵,鄭州長城科工貿(mào)有限公司;R2002旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,上海申生科技有限公司;pH計(jì),梅特勒托利多公司。

    1.3 分析方法

    發(fā)酵液中L-丙氨酸含量的測定:HPLC法[2];溶液透光率測定:分光光度法(純水做對比,1cm比色皿,波長430nm);溶液吸光度(OD)測定:分光光度法(純水做對比,1cm比色皿,波長550nm);料液殘?zhí)堑臏y定:斐林法[3];硫酸根離子測定:比色法;L-丙氨酸的定性檢測:茚三酮法[4];其它指標(biāo)的測定按中國企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

    2 試驗(yàn)方法

    2.1 工藝路線

    膜法提取L-丙氨酸的工藝路線見圖1。

    L-丙氨酸發(fā)酵液經(jīng)過陶瓷膜[5]超濾除去料液中菌體及大分子蛋白等雜質(zhì),超濾膜濾液再經(jīng)過納濾膜除去料液中色素,小分子蛋白及一些無機(jī)鹽等雜質(zhì),最后再將納濾膜濾液經(jīng)過真空濃縮、結(jié)晶、離心、烘干等工序獲得L-丙氨酸成品。離心分離的母液返回至納濾工序套用,提高提取收率。

    2.2 超濾試驗(yàn)

    L-丙氨酸發(fā)酵液通過1m2的孔徑為50nm的陶瓷膜設(shè)備,考察超濾前后料液性質(zhì)變化。

    2.3 納濾試驗(yàn)

    L-丙氨酸發(fā)酵液通過2.2m2的截留分子量為500MD的納濾膜[6-8]設(shè)備,考察納濾前后料液性質(zhì)變化。

    2.4 納濾液濃縮、結(jié)晶及母液脫色、套用情況

    納濾液直接真空濃縮至L-丙氨酸含量40-45%左右,降溫結(jié)晶至15℃左右,離心,考察L-丙氨酸結(jié)晶情況及母液套用情況。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 超濾前后料液性質(zhì)變化

    超濾共進(jìn)行4批次試驗(yàn),超濾液澄清,超濾液中幾乎不含菌體,超濾平均收率99.4%;超濾膜透析水加量為原料體積的10%,料液濃縮20倍,膜平均通量為30 L/(m2*h)。

    3.2 納濾前后料液性質(zhì)變化

    納濾共進(jìn)行4批次試驗(yàn),超濾膜濾液過納濾膜后,料液透光率>90%,雜糖去除率>70%,硫酸根去除率>80%,磷酸根離子去除率>85%,納濾平均收率98.57%;納濾膜透析水加量為原料體積的15%,料液濃縮30倍,膜平均通量為20.1 L/(m2*h)。

    3.3 納濾液濃縮、結(jié)晶及母液脫色、套用情況

    L-丙氨酸納濾液真空濃縮、結(jié)晶后,晶體經(jīng)過離心、烘干,成品全檢合格。離心母液返回納濾工序套用,對成品質(zhì)量幾乎無影響,且大大增加L-丙氨酸提取收率。

    3.4 提取總收率及成品質(zhì)量分析

    L-丙氨酸母液經(jīng)過套用后,L-丙氨酸的提取收率可達(dá)91%以上。膜法提取L-丙氨酸成品的質(zhì)量符合日本味之素(AJI97)和中國企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(食品級)。

    圖 1 L-丙氨酸提取新工藝路線

    4 結(jié)論

    我們采用了膜技術(shù),大大提高了L-丙氨酸發(fā)酵液中L-丙氨酸的純度,使其達(dá)到了結(jié)晶出合格品的條件,降低了L-丙氨酸的生產(chǎn)成本。L-丙氨酸成品提取總收率大于91%,產(chǎn)品質(zhì)量符合中國企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(食品級)和日本味之素企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(AJI97),從而證明了膜工藝在L-丙氨酸提取上的先進(jìn)性,具有非常廣闊的應(yīng)用前景。

    [1]蔣光玉.發(fā)酵法生產(chǎn)L-丙氨酸提取工藝的研究[J].中國食品添加劑,2011(03):101-137.

    [2]蔣光玉,章暉,劉洋等.基于微生物同化作用的D-丙氨酸生產(chǎn)工藝研究[J].氨基酸和生物資源,2010,32(4):41-45.

    [3]李雪梅,楊俊慧,張利群等.還原糖測定方法的比較[J].山東科學(xué). 2008,21(2):18-20.

    [4]王秀奇,秦淑媛,高天慧等.基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京:高等教育出版社.1996:234-235.

    [5]王蘇新.多孔陶瓷的制備方法及用途[J].江蘇陶瓷.2002(04):26-28.

    [6]侯立安,劉曉芳.納濾水處理應(yīng)用研究現(xiàn)狀與發(fā)展前景[J].膜科學(xué)與技術(shù).2010(04):1-7.

    [7]嚴(yán)???生化分離技術(shù)[M].華東理工大學(xué)出版社.1996:110-120.

    [8]吳麟華.膜分離中的新成員——納濾膜及其在制藥工業(yè)中的應(yīng)用[J].膜科學(xué)與技術(shù),1997(5):11-14.

    TS202

    A

    1674-2060(2016)03-0321-01

    李銀行(1987—),男,安徽蚌埠,工作單位:安徽豐原發(fā)酵技術(shù)工程研究有限公司提取研究室,工程師,本科,主要研究方向:生物工程。

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