藥敏紙片法和打孔法檢測細(xì)菌耐藥性的方法比較

謝秀麗　安徽省池州市貴池區(qū)畜牧獸醫(yī)局247100

蔣月美　安徽省池州市貴池區(qū)唐田鎮(zhèn)人民政府247100

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藥敏紙片法和打孔法檢測細(xì)菌耐藥性的方法比較

謝秀麗安徽省池州市貴池區(qū)畜牧獸醫(yī)局247100

蔣月美安徽省池州市貴池區(qū)唐田鎮(zhèn)人民政府247100

目的:進(jìn)行藥敏紙片法和打孔法檢測細(xì)菌耐藥性的方法比較。方法：將青霉素、鏈霉素、硫酸慶大霉素配成濃度為100單位/mL時(shí)，通過藥敏紙片法和打孔法，測定其抑菌圈直徑來進(jìn)行比較兩種方法對細(xì)菌的耐藥性。結(jié)果：在100單位/mL的藥液濃度時(shí)，抑菌效果打孔法優(yōu)于藥敏紙片法。結(jié)論:在同一濃度時(shí)打孔法的抑菌效果優(yōu)于紙片法。

打孔法；藥敏紙片法；抑菌圈的直徑

藥敏紙片法是最常用的一種試驗(yàn)方法，能直接體現(xiàn)出抗菌藥物的抗菌效用。其優(yōu)點(diǎn)是直觀明顯、對比鮮明，有一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)［1］。打孔法僅用1個(gè)打孔器，省去了數(shù)量較多的紙片和藥物的浪費(fèi)。由于液體的表面張力作用，孔中液體在較低斜度下不會(huì)外流，能獲得理想的圓形抑菌圈。

1　材料與方法

（1）材料。藥物為青霉素、鏈霉素和硫酸慶大霉素，購自華北制藥股份有限公司。菌種為大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌和產(chǎn)氣桿菌，由安徽科技學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存。培養(yǎng)基和試劑為普通營養(yǎng)瓊脂、蒸餾水、磷酸二氫鉀和生理鹽水。儀器為恒溫水浴培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)和高壓蒸汽滅菌器。

（2）方法。藥物配制參照《抗生素藥品檢驗(yàn)》的配制方法。培養(yǎng)基制備。在容量為1000mL的三角燒瓶中加入蒸餾水1000mL，放在電爐上加熱。用天平準(zhǔn)確稱取35.0g營養(yǎng)瓊脂，放入三角燒瓶中并不斷攪拌使瓊脂完全溶解，然后放入高壓滅菌鍋中經(jīng)（121℃，20分鐘）高壓滅菌，取出趁熱倒入經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)皿中，厚度約3～5mm，冷卻凝固后備用。菌種活化。將4種菌種分別接種至普通營養(yǎng)瓊脂斜面后，置37℃下培養(yǎng)箱中過夜備用。濾紙片的制備及處理。將普通定性濾紙用打孔機(jī)打成若干圓形紙片，直徑為5.0mm，置于干燥潔凈的試管內(nèi)，塞上棉塞，放入高壓滅菌鍋中經(jīng)（121℃，20分鐘）高壓滅菌后，取出放入恒溫干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥。取一定數(shù)量紙片，分別放入100單位/mL的各種藥物中，浸潤后備用。接種培養(yǎng)。分別取上述菌株的新鮮培養(yǎng)物，在無菌操作條件下，用不同涂布棒均勻涂抹在接種過不同菌種的瓊脂培養(yǎng)基上，再用無菌鑷子，將在藥液中浸潤的紙片均勻間隔貼于各培養(yǎng)基表面，再用無菌吸管在接種過不同菌種的培養(yǎng)基上打孔，將藥液用移液槍移入孔內(nèi)，各藥液對每種試驗(yàn)菌均做3個(gè)重復(fù)。貼入時(shí)標(biāo)記起始位置，按順時(shí)針或逆時(shí)針方向?qū)V紙片順序貼入，輕壓紙片使接觸良好。放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，24小時(shí)后取出，觀察抑菌圈，測量并記錄結(jié)果，取抑菌圈直徑平均值［2］。抑菌圈直徑測量參照《微生物和檢驗(yàn)技術(shù)》判定結(jié)果，用抑菌圈的直徑表示，抑菌圈越大，抑菌效果越好［3］。

表1　藥物抑菌圈的直徑（mm）

表2　藥物抑菌圈的直徑（mm）

2　結(jié)果與分析

（1）抑菌圈直徑測量。濃度為100單位/mL的藥物紙片貼于4種細(xì)菌培養(yǎng)物上和培養(yǎng)24小時(shí)后，用直尺測量抑菌圈的直徑，取平均值。再將濃度為100單位/mL的藥液用移液槍移入四種細(xì)菌培養(yǎng)物上，用直尺測量抑菌圈的直徑，取平均值。

由表1和表2可見，藥敏紙片法和打孔法抑菌的總體效果是青霉素對細(xì)菌的抑菌結(jié)果中，藥敏法對金黃色葡萄球菌的抑制>對產(chǎn)氣桿菌的抑制>對枯草桿菌的抑制>對大腸桿菌的抑制，而打孔法無抑菌效果。鏈霉素和硫酸慶大霉素對各種細(xì)菌的抑菌結(jié)果中，打孔法的效果優(yōu)于藥敏紙片法。

3　結(jié)論

在同一藥液濃度的條件下，打孔法的抑菌效果優(yōu)于藥敏紙片法。

［1］劉山輝.抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)方法［J］.吉林畜牧獸醫(yī)，2003，24（12）:49-50.

［2］邱世翠，李波清，欒希英，等.咪康唑與甲硝唑配伍對白色念珠菌殺菌作用的實(shí)驗(yàn)觀察［J］.濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，21（5）:440-441.

［3］楊建江，韓文瑜，杜銳，等.30種中草藥對耐藥性豬鏈球菌的抑菌試驗(yàn)［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2004，23（2）：14-16．