血清TK1水平檢測在非小細胞肺癌診斷中的應用

王　彬，李國鋒，王　健，王光鎖，譚禮萍，岳化葵，湯倩華

(廣東省深圳市人民醫(yī)院：1.檢驗科；2.胸外科；3.科教科　518020)

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·論著·

血清TK1水平檢測在非小細胞肺癌診斷中的應用

王彬1，李國鋒2，王健2，王光鎖2，譚禮萍3，岳化葵1，湯倩華1

(廣東省深圳市人民醫(yī)院：1.檢驗科；2.胸外科；3.科教科518020)

目的研究血清胸苷激酶1(TK1)水平變化對小細胞肺癌(NSCLC)患者臨床診斷價值。方法采用免疫印跡-增強化學發(fā)光法檢測129例非小細胞肺癌(NSCLC)住院患者及90例健康查體者血清TK1水平，并對76例NSCLC患者手術(shù)前后血清TK1水平變化狀況進行比較。結(jié)果NSCLC患者血清TK1水平明顯高于健康對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義；NSCLC血清TK1水平 Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis,兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；手術(shù)后30 d NSCLC患者血清TK1水平明顯低于手術(shù)前，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001)；血清TK1水平與NSCLC患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.01)，與病理類型、年齡、性別、是否吸煙均無相關(guān)性(P>0.05)；NSCLC患者TK1檢測具有較高敏感度與特異性。結(jié)論血清TK1水平檢測對NSCLC患者病情診斷有重要臨床意義。

胸苷激酶1；非小細胞肺癌；診斷

原發(fā)性支氣管肺癌簡稱肺癌，是起源于支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤。肺癌新發(fā)病人數(shù)1.6萬/年，死亡人數(shù)140萬/年，發(fā)病率與病死率均高居全世界癌癥首位[1]。肺癌按組織病理學類型分為非小細胞肺癌(NSCLC)與小細胞肺癌，其中NSCLC占總肺癌病例數(shù)的近85%,嚴重威脅人類的幸福健康[2]。在我國，據(jù)統(tǒng)計,既往30年內(nèi)記錄在案(不包括眾多未登記失聯(lián)病例)肺癌死亡病例已增加了464.8%，目前人數(shù)還在逐年增長[3]。究其原因，早期診斷困難致使預后較差等值得廣泛關(guān)注，而NSCLC一旦發(fā)現(xiàn)并開始治療時，常已達晚期，錯過最佳治療時期，故雖再經(jīng)多學科治療，仍然預后較差。而腫瘤標志物胸苷激酶1(TK1)水平在腫瘤組織中或血清中的增加和腫瘤細胞DNA的合成相一致，故其在臨床上NSCLC的輔助診斷中引起了廣泛興趣[4]。本文主要通過檢測在NSCLC患者不同臨床特點下的外周血TK1水平并相互對比，研究TK1在NSCLC患者臨床診斷中的應用，并對手術(shù)療效等方面做一定的評估，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料NSCLC組129例，為2014年6月至2015年6月本院胸外科住院患者，均結(jié)合影像學特征、組織活檢或胸腔積液細胞學檢查等明確診斷為NSCLC，病理標本取材方法不一，有通過手術(shù)、穿刺、纖維支氣管鏡夾取等。其中NSCLC組男78例，女51例，年齡27～83歲，中位年齡61歲；并按國際抗癌聯(lián)盟(ULCC)制定的肺癌最新分期標準進行分期，其中屬于Ⅳ期的有39例，Ⅲ期的有42例，Ⅱ期的有20例，Ⅰ期的有14例，Tis期的有14例；NSCLC患者中尚伴有81例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；按病理類型分，其中68例為腺癌，40例為鱗癌，21例為大細胞肺癌；129例NSCLC患者中76例選擇了手術(shù)治療。對照組90例為本院健康查體者，其中52例是男性，其余均為女性，其年齡跨度大，25～90歲不等，中位年齡59歲，均無白血病、淋巴瘤等血液病，無嚴重心腦血管疾病及糖尿病等病史，肝功能、腎功能等檢測大致正常。

1.2方法

1.2.1標本采集晨起空腹時抽取靜脈血2 mL，3 h內(nèi)以3 000 r/min離心8 min，分離血清，分裝入2個離心管(分別用于初次檢測和復檢)，放入-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2檢測方法血清TK1檢測方法為免疫印跡增強化學發(fā)光法，檢測儀器為CIS-1化學發(fā)光數(shù)字成像分析儀，試劑盒與儀器均由深圳華瑞同康生物技術(shù)有限公司提供。試驗步驟由專人嚴格按說明書進行操作。具體步驟如下：(1)吸取標準品及待測血清各2 mL點樣到硝酸纖維素膜上，室溫下自然晾干；(2)用配置的TBS振蕩洗膜3次，用Tris緩沖液配制的6%脫脂奶粉封閉1 h后去除封閉液；(3)加入適量的TK1抗體，室溫振蕩反應2 h；(4)用TBS振蕩漂洗3次，加入生物素化二抗，室溫振蕩反應40 min，洗滌同前；(5)加入鏈霉親和素辣根過氧化物酶復合物，室溫下振蕩反應1 h；(6)洗滌，加ECL發(fā)光試劑，過膜浸濕，精確反應1 min，將膜片用吸水紙吸干；(7)將膜放入CIS 1型化學發(fā)光數(shù)字成像分析系統(tǒng)內(nèi)進行分析。以標準品的TK1水平為橫坐標，測量數(shù)據(jù)為縱坐標作標準曲線，根據(jù)標準曲線可計算出待測血清的TK1水平。 健康對照組以及NSCLC組于治療前檢測血清TK1水平，其中76例NSCLC手術(shù)患者分別于手術(shù)后(7±1)和(30±2)d再次檢測血清TK1水平。

