小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測技術要點及注意事項

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小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測技術要點及注意事項

小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試驗采用的是中國動物衛(wèi)生與流行病學中心研制的小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，該試驗取得正確可靠的結果與試劑、血清的合理配備和正規(guī)的操作息息相關。下面筆者就自己的實踐經(jīng)驗將幾項要點總結如下：

1　血樣采集與處理要點

常規(guī)采血大多數(shù)采取頸靜脈采血的方式，在常溫下采完的血樣要保持傾斜靜置，待采完最后一份血樣凝固后方可帶走。為了確保血清質量應避免下列情況：

1.1若用注射器采血，有時血流較快呈柱狀進入注射器，這樣會產(chǎn)生泡沫漂浮在上層，由于表面張力的作用使得這樣的血樣一般不會析出血清。若要避免產(chǎn)生汽泡就要在采血時放慢抽血速度，讓血液緩慢流入注射器。如果已經(jīng)產(chǎn)生泡沫了，可將針頭向上，推動活塞將泡沫排出，然后拉回活塞吸進部分空氣后再進行放置。

1.2炎熱的天氣，外界溫度超過32℃以上時，要將血樣避開強光直射，否則血液凝固而不出血清。

1.3外界氣溫在0℃以下時要防止凍結，更不能將剛采的血樣放入冰箱內(nèi)保存，避免造成溶血或不出血清。若條件有限沒有溫暖的環(huán)境，可以用手捂熱采血器至血液完全凝固。

1.4采回的血樣若有血清析出要及時進行分離保存，否則時間一長也會有溶血現(xiàn)象發(fā)生。若血清析出不明顯可以室溫靜置一夜。

1.5當?shù)玫窖搴蟛灰つ康倪M行試驗，以避免不合格的血清影響檢測結果的準確性和對試驗試劑的浪費。合格的血清要具備未腐敗、無溶血、清亮透明、未凝固或未完全凝固、體積足夠檢測與樣品備份這些條件。

2　試劑的準備

試驗要在室溫下進行，試劑盒要選擇在有效期內(nèi)的，開封時間不長，無渾濁無雜質的。試劑取出后要恢復到室溫后再進行使用。底物溶液要始終避光，各種試劑要先定量再配制，現(xiàn)用現(xiàn)配，現(xiàn)用現(xiàn)取，不造成浪費并保證質量。

3　操作技巧與注意事項

在操作過程中保持安靜，精神集中，動作要穩(wěn)，盡量避免外界干擾。一旦不注意很有可能造成試驗結果不準確而影響真實性。

3.1血清樣本的擺放。整齊有規(guī)律的擺放血清可以提高操作的準確性和試驗效率。如果有擺放麥道管的板子，可以將裝有待檢血清的麥道管按照酶標板設計的布局擺放在板子上。如果沒有板子可以按照一定的規(guī)律把血樣擺在操作臺上，比如每10份為1組，或者前2份為1組，剩下的每組放8份。

3.2酶標板下面放置數(shù)字墊板。可以在白紙上按照酶標板各孔的位置畫出96個孔的排列順序和編號，然后將酶標板放在白紙上，使各孔與紙上的數(shù)字一一對應，這樣每個孔的編號清晰可見，加樣的時候哪個血樣加到哪個孔一目了然。與第一條配合應用工作效率會明顯提升。

3.3洗板后的殘留氣泡巧處理。酶標板用洗液清洗過后在濾紙上拍干，然而有時候總有頑固的氣泡經(jīng)過多次拍打后依然在孔底不破。如果氣泡不破就繼續(xù)加試劑的話肯定會影響試劑的作用，所以要想辦法把它弄掉?？梢杂靡粋€1000μl的單道移液器帶上接頭后往孔里吹氣，將氣泡吹破，然后再進行徹底拍干。注意吹的時候不要碰到孔底和孔壁。

4　試驗結果判定方法

陰、陽性對照成立后對待檢血清進行判定。樣品阻斷率＞50的為陽性，樣品阻斷率≤50的為陰性。計算的時候把阻斷率為50記為待檢血清的OD值臨界點，算出這個臨界點數(shù)值，然后去和待檢血清OD值去對比，如果待檢血清OD值≥臨界點，則該血清為陰性，如果待檢血清OD值＜臨界點，則該血清為陽性。這樣只要用這個臨界點數(shù)值去和每份血清OD值進行對比就能快速得出結論，不必再逐個計算了。

試驗本身就是科學嚴謹?shù)?，試驗的結果要求及時、準確、有效。所以操作人員就要盡量減少試劑和人為因素對試驗的影響，以提高檢測效率。

067400河北省承德縣農(nóng)牧局任利強