葡萄糖原料碎米中12種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)

陳愛(ài)軍，張喜利，張?jiān)评?，賀福元，劉　珊，劉文龍*，劉平安

（1湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南衡陽(yáng)421005；2湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥超分子實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙410208；3.湖南安鄉(xiāng)縣北河口血防站，湖南常德415600）

·藥物分析·

葡萄糖原料碎米中12種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)

陳愛(ài)軍1，2，張喜利2，張?jiān)评?，賀福元2，劉珊2，劉文龍2*，劉平安2

（1湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南衡陽(yáng)421005；2湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥超分子實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙410208；3.湖南安鄉(xiāng)縣北河口血防站，湖南常德415600）

目的建立一種快速檢測(cè)碎米中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的方法，用于注射用葡萄糖原料碎米的質(zhì)量監(jiān)控。方法采用氣相色譜法與氮磷檢測(cè)器（NPD）快速檢測(cè)碎米中的12種農(nóng)藥殘留。結(jié)果所建立的方法學(xué)的線性范圍是0.1～5.0 ppm、檢出限為0.98～6.24 ppb、檢測(cè)限為3.27～20.8 ppb、相關(guān)系數(shù)均大于0.999 5；精密度、重復(fù)性的RSD均在6.3%以下；回收率在87.25%～108.4%。結(jié)論本文建立了碎米中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法，為注射用葡萄糖的制備篩選出合格的碎米原料提供了有效保障。

碎米；注射用葡萄糖；氣相色譜；有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

〔Abstract〕objective To establish a determination method of the organophosphate in the broken rice，which can be used to control the glucose-injection quality.M ethods 12 kinds of pesticides residues were rapid detected by using gas chromatography adding NDP detector.Results The linear range in the established determination method was 0.1～5.0 ppm，the limit of detection was 0.98～6.24 ppb，the limit of qualification was 3.27～20.8 ppb，and the correlation coefficient were all more than 0.995.Furthermore，the RSDs of the precision and repeatability tests were under 6.3%，the coeffecient of recovery was between 87.25%～108.4%.Conclusion This study had established a set of method to detect scientific organophosphorus pesticide residues.It will provide effective guarantee for screen raw broken-rice materials of the injection glucose.

〔Keywords〕broken rice；injection glucose；gas chromatography；organophosphorus pesticide residues

近年來(lái)臨床上葡糖糖注射液的需求量逐年增大、有供不應(yīng)求的趨勢(shì)［1］。目前注射用葡萄糖的生產(chǎn)幾乎都是以玉米為原料，經(jīng)過(guò)NOVO法酶解而成。然而對(duì)以稻谷為主要農(nóng)作物的我國(guó)而言，玉米的產(chǎn)量并不多。從而使得以玉米為原料生產(chǎn)供注射用葡萄糖的周期長(zhǎng)、產(chǎn)量低、成本高［2］。因此，尋求一種供制備注射用葡萄糖的新原料物種已經(jīng)成為關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題。為此，國(guó)內(nèi)許多專家曾試圖以大米為原料研制開(kāi)發(fā)供注射用的葡萄糖，但由于以大米為原料的生產(chǎn)成本較高、工序過(guò)長(zhǎng)等原因而使得其產(chǎn)業(yè)停滯不前［3-4］。基于現(xiàn)階段的碾米技術(shù)，在稻谷碾制過(guò)程中勢(shì)必會(huì)產(chǎn)生約10%左右的碎米。這些碎米大多當(dāng)成廢物而被廉價(jià)處理用于燃料、飼料生產(chǎn)等領(lǐng)域。如果將其開(kāi)發(fā)應(yīng)用，作為供注射用葡萄糖的另一種新型原料，無(wú)疑將賦予碎米新的附加值。眾所周知，碎米是稻谷碾磨時(shí)產(chǎn)生的糠殼，幾乎所有的農(nóng)藥殘留都富集在這個(gè)部位，因此有必要研究建立一種適宜碎米的農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)方法，檢測(cè)控制碎米原料的質(zhì)量。課題組對(duì)用大（碎）米為原料制成注射用葡萄糖已做了大量研究，同時(shí)對(duì)有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)殘進(jìn)行了研究報(bào)道［5-7］，本文旨在繼續(xù)建立碎米中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法。

1　材料

1.1儀器

SP-6890型氣相色譜儀（山東魯南瑞虹化工儀器有限公司），Kromat PC-50色譜柱（30 m× 0.32 mm，0.25μm，北京科瑞邁科技有限責(zé)任公司），N2000色譜數(shù)據(jù)工作站（浙江大學(xué)），R201D-Ⅱ旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），T-214萬(wàn)分之一電子天平（北京賽多利斯丹佛），1μL微量進(jìn)樣器（上海高鴿工貿(mào)有限公司）。