1.2.3觀察指標TK1>2.0 pmol/L判定為陽性[5]。

2　結(jié)　　果

2.1各病期NSCLC患者血清TK1水平與健康對照組的比較研究結(jié)果表明，129例NSCLC患者血清TK1水平顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其中Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期血清TK1水平高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，Tis期血清TK1水平與健康對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。血清中TK1水平Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis，各病期之間比較，Tis和Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，結(jié)果表明NSCLC患者血清TK1水平與TNM分期密切相關(guān)，結(jié)果見表1。

表1　　各病期NSCLC患者血清TK1水平與健康對照組的比較

注：與健康對照組比較,*P<0.05,#P>0.05;與Ⅰ+Ⅱ比較，△P<0.05;與Ⅲ比較，▲P<0.05;與Ⅳ比較，○P<0.05。

2.2NSCLC患者血清中TK1水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理類型的關(guān)系淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者血清TK1水平明顯大于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組患者，差異有統(tǒng)計學意義(F=0.872，t=-7.989,P=0.000)。鱗癌、腺癌、大細胞癌NSCLC患者之間血清TK1水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明NSCLC患者血清TK1水平同淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)，同病理類型無關(guān)。結(jié)果見表2。

2.376例NSCLC組術(shù)前、術(shù)后7 d與術(shù)后30 d血清中TK1水平比較129例NSCLC組患者中有76例患者進行了手術(shù)治療，本研究隨訪該76例患者手術(shù)后7和30 d的血清TK1水平，詳見圖1。

表2　　NSCLC患者血清中TK1水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理類型的關(guān)系

注：與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較，*P<0.01；與腺癌組比較，△P>0.05；與大細胞癌組比較，▲P>0.05；與鱗癌組比較，○P>0.05。

圖1　76例NSCLC患者術(shù)前、術(shù)后7 d與術(shù)后30 d血清中TK1水平比較

從圖1中看出，術(shù)后1周血清TK1水平[(2.798±0.678)pmol/L]比術(shù)前[(2.268±0.356)pmol/L]略高，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；術(shù)后30 d血清中TK1明顯下降[(1.023±0.489)pmol/L]，與術(shù)前相比，差異有統(tǒng)計學意義(F=7.287,t=-4.851,P=0.001)。結(jié)果表明外周血TK1水平對術(shù)后療效監(jiān)測具有重要價值。

2.4NSCLC患者血清腫瘤標志物TK1水平的敏感度與特異度NSCLC患者外周血TK1檢測的敏感度與特異度顯示，靈敏度=99/(99+30)=76.7%,假陰性率=30/(99+30)=23.3%;特異度=78/(12+18)=86.7%;假陽性率=12/(12+78)=13.3%。提示NSCLC患者血清TK1水平監(jiān)測具有較高的靈敏度與特異度，在一定程度上可輔助臨床診斷NSCLC。

2.5NSCLC患者血清TK1水平與NSCLC患者年齡、性別及是否吸煙的關(guān)系見表3。

表3　　NSCLC患者血清TK1水平與NSCLC患者基本情況的關(guān)系

注：與≥60歲年齡組比較，#P>0.05；與女性組比較，△P>0.05；與吸煙組比較，○P>0.05。

結(jié)果表明，血清TK1水平與NSCLC患者年齡、性別及是否吸煙均無相關(guān)性(P>0.05)，具有一定可信度。

3　討　　論

腫瘤標志物是由惡性增殖細胞的細胞DNA轉(zhuǎn)錄、翻譯并合成分泌的，部分已被人們研究利用的具有惡性腫瘤診斷與療效監(jiān)測作用的1種特殊的外周血物質(zhì)。全世界已發(fā)現(xiàn)的惡性腫瘤數(shù)不勝數(shù)，而肺癌是當中最常見的死亡原因。臨床上意欲提高肺癌患者生存率，則必須依賴于早期診斷與早期治療。當前綜合運用多種可行性的措施，包括了實驗室顯微鏡下病理診斷、特征性的影像學診斷，再結(jié)合其臨床典型癥狀與體征等，期待能盡早分辨良、惡性腫瘤并及時制訂下一步治療方案。但是對于部分復雜肺癌，影像學表現(xiàn)特異性不足，而病理學取材不易或取材陽性率有限。外周血腫瘤標志物檢測具有快速、準確、不良反應小、經(jīng)濟等優(yōu)點。故其作為一類基本無創(chuàng)而有效的檢查，可以輔助肺癌的精確、全面診斷。本研究NSCLC患者血清中TK1水平明顯高于健康對照組，其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示其在NSCLC的臨床診斷中具有重要參考意義。這一研究結(jié)果與許多其他學者的研究結(jié)果基本一致[6-8]。血清中TK1水平Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis，各病期之間比較，Tis和Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者血清TK1水平明顯大于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組患者，差異有統(tǒng)計學意義(F=0.872,t=-7.989,P=0.000)；結(jié)果表明NSCLC患者血清TK1水平與TNM分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。對于本研究中，TK1在Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ期逐漸升高，在Ⅳ期反而降低，究其原因可能為腫瘤Ⅰ～Ⅲ期，增殖惡性程度升高，TK1升高，但到達Ⅳ期，由于能量供養(yǎng)不足造成的增殖放緩，及癌巢內(nèi)釋放蛋白水解等因素，造成TK1反而降低，張國慶等[9]也有相似的報道。

