基質(zhì)金屬蛋白酶-9和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2在哮喘中的表達(dá)及其與CCR3/RANTES信號(hào)軸的關(guān)系*

朱勇，王萍

（1.錦州醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院ICU，遼寧錦州121001；2.錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧錦州121001）

基質(zhì)金屬蛋白酶-9和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2在哮喘中的表達(dá)及其與CCR3/RANTES信號(hào)軸的關(guān)系*

朱勇1，王萍2

（1.錦州醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院ICU，遼寧錦州121001；2.錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧錦州121001）

目的探討基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（ER K1/2）在哮喘中的表達(dá)水平，并進(jìn)一步探討兩者與CCR 3/R ANTES信號(hào)軸的關(guān)系。方法復(fù)制小鼠哮喘模型，分為對(duì)照組、哮喘組、干預(yù)組。3組小鼠處死后進(jìn)行肺泡灌洗，收集肺泡灌洗液，對(duì)各細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，取右肺葉進(jìn)行蘇木精-伊紅染色法染色，免疫熒光法檢測(cè)CCR 3在支氣管上皮細(xì)胞的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)分別用活化正常T細(xì)胞表達(dá)分泌的調(diào)節(jié)蛋白（R ANTES）及R ANTES+SB328437刺激16HBE細(xì)胞，明膠酶譜法檢測(cè)MMP-9的活性；用R ANTES及R ANTES+PD98059（ER K1/2阻斷劑）刺激16HBE細(xì)胞，Western blot檢測(cè)ER K1/2、pER K1/2及MMP-9的表達(dá)水平。結(jié)果體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明成功復(fù)制哮喘小鼠模型。通過蘇木精-伊紅染色法及計(jì)數(shù)肺泡灌洗液中各細(xì)胞數(shù)量發(fā)現(xiàn)，哮喘組小鼠氣道周圍有明顯的炎癥細(xì)胞聚集，而干預(yù)組小鼠氣道周圍的炎癥細(xì)胞明顯減少。通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小鼠支氣管上皮細(xì)胞大量表達(dá)趨化因子CCR 3。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，哮喘組小鼠MMP-9的活性升高，而干預(yù)組MMP-9的活性下降。用外源性R ANTES刺激16HBE細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，R ANTES可以誘導(dǎo)高水平MMP-9的表達(dá)，而加入ER K1/2阻斷劑PD98059后30min，檢測(cè)MMP-9的表達(dá)量明顯降低。結(jié)論在哮喘疾病中，CCR 3/R ANTES信號(hào)軸通過ER K通路來調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)。

基質(zhì)金屬蛋白酶-9；細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2；哮喘；CCR 3/R ANTES

支氣管哮喘是一種以氣道炎癥及氣道重塑為主要病理表現(xiàn)的慢性氣道炎癥性疾病，其病理機(jī)制復(fù)雜，至今仍未完全闡明[1-2]?；|(zhì)金屬蛋白酶是一種鈣、鋅依賴的內(nèi)肽酶超家族，能夠降解膠原、彈性蛋白酶等大部分細(xì)胞外基質(zhì)，而其中降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要限速酶為基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase，MMP-9）。當(dāng)哮喘患者急性發(fā)作時(shí)，不僅炎癥細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生MMP-9，肺組織細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞也大量表達(dá)MMP-9，使其表達(dá)水平明顯上升。其與基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）的平衡作用在氣道壁基質(zhì)沉積和結(jié)構(gòu)重塑中尤為重要。目前研究認(rèn)為，在氣道重塑中MMP-9發(fā)揮關(guān)鍵作用[3-4]?；罨細(xì)胞表達(dá)分泌的調(diào)節(jié)蛋白（regulated upon activation normal T cell expressed and secreted，RANTES）是由淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌的成熟蛋白，屬于CC家族趨化因子成員，可以與CCR1、CCR3、CCR4及CCR5結(jié)合，對(duì)淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞發(fā)揮趨化作用[5-6]，并且RANTES還能協(xié)同抗原共同刺激T淋巴細(xì)胞，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和白介素-2（Interleukin-2，IL-2）的產(chǎn)生，特異性的趨化嗜酸性粒細(xì)胞和記憶性T淋巴細(xì)胞[7-8]。嗜酸性粒細(xì)胞是引起哮喘炎癥反應(yīng)的一種重要的效應(yīng)細(xì)胞[9]。氣道周圍有大量的嗜酸性粒細(xì)胞積聚，其在哮喘的發(fā)病中起重要作用[10]，但是調(diào)節(jié)嗜酸性粒細(xì)胞向炎癥部位募集是一個(gè)復(fù)雜的機(jī)制。因此，筆者通過實(shí)驗(yàn)研究CCR3/RANTES信號(hào)軸的下游通路，為揭示哮喘的發(fā)病機(jī)制及免疫治療提供方向。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)試劑

卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）購自美國Sigma公司，MMP-9（ab38898）和CCR3（ab115285）抗體購自英國Abcam公司，Anti-細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellularsignal-regulatedproteinkinase1/2，ERK1/2）（V1141）購自美國Cell signaling公司，PD98059（S1177）購自美國Selleck公司，SB328437（559406）購自德國默克公司，16HBE細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室凍存細(xì)胞株，Recombinant Human RANTES（14-8970-80）購自美國Ebioscience公司。

1.2小鼠模型的復(fù)制

18只雄性BALB/c小鼠（合格證號(hào)：SYXK-2002-0045）購自江蘇省揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，隨機(jī)分為對(duì)照組、哮喘組及干預(yù)組，哮喘組小鼠于飼養(yǎng)第1、7和21天在大腿內(nèi)側(cè)皮下注射OVA 100μl，第28天時(shí)，將小鼠進(jìn)行乙醚麻醉1mg OVA滴鼻，1次/d，持續(xù)3 d；干預(yù)組小鼠在OVA滴鼻前1h皮下注射SB328437，其余操作同哮喘組；對(duì)照組小鼠注射液體及滴鼻液體全部用生理鹽水代替，處置同哮喘組。

1.3肺泡灌洗液的收集及細(xì)胞計(jì)數(shù)

小鼠麻醉后解剖，暴露氣管后進(jìn)行氣管插管，用5ml生理鹽水進(jìn)行灌洗，灌入后反復(fù)沖洗后回抽，將細(xì)胞懸液離心，進(jìn)行姬姆薩染色，上清液收集后凍存，用于其他檢測(cè)。

灌注后取小鼠的肺臟右葉，多聚甲醛固定后常規(guī)脫水，石蠟包埋，5μm厚病理切片，常規(guī)蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色后封片，于光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.5正常人支氣管上皮細(xì)胞系細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代

細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室凍存細(xì)胞，置于37℃、5%二氧化碳CO2孵箱中培養(yǎng)細(xì)胞，待正常人支氣管上皮細(xì)胞系（normal human bronchial epithelial cell line，HBE）細(xì)胞生長至80%時(shí)進(jìn)行傳代，用磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffer saline，PBS）洗滌細(xì)胞，除去不貼壁的細(xì)胞后加入0.25%胰酶1ml，消化2min后觀察細(xì)胞形態(tài)。當(dāng)細(xì)胞間隙增大、邊緣透亮?xí)r，加入含10%胎牛血清的達(dá)爾伯克必需基本培養(yǎng)基（dulbecco's minimum essential medium，DMEM）終止消化，吹打細(xì)胞成單個(gè)細(xì)胞懸液，離心后棄上清，用10%胎牛血清的DMEM吹打后分至新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

1.6免疫熒光法檢測(cè)16HBE細(xì)胞中CCR3的表達(dá)

取適量16HBE細(xì)胞（本實(shí)驗(yàn)室凍存細(xì)胞株），PBS洗滌后，用4%甲醛固定15 min，PBS洗滌3次，滴加封閉液室溫放置60min，去除多于液體后滴加一抗Anti-CCR3 antibody（1∶200），4℃過夜，PBS洗滌，滴加熒光FITC標(biāo)記Goat Anti-Rabbit IgG（1∶200），室溫孵育60 min，PBS洗滌3次，滴加溴化丙錠復(fù)染，室溫40 min，PBS洗滌3次后熒光顯微鏡（OLYMPUS BX51）下觀察。

1.7Western blot檢測(cè)蛋白含量

將2×105個(gè)16 HBE細(xì)胞均勻種于6孔板中，置于37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞長滿80%時(shí)換不含血清的改良Eagle培養(yǎng)基培養(yǎng)24h，使細(xì)胞生長同步于G0期，在同一時(shí)間點(diǎn)加入RANTES，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞。按照Western blot試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）說明書提取總蛋白，測(cè)定蛋白濃度后，加入十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺（sodium dodecyl sulfate，SDS）上樣緩沖液，加熱5min，電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，加入二抗標(biāo)記，洗滌后曝光。

