炎癥標(biāo)志物TNF-α、hs-CRP在肝癌患者預(yù)后評(píng)估中的作用

袁林，沈世強(qiáng)

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·論著 基礎(chǔ)研究·

炎癥標(biāo)志物TNF-α、hs-CRP在肝癌患者預(yù)后評(píng)估中的作用

袁林1，沈世強(qiáng)2

（1.江漢大學(xué)附屬醫(yī)院 普通外科，湖北 武漢 430014；2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院 普通外科，湖北 武漢430030）

目的 探討肝細(xì)胞癌（HCC）患者手術(shù)前后外周血腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和高敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）檢測(cè)的臨床意義。方法 檢測(cè)201例HCC患者手術(shù)前后及70例健康對(duì)照者TNF-α和hs-CRP的水平，分析TNF-α和hs-CRP水平與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 HCC患者術(shù)前TNF-α和hs-CRP水平顯著高于健康對(duì)照者（P＜0.05），手術(shù)1周后TNF-α和hs-CRP水平較術(shù)前顯著下降（P＜0.05）。術(shù)前TNF-α和hs-CRP水平與HCC的Edmondson分級(jí)、TNM分期、腫瘤的大小、有無門靜脈癌栓、有無腫瘤包膜密切相關(guān)（P＜0.05）。hs-CRP水平還與有無腹水明顯相關(guān)（P＜0.05）。當(dāng)確診為HCC復(fù)發(fā)時(shí)，TNF-α和hs-CRP水平也明顯高于術(shù)后水平（P均＜0.01）。結(jié)論 術(shù)前TNF-α和hs-CRP水平與HCC臨床病理特征有關(guān)，可作為HCC預(yù)后和復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)因子。［關(guān)鍵詞］ 炎癥標(biāo)志物；腫瘤壞死因子-α；高敏C-反應(yīng)蛋白；癌，肝細(xì)胞

原發(fā)性肝癌（HCC）是危害人類健康的常見消化道惡性腫瘤之一，其致死率位居所有腫瘤的第3位［1］。治療首選手術(shù)切除和肝臟移植，但因該病發(fā)展隱匿，早期診斷困難，且術(shù)后的復(fù)發(fā)率高［2-3］。即便是小肝癌行規(guī)范的肝部分切除術(shù)后5年生存率仍僅為55％左右，甚至更低。因而，探索HCC術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)因子，尤其是尋找早期肝癌的預(yù)后因子是近年來國(guó)內(nèi)外專家關(guān)注的熱點(diǎn)。有研究顯示，惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與炎癥反應(yīng)有著密切關(guān)系，而且肝癌的病理起源與肝細(xì)胞持續(xù)存在的HBV病毒等感染并誘發(fā)慢性炎癥反應(yīng)有關(guān)［4］。盡管已經(jīng)有不少研究證實(shí)腫瘤可以誘發(fā)機(jī)體的炎癥反應(yīng)［5］，但具體機(jī)制尚未探明。高敏C-反應(yīng)蛋白（high-sensitive C-reactive protein，hs-CRP）和腫瘤壞死因子（TNF-α）是重要的炎癥反應(yīng)性細(xì)胞因子，有關(guān)TNF-α、hs-CRP在HCC臨床的研究尚不多。本研究測(cè)定HCC患者術(shù)前、術(shù)后血清TNF-α、hs-CRP水平，旨在進(jìn)一步探索機(jī)體炎癥狀態(tài)對(duì)肝癌預(yù)后的意義。

1 資料和方法

1.1一般資料

研究對(duì)象取自2007年12月至2015年6月間在本院因HCC行根治性切除術(shù)的患者235例，其中34例接受姑息性手術(shù)或者術(shù)后因并發(fā)癥死亡或者恢復(fù)期臨床癥狀未改善或者數(shù)據(jù)不完整，故將此34例病例剔除，最終入組患者201例。其中男109例，女92例，年齡27～78歲，平均51.2歲。HCC診斷以UICC［6］為標(biāo)準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均為初治病例，無明顯肝硬化表現(xiàn)，肝纖維化四項(xiàng)指標(biāo)正常，術(shù)前均未接受過任何藥物治療或放療。同時(shí)收集同期健康體檢者70例作為對(duì)照，其中男41例，女29例，年齡25～64歲，平均47.1歲。健康體檢者血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血脂、肝腎功能均正常范圍。