若腫瘤切除較為徹底或者完全清除，則腫瘤標志物水平多下降，提示治療效果佳；若治療后腫瘤尚有殘留較多或腫瘤為多發(fā)性腫瘤難以清除完全，則腫瘤標志物水平多維持較高水平。TK1是惡性增殖細胞DNA合成的關(guān)鍵酶，其作為1種高度特異性與敏感性的腫瘤標志物，可檢測NSCLC癌細胞活性，故亦可借其判定NSCLC癌細胞的增殖度及該病的治療療效[10-11]。本研究76例NSCLC患者術(shù)后7 d血清中TK1比術(shù)前略高，差異無統(tǒng)計學意義；而術(shù)后30 d血清中TK1明顯下降，與術(shù)前相比，差異有統(tǒng)計學意義(F=7.287,t=-4.851,P=0.001)?？赡茉蚴?術(shù)后1周并發(fā)感染未完全恢復;手術(shù)促使癌細胞釋放入血，導致術(shù)后血清TK1水平短暫升高；腫瘤切除后，隨著腫瘤細胞增殖活動停止，血清中TK1水平逐漸恢復正常。這提示NSCLC患者血清TK1水平檢測對于手術(shù)療效監(jiān)測方面有重要參考價值。

TK1與細胞活躍度有關(guān)，在多種人類常見的初發(fā)癌癥中,TK1在患者外周血中的水平均明顯升高，有著較高的陽性檢出率，有學者做過研究，其陽性率65%～95%[12]。本文研究結(jié)果顯示，TK1真陽性率為76.7%，具有較高可信度；TK1真陰性率為86.7%，說明其為1項具有高度特性的腫瘤標志物，與部分學者研究結(jié)果類似[6,13]。

肺癌有腺癌、鱗狀細胞癌、小細胞癌、大細胞癌、腺鱗癌、類癌、支氣管腺體癌等。我國近年來肺腺癌發(fā)病率漸漸超過鱗癌，躍居最常見的病理分類[14]。本文中鱗癌、腺癌、大細胞癌NSCLC患者之間血清TK1水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明NSCLC患者血清TK1水平同病理類型無關(guān)。

綜上可知，血清TK1表達水平與NSCLC患者臨床表現(xiàn)、病理分期等相關(guān)，血清TK1檢測對NSCLC早期診斷、指導治療、療效監(jiān)測等有重要的臨床意義。

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Application of serum TK1 levels in diagnosis of non small cell lung cancer

WANGBin1,LIGuofeng2,WANGJian2,WANGGuangsuo2,TANLiping3,YUEHuakui1,TANGQianhua1

(1.DepartmentofLaboratory,ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China;2.DepartmentofThoracicSurgery,ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China;3.DepartmentofScienceandEducation，ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China)

ObjectiveTo investigate the variation of serum Thymidine Kinase 1(TK1) in patients with non-small cell lung cancer(NSCLC) and its clinical value．MethodsSerum TK1 level of 129 patients with NSCLC and 90 healthy volunteers were measured by sensitive chemiluminescence dot-blot assay.The serum TK1 level variation of 76 patients with NSCLC were compared before and after operation.ResultsSerum TK1 level of NSCLC patients were significantly higher than the level of healthy control group(P<0.05).Serum TK1 level in Stage Ⅲ>Stage Ⅳ>Stage Ⅰ+Ⅱ>Stage Tis,comparison between each other was of statistical difference(P<0.05).The serum TK1 level of NSCLC patients at 30th day after surgery was remarkably lower than which before surgery(P=0.001,P<0.01).The serum TKl level was correlated with lymphatic metastasis(P<0．01),but not with other factors such as pathology types,age,sex and smoking.The serum TK1 measurement was high sensitivity and specificity to the diagnosis of NSCLC.ConclusionThe serum TK1 level detection has important clinical significance in diagnosis and evaluation of NSCLC patients．

thymidine kinase 1；non-small cell lung cancer；diagnosis

王彬，女，主管技師，主要從事臨床醫(yī)學檢驗及免疫學檢驗方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.18.022

A

1673-4130(2016)18-2563-03

2016-04-17

2016-06-23)