隆化縣政府應(yīng)打造縣級(jí)融資擔(dān)保平臺(tái)，整合各類涉農(nóng)資金，引入社會(huì)資金，為“政銀企戶?！睋?dān)保基金提供持續(xù)可靠的資金來源，支持當(dāng)?shù)靥厣a(chǎn)業(yè)發(fā)展。以傳統(tǒng)肉牛養(yǎng)殖為主，農(nóng)業(yè)和林果產(chǎn)業(yè)為輔的“一主兩輔”產(chǎn)業(yè)發(fā)展架構(gòu)為基礎(chǔ)，通過提供信貸擔(dān)保、優(yōu)惠貸款的方式給予金融支持；通過技術(shù)和人才引進(jìn)等方式，逐步提升產(chǎn)業(yè)層級(jí)，強(qiáng)化品牌意識(shí)和差異化生產(chǎn)，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品個(gè)性化、多樣化，提升產(chǎn)品附加值，打造具有隆化特色的優(yōu)勢(shì)競(jìng)爭力產(chǎn)業(yè)；借助電商平臺(tái)將供應(yīng)鏈、產(chǎn)業(yè)鏈和產(chǎn)品鏈打通，以縣擔(dān)?；馂榛A(chǔ)，發(fā)展鏈?zhǔn)浇鹑冢蛲óa(chǎn)品銷售渠道，提升現(xiàn)有產(chǎn)業(yè)盈利空間，支持產(chǎn)業(yè)做大做強(qiáng)，形成規(guī)模效應(yīng)，帶動(dòng)更多貧困戶脫貧致富。

1.8明膠酶譜法檢測(cè)MMP-9的活性

取方法1.3時(shí)凍存的上清液16μl，加入2×SDS上樣緩沖液進(jìn)行電泳，結(jié)束后根據(jù)Marker所示位置進(jìn)行切膠，將切下的膠置于洗脫液（2.5%Trion X-100）進(jìn)行搖擺洗脫。每15min更換1次洗脫液，1 h后移至孵育液中孵育30 min，置于37℃孵箱中孵育過夜，結(jié)束后染色1h，用脫色液進(jìn)行脫色，直至出現(xiàn)MMP-9的條帶。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1哮喘模型的鑒定

CCR3阻斷劑SB328437對(duì)小鼠哮喘應(yīng)答的影響。哮喘組小鼠在最后一次OVA刺激后，有明顯的咳嗽、嗆咳、呼吸加快及紫紺等癥狀，而對(duì)照組小鼠無上述表現(xiàn)，干預(yù)組小鼠哮喘發(fā)作的癥狀不明顯。為進(jìn)一步驗(yàn)證哮喘模型復(fù)制是否成功，筆者取3組小鼠的肺組織進(jìn)行HE染色，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組小鼠氣道周圍未見明顯的炎癥細(xì)胞，哮喘組小鼠氣道周圍有明顯嗜酸性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的浸潤，而干預(yù)組小鼠氣道周圍與對(duì)照組相比有少量炎癥細(xì)胞浸潤，但數(shù)量不多，說明哮喘模型復(fù)制成功，并且SB328437影響哮喘中氣道周圍炎癥細(xì)胞的聚集。見圖1。

圖1　小鼠肺臟HE染色（×200）

2.2CCR3在支氣管上皮細(xì)胞的表達(dá)

CCR3在支氣管哮喘中的支氣管上皮細(xì)胞發(fā)揮重要作用。筆者通過免疫熒光的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證支氣管上皮細(xì)胞上確實(shí)有CCR3的表達(dá)。見圖2。

2.3CCR3阻斷劑SB328437對(duì)小鼠哮喘應(yīng)答的影響

繼續(xù)對(duì)小鼠進(jìn)行肺泡灌洗，將灌洗液中的細(xì)胞分別進(jìn)行計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)哮喘組小鼠肺泡灌洗液中的總細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的數(shù)量高于對(duì)照組，說明哮喘急性發(fā)作時(shí)，肺組織內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞聚集；而干預(yù)組小鼠肺泡灌洗液中的總細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞數(shù)量低于哮喘組，說明CCR3阻斷劑SB328437能減少肺組織內(nèi)炎癥細(xì)胞的聚集，進(jìn)而減輕哮喘發(fā)作時(shí)的氣道反應(yīng)。見附表。