1.2藥品與試劑

碎米采購(gòu)于湖南各地區(qū)的糧食局。混合有機(jī)磷農(nóng)藥（敵敵畏、樂(lè)果、甲基對(duì)硫磷、馬拉硫磷含量分別為49.2、52.3、49.5、52.1、50.3 mg/L，批號(hào)335603，環(huán)境保護(hù)部標(biāo)準(zhǔn)樣品研究所）。乙硫磷（0.100 g/L，樣品編號(hào)BW3458 08001，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）。殺撲磷（1.00 g/L，樣品編號(hào)BW3454-2 09001，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）。二嗪農(nóng)（0.99 g/L，樣品編號(hào)BW3457-2 09001，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）。甲胺磷（1.00 g/L，樣品編號(hào)BW3532 09002，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）。久效磷［（1.00 g/L，樣品編號(hào)GBW（E）081142 09002，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）］。乙酰甲胺磷［（1.00 g/L，樣品編號(hào)GBW（E）081143 09001）］。乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉、正己烷（均為分析純，天津化學(xué)試劑有限公司）?；钚蕴啃≈?20～400目，0.25 g，內(nèi)徑0.9 cm）。

2　方法與結(jié)果

2.1供試品的制備

2.1.1對(duì)照品溶液的制備（1）精密稱取敵敵畏、硫磷、二嗪農(nóng)、甲基對(duì)硫磷、殺撲磷、樂(lè)果、馬拉硫磷、氧化樂(lè)果、甲胺磷、乙硫磷、久效磷、乙酰甲胺磷農(nóng)藥對(duì)照品各適量，分別用乙酸乙酯溶解，定容制成每1 mL均含約100μg的單一對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，保存?zhèn)溆谩＃?）混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密量取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備液1.00 mL，置同一20 mL棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀釋定容至刻度，即得。（3）混合對(duì)照品溶液的制備精密量取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用乙酸乙酯定容制成每1 mL含各對(duì)照品0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg的溶液，即得。

2.1.2供試樣品溶液的制備［8］參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》第四部農(nóng)藥殘留量測(cè)定法：分別取自各地區(qū)糧食局購(gòu)買的碎米原料供試樣品約5 g，精密稱定，加無(wú)水硫酸鈉5 g，加入乙酸乙酯50～100 mL，冰浴超聲處理3 min，放置，取上層液濾過(guò)，濾渣加乙酸乙酯30～50 mL，冰浴超聲處理2 min，放置，濾過(guò)，合并兩次濾液，用少量乙酸乙酯洗滌濾紙及殘?jiān)?，與上述濾液合并。取濾液于40℃以下減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取1 mL，置活性炭小柱（120～400目，0.25 g，內(nèi)徑0.9 cm，乙酸乙酯5 mL預(yù)洗），用正己烷-乙酸乙酯（1∶1）混合液5 mL洗脫，收集洗脫液，用氮吹儀吹至近干，精密加入乙酸乙酯1 mL使溶解，即得。

2.2方法學(xué)考察

2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用PC-50 Kromat（30 m×0.32 mm，0.25μm），采用氮磷檢測(cè)器（NPD）檢測(cè)，進(jìn)樣口溫度為230℃，檢測(cè)器溫度為300℃，分流比為10∶1，氫氣壓為0.02 MPa，空氣壓為0.02 MPa，柱頭壓0.05 MPa，尾吹為0.06 MPa，吹掃是20 mL/min，銣珠加熱器電流為2.8A。程序升溫：初始120℃，保持1 min，以每分鐘10℃的速率升至200℃，保持10 min，再以每分鐘5℃的速率升至240℃，保持2 min，然后以每分鐘20℃的速率升至270℃，保持5 min。理論板數(shù)按敵敵畏峰計(jì)算不低于6 000，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。采用“2.1”項(xiàng)下的方法制得供試品溶液和對(duì)照品溶液，分別進(jìn)行色譜測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2.2線性范圍、檢測(cè)限及定量限考察分別精密吸取上述對(duì)照品溶液1.0μL注入氣相色譜儀，測(cè)定其相應(yīng)色譜峰的峰面積。以樣品濃度（ppm）為橫坐標(biāo)，其相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果見(jiàn)表1。

結(jié)果表明：所測(cè)的12種有機(jī)磷農(nóng)藥其濃度在0.1～5.0 ppm，峰面積與相應(yīng)進(jìn)樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，可作為定量分析工作曲線。以3倍信噪比進(jìn)行計(jì)算得12種有機(jī)磷農(nóng)藥的檢出限（LOD）為0.98～6.24 ppb。