1.2血清樣本收集與處理

患者手術(shù)前與手術(shù)后第7～9天，空腹8～12 h后于清晨取肘靜脈血立即放入4 ℃冰箱靜置20 min。4 ℃ 4 000 r/min離心15 min分離血清。將血清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，放入-80 ℃冰箱保存。檢測(cè)前取出血清樣品，冰上融化后，4 ℃ 12 000 r/min離心10 min，除去血清中的不溶物。AFP采用放射免疫法，TNF-α用ELISA法測(cè)定，hs-CRP用透射免疫比濁法測(cè)定，所有操作嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。

1.3隨訪

HCC手術(shù)患者術(shù)后定期隨訪，術(shù)后第1年每個(gè)月1次，第2年后每2個(gè)月1次，檢查內(nèi)容包括外周血免疫炎癥因子TNF-α和hs-CRP，AFP、肝功能測(cè)定和影像學(xué)檢查（肝臟B超、CT、MRI或血管造影等），當(dāng)AFP水平異常增高時(shí)，則隨訪改為每個(gè)月1次。隨訪采用門診復(fù)查、電話及書信進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1HCC患者血清TNF-α、hs-CRP、AFP在手術(shù)前后及健康對(duì)照者中的比較

201例HCC患者手術(shù)前、后，以及健康對(duì)照者的血TNF-α、hs-CRP和AFP的濃度見表1。HCC患者術(shù)前各指標(biāo)均高于手術(shù)后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。HCC患者術(shù)前各指標(biāo)也高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；術(shù)后TNF-α、hs-CRP稍高于健康對(duì)照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），AFP在術(shù)后與健康對(duì)照無明顯差異（P＞0.05）。

表1 健康對(duì)照者及HCC患者手術(shù)前后TNF-α、hs-CRP和AFP值的變化（±s）

表1 健康對(duì)照者及HCC患者手術(shù)前后TNF-α、hs-CRP和AFP值的變化（±s）

與術(shù)前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與健康對(duì)照比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別例數(shù)TNF-α（pg/mL）hs-CRP（mg/L） AFP（ng/mL）HCC術(shù)前20143.53±13.32##6.84±1.26##569.57±43.26#HCC術(shù)后20117.12±5.35*2.78±1.56* 57.45±52.44**健康對(duì)照27017.68±1.431.48±1.32 55.71±52.57

2.2HCC患者術(shù)前血清TNF-α、hs-CRP與臨床病理特征的關(guān)系

結(jié)果顯示，HCC患者術(shù)前血清TNF-α水平與HCC臨床TNM分期及Edmondson分級(jí)顯著相關(guān)，分期較晚及低分化患者的血清TNF-α濃度較分期較早及分化較好的患者明顯升高（P＜0.01）；此外TNF-α水平還與腫瘤大小、有無門靜脈癌栓、腫瘤有無包膜明顯相關(guān)（P＜0.05）；TNF-α水平與年齡、性別及有無腹水無明顯相關(guān)（P＞0.05）。術(shù)前hs-CRP水平與HCC腫瘤大小及臨床Edmondson分級(jí)顯著相關(guān)，腫瘤≥5 cm及低分化患者的血清hs-CRP濃度較腫瘤＜5 cm及分化較好的患者明顯升高（P＜0.01）；此外，hs-CRP水平還與TNM分期、有無門靜脈癌栓、腫瘤有無包膜、有無腹水明顯相關(guān)（P＜0.05）。術(shù)前AFP水平僅與TNM分期密切相關(guān)（P＜0.05）。見表2。

2.3術(shù)前和術(shù)后TNF-α、hs-CRP水平與AFP水平的相關(guān)性

相關(guān)分析表明，HCC術(shù)前TNF-α、hs-CRP水平與AFP水平呈正相關(guān)（r=3.223，P＜0.05；r=4.432，P＜0.01）；而在術(shù)后沒有相關(guān)性（分別為r=0.298，P＞0.05；r=0.763，P＞0.05）。