附表肺泡灌洗液中各細(xì)胞數(shù)量的比較（n=6，×104/L±s）

附表肺泡灌洗液中各細(xì)胞數(shù)量的比較（n=6，×104/L±s）

注：t1、P1值：對(duì)照組與哮喘組比較；t2、P2值：對(duì)照組與干預(yù)組比較；t3、P3值：哮喘組與干預(yù)組比較

組別細(xì)胞總數(shù)巨噬細(xì)胞嗜酸性細(xì)胞淋巴細(xì)胞中性粒細(xì)胞對(duì)照組42±638±84±16±25±1哮喘組236±3481±18103±2331±1225±5干預(yù)組98±1462±2025±518±48±2 F值128.52210.50288.47917.35670.068 P值0.0000.0010.0000.0000.000 t1值15.5774.57212.6225.89010.978 P1值0.0000.0000.0000.0000.000 t2值4.5032.5652.6722.8161.653 P2值0.0000.0220.0170.0130.119 t3值11.0742.0069.9493.0749.325 P3值0.0000.0630.0000.0080.000

圖2　支氣管上皮細(xì)胞免疫熒光圖（×400）

圖5　Western blot檢測(cè)ERK1/2、pERK1/2、MMP-9的表達(dá)

2.4CCR3阻斷劑SB328437對(duì)MMP-9活性的影響

由于在氣道炎癥和氣道重塑中MMP-9發(fā)揮重要作用，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MMP-9在3組小鼠肺泡灌洗液細(xì)胞中表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，哮喘組小鼠MMP-9的活性升高，而干預(yù)組MMP-9的活性則下降，低于哮喘組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示MMP-9可能為CCR3/ RANTES信號(hào)軸的下游分子。見圖3。

圖3　明膠酶譜檢測(cè)MMP-9活性

2.5RANTES誘導(dǎo)MMP-9的表達(dá)

CCR3通過與RANTES結(jié)合，發(fā)揮對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的趨化作用。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察RANTES對(duì)MMP-9的作用，用外源性RANTES刺激16HBE細(xì)胞，檢測(cè)MMP-9的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)可以誘導(dǎo)高水平的MMP-9表達(dá)，并呈時(shí)間依賴性。見圖4。

圖4　Western blot檢測(cè)MMP-9的表達(dá)

2.6RANTES刺激ERK1/2的表達(dá)

為進(jìn)一步揭示CCR3/RANTES信號(hào)軸在哮喘中的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)用外源性RANTES刺激16HBE細(xì)胞，用Western blot檢測(cè)ERK1/2和pERK1/2的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在外源性的RANTES刺激后，ERK1/2和pERK1/2表達(dá)水平升高，同時(shí)加入ERK1/2阻斷劑PD98059后30min檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MMP-9表達(dá)量降低，提示ERK1/2信號(hào)通路參與CCR3/RANTES信號(hào)軸誘導(dǎo)MMP-9的表達(dá)。見圖5。

3 討論

隨著社會(huì)的發(fā)展，環(huán)境污染逐漸嚴(yán)重，哮喘的發(fā)病率越來越高，而哮喘的治療卻一直停留在應(yīng)用支氣管擴(kuò)張劑或激素治療[11-12]。為揭示哮喘的發(fā)病機(jī)制，尋找治療哮喘的切入點(diǎn)，筆者通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探索哮喘中的信號(hào)通路。雖然在哮喘的發(fā)病過程中，CCR3/RANTES信號(hào)軸的作用已經(jīng)得到證實(shí)[13-14]，但是其確切的機(jī)制仍不清楚，而MMP-9也在哮喘的氣道炎癥和氣道重塑中發(fā)揮著重要作用，所以在本研究中，筆者分別運(yùn)用體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)的方法驗(yàn)證CCR3/ RANTES信號(hào)軸和MMP-9在哮喘中的作用，探討CCR3/RANTES信號(hào)軸及MMP-9的下游信號(hào)分子。

