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    水痘疫苗凍干保護(hù)劑的改進(jìn)

    2016-10-27 09:13:56李佳林李開軍黃林
    生物技術(shù)世界 2016年3期

    李佳林 李開軍 黃林

    (成都生物制品研究所有限責(zé)任公司病毒性疫苗二室 四川成都 610023)

    水痘疫苗凍干保護(hù)劑的改進(jìn)

    李佳林 李開軍 黃林

    (成都生物制品研究所有限責(zé)任公司病毒性疫苗二室 四川成都 610023)

    明膠是水痘減毒活疫苗中常用的凍干賦形劑組分,是源于動物組織的大分子蛋白質(zhì)。由于明膠可能引起疫苗接種后的不良反應(yīng),且與某些民族的宗教信仰相沖突,近年來WHO建議減少和避免明膠在病毒疫苗中的使用[1]。我國目前在疫苗凍干保護(hù)劑方面的研究與國外還有相當(dāng)大的差距,明膠作為病毒性疫苗的凍干保護(hù)劑組分仍然廣泛使用,但目前國內(nèi)還沒有相應(yīng)的藥用輔料標(biāo)準(zhǔn),因此必須盡快建立相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);同時還應(yīng)對疫苗中明膠含量、分布情況、以及對病毒的穩(wěn)定性研究和替代物等方面進(jìn)行全面的研究,以便將來在疫苗生產(chǎn)中取消明膠的添加。本文主要對常規(guī)使用的凍干保護(hù)劑1和不含明膠的凍干保護(hù)劑2進(jìn)行對比,以便篩選出更適合的水痘疫苗保護(hù)劑。

    明膠 水痘疫苗 保護(hù)劑 賦形劑 凍干

    1 材料與設(shè)備

    明膠 LYO-13型凍干機(jī) 一定比例的凍干保護(hù)劑 水痘減毒活疫苗

    2 原理

    凍干是復(fù)雜的相變過程,凍干制品在整個過程存在著各種應(yīng)力,包括低溫應(yīng)力、凍結(jié)應(yīng)力、干燥應(yīng)力等,它們常常是導(dǎo)致制品中蛋白質(zhì)變性的因素,因此選擇適宜的凍干保護(hù)劑十分重要。凍干保護(hù)劑可以改變制品冷凍干燥時的物理、化學(xué)環(huán)境,減輕或防止冷凍干燥或復(fù)水[2]對病毒的損害,盡可能的保持病毒原有的各種生理生化特性和生物活性。而明膠正是凍干水痘減毒疫苗中使用的賦形劑,但由于其是源于動物組織的大分子蛋白質(zhì),可能與疫苗接種后不良反應(yīng)有關(guān),因此在疫苗生產(chǎn)中少用和不用動物源性的大分子蛋白質(zhì)是疫苗發(fā)展的趨勢。本文將凍干保護(hù)劑1和不含明膠的凍干保護(hù)劑2進(jìn)行對比,以便篩選出更適合的水痘疫苗凍干保護(hù)劑。

    表1

    表2

    3 操作過程

    本次水痘疫苗凍干保護(hù)劑的對比試驗共分為2組,第一組為對照組,即含有明膠的水痘疫苗(常規(guī)生產(chǎn)用凍干保護(hù)劑)共制備一批。第二組為實驗組,即不含明膠的水痘疫苗共制備3批。

    四個批次的水痘疫苗生產(chǎn)工藝和所用液體均相同。首先生產(chǎn)組從細(xì)胞組接過合格細(xì)胞后,用水痘病毒京-84對細(xì)胞感染,72小時后進(jìn)行洗滌換液并觀察病變,達(dá)到理想的病變后添加凍干保護(hù)劑,然后收獲放于-70℃冰箱內(nèi)凍存,取出單次收獲物放在轉(zhuǎn)瓶機(jī)上旋轉(zhuǎn)融化破壁,完全融化后濾過合并即為半成品,然后對半成品抽樣滴定。最后送分包裝車間無菌灌裝到2ml西林瓶中、半加塞,放置同一凍干柜中進(jìn)行34小時的完全冷凍干燥。具體信息見下表1:

    凍干后,從每批水痘疫苗成品中抽取5支混合后進(jìn)行成品滴度、熱穩(wěn)定、下降值(37 ℃放置l周后滴度不低于1lgPFU/0.5ml)、異常毒性、物理外觀的檢查。具體結(jié)果見下表2:

    4 結(jié)果討論

    傳統(tǒng)明膠具有較好的凍干賦形效果,但亦可用其他物質(zhì)取代凍干明膠的賦形劑地位,成品水痘疫苗的熱穩(wěn)定性不合格可能需要調(diào)整凍干曲線。

    在凍干過程中,明膠在對水痘這類比較脆弱的病毒的保護(hù)中作用甚微,一般不考慮明膠對病毒的保護(hù)作用。

    在實驗結(jié)果比較中發(fā)現(xiàn),取消明膠之后過敏反應(yīng)降低,因此對于日益嚴(yán)格的生物制品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)來講,取消明膠是有積極意義的[3]。

    [1]鄭新添,嚴(yán)忠平 《凍干保護(hù)劑及其保護(hù)機(jī)理的研究進(jìn)展》中國生化藥物雜志

    [2]孫東坡,胡一橋 《蛋白質(zhì)藥品冷凍干燥制品中保護(hù)劑及其保護(hù)機(jī)理》藥學(xué)進(jìn)展復(fù)水:重新吸回水分,恢復(fù)原狀,為冷凍干燥的逆過程。

    [3]陸小軍《對含明膠病毒活疫苗引起的過敏反應(yīng)的最低發(fā)生率估計》《國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊》2001年第03期

    [4]朱茍波,陳秀珍《腮腺炎疫苗保護(hù)劑的改進(jìn)》中國生物制品學(xué)

    TB35

    A

    1674-2060(2016)03-0204-01

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