表2　HCC臨床及病理重要指標(biāo)與TNF-α、hs-CRP的關(guān)系

2.4隨訪情況

隨訪截止到2015年10月30日，隨訪時(shí)間為3～97個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為55.2個(gè)月。其中有29例失訪。最后確診為HCC術(shù)后復(fù)發(fā)的患者102例，其中男59例，女43例，年齡25～66歲，平均48歲。復(fù)發(fā)時(shí)，AFP陽(yáng)性（≥100 ng/mL）69例，AFP陰性（＜20ng/mL）33例；復(fù)發(fā)腫瘤與原發(fā)灶位于一側(cè)半肝內(nèi)46例，位于對(duì)側(cè)半肝或全肝受累38例，位于同一肝段內(nèi)18例；合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移42例。復(fù)發(fā)腫瘤單個(gè)或多個(gè)結(jié)節(jié)相加直徑為1.3～6.3 cm，平均2.9 cm；復(fù)發(fā)時(shí)間4～58個(gè)月，平均13.9個(gè)月。

確診復(fù)發(fā)的患者，血清TNF-α、hs-CRP均明顯高于術(shù)后和健康對(duì)照組（P＜0.05，P＜0.01），AFP高于術(shù)后和健康對(duì)照，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。另38例術(shù)后復(fù)發(fā)的HCC患者，術(shù)后監(jiān)測(cè)AFP一直為陰性，影像學(xué)檢查已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肝占位病變，而TNF-α水平已在影像學(xué)檢查結(jié)果陽(yáng)性前（1.31±0.22）個(gè)月、hs-CRP水平在前（1.67±0.43）個(gè)月已明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討論

臨床研究顯示，可能有15％左右的惡性疾病常常伴隨著炎癥反應(yīng)的發(fā)生，其中長(zhǎng)期的慢性炎癥是引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的主要病因［7］。同時(shí)惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲鄰近正常組織和腫瘤生長(zhǎng)過程中發(fā)生壞死均會(huì)對(duì)周圍組織及細(xì)胞造成不同程度的損傷，并釋放相應(yīng)的炎性介質(zhì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的發(fā)生，反過來會(huì)促使或加劇惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲，進(jìn)而導(dǎo)致預(yù)后不良［8］。當(dāng)然此時(shí)發(fā)生的炎癥反應(yīng)與機(jī)體微生物感染時(shí)發(fā)生的炎癥狀態(tài)并不一致，常常僅表現(xiàn)為某些炎癥因子的改變，稱為微炎癥狀態(tài)。CRP主要是肝臟在IL-1和IL-6刺激下產(chǎn)生的，在正常人血液中含量極微，隨著一些高靈敏度檢測(cè)方法的出現(xiàn)，低水平的CRP亦可被檢測(cè)出來，被稱為hs-CRP。TNF-α為一種多肽類物質(zhì)，主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是參與機(jī)體多種生理與免疫過程的重要介質(zhì)。hs-CRP和TNF-α是評(píng)價(jià)腫瘤患者炎癥反應(yīng)程度的常用指標(biāo)［9］。但有關(guān)外周血hs-CRP及TNF-α在HCC中的研究尚少有報(bào)道。

本研究就201例HCC患者術(shù)前、術(shù)后和70例健康對(duì)照者血TNF-α、hs-CRP檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行分析研究，術(shù)前TNF-α、hs-CRP均高于手術(shù)后和健康者（P＜0.05），而術(shù)后TNF-α、hs-CRP稍高于健康對(duì)照組（P＞0.05），表明HCC患者存在明顯的炎癥反應(yīng)，而術(shù)后的微炎癥狀態(tài)可能與手術(shù)損傷后機(jī)體的反應(yīng)有關(guān)，腫瘤的炎癥狀態(tài)明顯強(qiáng)于后者，也有可能這種強(qiáng)烈的微炎癥狀態(tài)是惡性腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的原因。在影像學(xué)確診復(fù)發(fā)時(shí)患者血清TNF-α、hs-CRP明顯升高，表明TNF-α、hs-CRP對(duì)HCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有預(yù)測(cè)意義，但取決于其敏感性與特異性的綜合性能，其臨床應(yīng)用價(jià)值尚有待更多實(shí)驗(yàn)認(rèn)證與臨床實(shí)踐的證實(shí)。

進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，TNF-α、hs-CRP水平均與Edmandson分級(jí)、TMN分期、腫瘤大小、有無門靜脈癌栓、有無腫瘤包膜相關(guān)（P＜0.05）；且hs-CRP與腫瘤大小相關(guān)性較TNF-α更為明顯，可能是CRP直接由肝細(xì)胞產(chǎn)生，腫瘤的大小對(duì)正常肝細(xì)胞的代謝直接影響的結(jié)果。術(shù)前TNF-α與有無腹水無明顯相關(guān)性，而hs-CRP與后者有相關(guān)性（P＜0.05），由此推測(cè)，一方面，HCC患者存在微炎癥狀態(tài)，或可將TNF-α、hs-CRP作為HCC患者微炎癥狀態(tài)監(jiān)測(cè)指標(biāo)及預(yù)后判定因子；另一方面，HCC微炎癥狀態(tài)時(shí)，TNF-α更傾向于反應(yīng)HCC患者全身微炎癥狀態(tài)，而hs-CRP傾向于反應(yīng)HCC患者肝組織局部微炎癥狀態(tài)。

