豬感染牛病毒性腹瀉病毒的診斷

鄭吾星　山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局256500

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豬感染牛病毒性腹瀉病毒的診斷

鄭吾星山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局256500

2015年10月，某豬場發(fā)生一起以母豬產(chǎn)死胎、木乃伊胎，以及出生仔豬發(fā)熱、腹瀉、消瘦和最終死亡的病例，通過對病死豬發(fā)病前臨床癥狀的觀察和病理剖檢，結(jié)合實驗室RT-PCR檢測，最終確診為感染牛病毒性腹瀉病毒。

豬；牛病毒性腹瀉病毒；分離；鑒定

牛病毒性腹瀉病毒與豬瘟病毒同屬于黃病毒科瘟病毒屬成員，兩者在抗原性上有部分交叉，在血清學(xué)上有交叉反應(yīng)，易感宿主也有部分交叉。牛病毒性腹瀉病毒既可以感染牛，也可以感染豬、羊及野生動物等［1］。豬感染BVDV往往表現(xiàn)出溫和豬瘟的癥狀。

1　材料和方法

（1）主要試劑。病毒基因組RNA提取試劑盒、一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒均購自寶生物工程（大連）有限公司；膠回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒均購自北京百泰克生物科技有限公司。

（2）實驗室PCR檢測。根據(jù)臨床癥狀和病理剖檢結(jié)果，初步診斷為豬瘟病毒或相關(guān)病毒感染，根據(jù)參考文獻(xiàn)方法，分別合成豬瘟病毒和牛病毒性腹瀉病毒的特異性檢測引物。取病死豬的肝臟、脾臟和淋巴結(jié)等組織病料，以1∶5的比例加入滅菌生理鹽水后充分研磨，12000r/分鐘離心5分鐘，取上清液按照病毒基因組RNA提取試劑盒使用說明提取組織病料的RNA，參照參考文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2.0％瓊脂糖凝膠電泳后觀察結(jié)果。

（3）基因測序鑒定。將電泳檢測大小正確的RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物利用膠回收試劑盒回收后，送上海生工生物工程有限公司測序，將測序結(jié)果與GenBank中的序列進(jìn)行同源性比較。

2　結(jié)果

（1）臨床癥狀。2015年10月，某養(yǎng)殖場母豬產(chǎn)胎中含有死胎和木乃伊胎，仔豬出生后體溫升高，被毛凌亂，精神沉郁，食欲下降，先便秘后腹瀉，消瘦直至死亡，死亡率不到10％。用青霉素和鏈霉素等藥物治療無效。用豬瘟活疫苗緊急免疫接種無效。

（2）病理剖檢。剖檢病死豬可見全身出血，心外膜、腎、淋巴結(jié)有多量出血點(diǎn)，淋巴結(jié)腫大，消化道有慢性卡他性炎癥，胃及腸黏膜發(fā)生潰瘍。

（3）PCR檢測結(jié)果。RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2.0％瓊脂糖凝膠電泳，在位于約153bp處可見特異性擴(kuò)增條帶（圖1），與文獻(xiàn)［3］報道的大小一致，表明待檢組織病料中含有牛病毒性腹瀉病毒，而無豬瘟病毒。

（4）基因序列鑒定結(jié)果。測序結(jié)果顯示，擴(kuò)增序列為BVDV特異性序列，證明該發(fā)病豬場的致病原為牛病毒性腹瀉病毒。

（5）綜合診斷結(jié)果。經(jīng)臨床癥狀、病理變化觀察等臨床診斷，以及PCR檢測、基因序列鑒定等實驗室診斷，綜合判定該豬場發(fā)生了牛病毒性腹瀉病毒感染。

3　討論

本研究從臨床疑似豬瘟感染病例的仔豬體內(nèi)檢出牛病毒性腹瀉病毒，說明牛病毒性腹瀉病毒可以感染仔豬，產(chǎn)生類似豬瘟的臨床癥狀和病理特征。近年來，豬感染牛病毒性腹瀉病毒的報道不斷增多，豬源牛病毒性腹瀉病毒的污染問題日益嚴(yán)重，豬群中牛病毒性腹瀉病毒的普遍存在常影響豬瘟疫苗的免疫效果。此外，飼喂污染BVDV的飼料也可以成為BVDV的感染來源，一些牛的臟器等廢料被加工成飼料，而牛群中BVDV普遍存在，造成了BVDV的污染來源。第三，豬、?；旌巷曫B(yǎng)，牛感染BVDV后直接傳染給豬也是豬源BVDV的感染來源。國內(nèi)陶潔等于2013年通過對豬瘟疫苗中牛病毒性腹瀉病毒的篩查，發(fā)現(xiàn)來自10個疫苗廠家的10份豬瘟疫苗樣品，有一份檢出BVDV陽性核酸片段。通過對BVDV擴(kuò)增產(chǎn)物測序和序列分析，證實該毒株為BVDV1型，說明豬瘟疫苗中污染的BVDV分離株的遺傳特性差異較大。通過各種檢測方法的綜合運(yùn)用，可以有效監(jiān)測豬群BVDV的感染情況。疫苗制備及飼料生產(chǎn)企業(yè)要嚴(yán)格對生產(chǎn)原料進(jìn)行檢查，一定要加強(qiáng)對生物制品的安全監(jiān)測，這樣才能有效控制豬源BVDV的污染問題。

［1］李嬌，祖立闖，王金良，等.警惕豬群中牛病毒性腹瀉病毒感染［J］.養(yǎng)豬，2013，（5）：102-104.