首先，本實(shí)驗(yàn)成功建立哮喘模型，并且通過病理切片和肺泡灌洗液的細(xì)胞計(jì)數(shù)證實(shí)哮喘急性發(fā)作時(shí)，肺組織內(nèi)有大量的炎癥細(xì)胞的聚集，而應(yīng)用CCR3阻斷劑可以減少炎癥細(xì)胞的數(shù)量，提示CCR3/RANTES信號(hào)軸在哮喘的急性發(fā)作中發(fā)揮著重要作用。當(dāng)筆者對(duì)哮喘小鼠進(jìn)行CCR3阻斷劑SB328437治療時(shí)發(fā)現(xiàn)，阻斷CCR3的表達(dá)能明顯抑制MMP-9分子的活性。為進(jìn)一步探索在哮喘中CCR3/RANTES信號(hào)軸的下游分子，筆者在體外用外源性的RANTES刺激16HBE細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)MMP-9的表達(dá)水平明顯增高，而用CCR3阻斷劑SB328437共同刺激時(shí)，MMP-9的表達(dá)量明顯下降，提示MMP-9是CCR3/RANTES信號(hào)軸的下游分子。

ERK1/2是一種可以被IL-4、IL-13、IL-17等細(xì)胞因子激活的分子，并且在哮喘小鼠中，學(xué)者發(fā)現(xiàn)大量活化的ERK1/2，提示ERK1/2可能在哮喘的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮不可或缺的作用。由于在很多細(xì)胞中ERK通路都可以調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)，筆者猜測(cè)在哮喘中CCR3/RANTES信號(hào)軸也是通過ERK通路來調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)[15-16]。在實(shí)驗(yàn)中，筆者發(fā)現(xiàn)RANTES并沒有促進(jìn)ERK1/2的活化，但是增加ERK1/2的表達(dá)，并且當(dāng)用ERK1/2阻斷劑PD98059后，CCR3/RANTES信號(hào)軸作用于MMP-9的表達(dá)明顯受到抑制，提示在哮喘中CCR3/RANTES信號(hào)軸的確是通過ERK通路來調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)，但是在這個(gè)過程中，是否存有其他通路發(fā)揮作用，還需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，筆者發(fā)現(xiàn)在哮喘疾病中，CCR3/RANTES信號(hào)軸通過ERK通路來調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)，為揭示哮喘的發(fā)病機(jī)制及免疫治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（童穎丹編輯）

Expressions of MMP-9 and ERK1/2 in asthmatic mice and their correlations with CCR3/RANTES*

Yong Zhu1，Ping Wang2
（1.ICU，the Third Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University，Jinzhou，Liaoning 121001，China；2.Jinzhou Medical University，Jinzhou，Liaoning 121001，China）

Objective To investigate the expressions of extracellular signal-regulated kinase 1/2（ERK1/2）and matrix metalloproteinase 9（MMP-9）in asthmatic mice and their relationships with CCR3/RANTES. Methods After the establishment of mouse model of asthma，the mice were divided into control group，asthma group and SB328437（a specific CCR3 antagonist）intervention group.The lungs of mice were lavaged with 5ml saline，andthebronchoalveolarlavagefluidwascollectedforcountingthenumberofmacrophages，eosinophils，neutrophils and lymphocytes.The right lungs were isolated and prepared for HE staining，the expression of CCR3 in bronchial epithelial cells was detected by immunofluorescence.The activity of MMP-9 was determined by gelatin zymography after 16HBE cells were stimulated by RANTES and SB328437；then the expressions of ERK1/2，pERK1/2 and MMP-9 were detected by Western blot after the stimulation by RANTES，and RANTES plus PD98059（a specific ERK inhibitor）.ResultsIn vivoexperiment showed that amouse model of asthma was successfully established，and there was obvious accumulation of inflammatory cells around the airway through HE staining and cell counting，while there were fewer inflammatory cells around the airway in the SB328437 intervention group，high expression of CCR3 was found in the bronchial epithelial cells by immunofluorescence.In vitroexperiments revealed that MMP-9 activity significantly increased in the asthma group，while it significantly decreased in the SB328437 intervention group.The exogenetic RANTES induced high expression of MMP-9，while 30 min after adding PD98059，the expression of MMP-9 was decreased.Conclusions The CCR3/RANTES signal axis regulates the expression of MMP-9 through ERK pathway in asthma.

MMP-9；ERK1/2；asthma；CCR3/RANTES

R 256.12

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.17.006

1005-8982（2016）17-0029-05

2016-01-12

遼寧省科技廳聯(lián)合基金（No：2015020355）

王萍，E-mail：983441262@qq.com