2.2.3精密度及回收率考察精密吸取上述對(duì)照品溶液1.0μL，按“2.2.1”項(xiàng)中色譜分析條件，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定5次，將結(jié)果列于表2。根據(jù)表2的結(jié)果，可以得出該法的儀器精密度的RSD在2.62%～6.24%，回收率在87.25%～108.4%，表明為此方法良好。

2.2.4重復(fù)性試驗(yàn)任取一批碎米樣品（湖南邵陽(yáng)），一式6份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備，在添加同一混標(biāo)后重復(fù)測(cè)定5次，其RSD值均在0.73%～5.21%，表明重復(fù)性較好。

以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：所建立的方法可適宜于碎米中有機(jī)磷的殘留量檢測(cè)，此法能快速地測(cè)定碎米中的12種有機(jī)磷的殘留量。

2.2.5樣品測(cè)定稱取所購(gòu)買的5批碎米樣品，照“2.1.2”和“2.2.1”項(xiàng)下的方法制備和測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

3　討論

在稻米種植生產(chǎn)過(guò)程中，特別是在谷粒生長(zhǎng)時(shí)期，如頻繁噴灑各種農(nóng)藥，就會(huì)使得稻谷成品的農(nóng)殘超標(biāo)，嚴(yán)重影響其質(zhì)量與安全性。為此國(guó)家科技部已建立了農(nóng)藥有害殘留物檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)［9-11］。此外國(guó)內(nèi)許多專家學(xué)者也對(duì)不同產(chǎn)地、不同藥材、采用包括氣相色譜［12-16］等不同測(cè)定方法對(duì)有機(jī)磷農(nóng)殘進(jìn)行了研究，取得了系列成果［17-20］。

圖1　有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的系統(tǒng)適應(yīng)性圖譜

表1　有機(jī)磷農(nóng)藥殘留測(cè)定線性范圍考察結(jié)果

有關(guān)有機(jī)磷殘留量的檢測(cè)有許多報(bào)道，然而是否適宜于碎米樣品的農(nóng)殘檢測(cè)未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)用氣相色譜法，采用氮磷檢測(cè)器和石英毛細(xì)管柱，對(duì)12種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量展開(kāi)快速測(cè)定研究。一則確認(rèn)藥典方法對(duì)碎米應(yīng)用的適宜性；二則考察是否需要對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)甲胺磷與乙酰甲胺磷較難分離，如用OV-17柱、SE-30柱、DB-624柱都較難分開(kāi)，但采用Kromat PC-50柱能得到較好分離；氮磷檢測(cè)器的靈敏度較難控制，如電流值大小、氫氣與空氣的比例等對(duì)其影響較大。

據(jù)報(bào)道［21］，我國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：糧食中有機(jī)磷農(nóng)藥允許殘留量為甲胺磷＜0.1 mg/kg，蔬菜、水果中允許殘留量敵百蟲(chóng)＜0.2 mg/kg、樂(lè)果＜1.0 mg/kg，藥品中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于這一限定值。而本次實(shí)驗(yàn)測(cè)定的碎米樣品中均不同程度含有機(jī)磷殘留，而且偏高。

由表3結(jié)果可知，所購(gòu)買的每一批碎米樣品均含有不同種類的、微量的有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留，如果以此等碎米為原料經(jīng)酶解制成的供注射用葡萄糖，不僅大大增加了此工藝的難度，同時(shí)也影響了產(chǎn)品的最終質(zhì)量。故應(yīng)提前考慮碎米原料有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量，用本文建立的快速檢測(cè)方法篩選出合格的碎米原料至關(guān)重要。

表2　精密度與回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表3　樣品農(nóng)藥殘留測(cè)定結(jié)果（ppm）

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（本文編輯 蘇維）

Studies on the High-Speed Determ ination of the 12 Organophosphates Pesticides Residues in the Broken Rice for the Raw M aterial of G lucose Injection

CHEN Aijun1，2，ZHANG Xili2，ZHANG Yunli3，HE Fuyuan2，LIU Shan2，LIU Wenlong2*，LIU Pingan2
（1.Hunan Polytechnic of Environment and Biology，Hengyang，Hunan 421005，China；2.Laboratory of Supramolecular TCM，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410007，China；3.Hunan Schistosomiasis Control Station in Beihekou Anxiang，Changde，Hunan 415600，China）

R917

A

doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2016.05.009

2015-09-28

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（30901971，81270055）；湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（14JJ2110，14JJ7061）。

陳愛(ài)軍，女，講師，研究方向：天然藥物開(kāi)發(fā)及活性成分的研究。

*劉文龍，男，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：dragon5240@126.com。