AFP是HCC的重要標(biāo)志物，它在HCC組織及患者血液中的高表達(dá)以及AFP作為HCC的輔助診斷指標(biāo)的重要地位已被公認(rèn)［10］，但仍有30％～40％的原發(fā)性HCC患者血清AFP呈陰性。因此，對(duì)這類患者尋求敏感的血清診斷標(biāo)志物［11］，具有重要的臨床意義。本研究在檢測(cè)HCC患者手術(shù)前后TNF-α、hs-CRP的同時(shí)，也檢測(cè)了血AFP的變化，并對(duì)三者相關(guān)性進(jìn)行分析，認(rèn)為AFP、TNF-α、hs-CRP或均可視為HCC的血清標(biāo)志物，對(duì)HCC的初步診斷與復(fù)發(fā)認(rèn)定，尤其對(duì)AFP陰性HCC患者起到輔助診斷作用。

對(duì)術(shù)前AFP水平與HCC臨床病理特征的分析中還發(fā)現(xiàn)，術(shù)前AFP水平僅與TNM分期密切相關(guān)（P＜0.05），表明在原發(fā)性HCC復(fù)發(fā)過程中，外周血免疫炎癥因子的變化更早于HCC細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化，這與機(jī)體細(xì)胞基礎(chǔ)代謝結(jié)構(gòu)理論相一致，TNF-α、hs-CRP較之于AFP更能好地預(yù)測(cè)HCC的復(fù)發(fā)和預(yù)后。

綜上所述，本研究認(rèn)為HCC患者存在全身和HCC組織局部炎癥反應(yīng)，兩者均可促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲。進(jìn)一步研究HCC微炎癥狀態(tài)形成的原因和機(jī)制，或可為HCC的早期診斷、治療與復(fù)發(fā)預(yù)防提供新的思路與途徑。

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（本文編輯：魯翠濤）

The prognostic role of serum inflammatory markers TNF-α and hs-CRP in hepatocellular carcinoma

YUAN Lin1， SHEN Shi-qiang2.1Department of General Surgery， The Affiliated Hospital of Jianghan University， Wuhan 430014， China；2Department of General Surgery， Renmin Hospital of Wuhan University， Wuhan 436000， China

Objective To study the clinical significance of pre- and post-operative serum inflammatory parameters tumor necrosis factor-alpha （TNF-α） and high-sensitive C-reactive protein （hs-CRP） in hepatocellular carcinoma （HCC） patients. Methods The levels of TNF-α and hs-CRP in 201 HCC patients were tested by enzyme linked immunoabsorbent assay （ELISA） before and after operation as well as in 70 healthy controls. The correlation of TNF-α and hs-CRP with clinical and pathological factors was analyzed. Results The levels of TNF-α and hs-CRP in HCC patients before operation were significantly higher than those in controls， which declined significantly 1 week after operation （P＜0.05）. The TNF-α and hs-CRP levels before operation showed significant correlation with Edmondson grade， TNM stage， tumor size， the carcerous thrombi within the portal vein，and the capsule of carcinoma （P＜0.05）， hs-CRP level also correlated with the ascites （P＜0.05）. Conclusion The levels of TNF-α and hs-CRP in HCC patients before operation have close relationship with the clinicopathological characteristics， which may be predictive factors for prognosis and recurrence of HCC.

inflammatory markers； tumor necrosis factor-alpha （TNF-α）； high-sensitive C-reactive protein（hs-CRP）； hepatocellular carcinoma （HCC）

R735. 7

A DOI:10.11952/j.issn.1007-1954.2016.05.011

2016-01-08

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳計(jì)劃課題（Z2014433）；柳州市培養(yǎng)新世紀(jì)學(xué)術(shù)和技術(shù)帶頭人專項(xiàng)資金資助項(xiàng)目（枊人［2000］56號(hào)）。

袁林（1972-），男，湖北武漢人，主任醫(yī)師，碩士。