5α還原酶抑制劑對前列腺增生組織內雌激素受體、雄激素受體表達的影響

盧湧湧　黃　航　李　鵬　武志剛　吳秀玲

1.溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院泌尿外科，浙江溫州325000；2.溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科，浙江溫州325000

5α還原酶抑制劑對前列腺增生組織內雌激素受體、雄激素受體表達的影響

盧湧湧1黃航1李鵬2武志剛1吳秀玲2

1.溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院泌尿外科，浙江溫州325000；2.溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科，浙江溫州325000

目的研究5α還原酶抑制劑（5α-RI）對良性前列腺增生（BPH）患者前列腺組織內雄激素受體（AR）、雌激素受體α（ERα）、雌激素受體β（ERβ）表達的影響。方法選擇100例BPH患者隨機分為4組，每組25例，對照組口服維生素C 0.1 g，1次/d，非那雄胺組口服非那雄胺5 mg，1次/d，度他雄胺組口服度他雄胺治療0.5 mg，1次/d，依立雄胺組口服依立雄胺5 mg，2次/d，治療8周后行經(jīng)尿道前列腺電切術，采用免疫組化方法觀察術后前列腺組織內AR、ERα、ERβ的表達情況。結果采用IHS法對免疫組化結果進行半定量分析，其中AR表達方面，對照組（10.36±1.63）、非那雄胺組（9.08±1.71）、度他雄胺組（9.12±2.42）、依立雄胺組（7.92±2.36）之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且依立雄胺組下降更為顯著。ERα表達各組間變化不明顯。與對照組ERβ表達（5.24±1.20）比較，度他雄胺組（6.52±1.57）、依立雄胺組（6.76±1.55）表達顯著增強，非那雄胺組（5.60±1.04）表達有所增強，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論5α-RI可抑制BPH患者前列腺組織內的AR表達，增強ERβ表達，對ERα表達影響不大，不同5α-RI對AR、ERα、ERβ表達的影響程度有差異。

5α還原酶抑制劑；雌激素受體；雄激素受體；前列腺增生

［Abstract］Objective To explore the effects of 5α reductor inhibitors（5α-RI）on the expression of androgen receptor，estrogen receptor α（ERα）and estrogen receptor β（ERβ）in the prostatic tissues in the patients with benign prostatic hyperplasia（BPH）.Methods A total of 100 patients with BPH were randomly assigned to four groups，with 25 patients in each group.The control group was orally given vitamin C of 0.1 g，once a day.Finasteride group was orally given finasteride of 5 mg，once a day.Dutasteride group was orally given dutasteride of 0.5 mg，once a day.Epristeride group was orally given epristeride of 5 mg，twice a day.Prostate electrocision was performed via urethra 8 weeks after the treatment，and the expression of AR，ERα，and ERβ in the prostatic tissues was observed after the surgery via immunohistochemistry.Results IHS method was applied to conduct semi-quantitative analysis on the results of immunohistochemistry.There were significant differences of AR expression between the control group（10.36±1.63），finasteride group（9.08±1.71），dutasteride group（9.12±2.42）and epristeride group（7.92±2.36），and the reduction in epristeride group was more significant（P＜0.05）.There were not significant changes of ERα expression between each group.The expression of ERβ in dutasteride group（6.52±1.57）and epristeride group（6.76±1.55）was significantly enhanced compared with that in the control group（5.24±1.20），and the expression in finasteride group（5.60±1.04）was enhanced，but there were no statistically significant differences（P＞0.05）.Conclusion 5α-RI is able to inhibit AR expression and enhance ERβ expression in the prostatic tissues in the patients with BPH.It does not have great effects on the expression of ERα.Different 5α-RIs have different effects on the expression of AR，ERα and ERβ.

［Key words］5α Reductor inhibitors（5α-RI）；Estrogen receptor；Androgen receptor；Prostatic hyperplasia良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）是老年男性常見病，其發(fā)病機制尚不十分清楚，比較明確的兩個必要條件是有功能的睪丸和年齡的增長。雄激素及其受體學說認為雄激素特別是二氫睪酮通過雄激素受體對前列腺的增生起關鍵作用，因此抑制睪酮向二氫睪酮轉變的5α還原酶抑制劑（5α-reductase inhibitor，5α-RI）被臨床應用治療BPH。但該學說并不能完全解釋BPH的發(fā)病機制，已有研究表明雌激素及其受體在BPH中亦扮演重要角色［1-6］。因此本文設計此項研究，旨在觀察不同5α-RI對BPH組織內雄激素受體（androgen receptor，AR）、雌激素受體α（estrogen receptor α，ERα）、雌激素受體β（ERβ）表達的影響。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集我院2012年1月～2013年6月間BPH患者100例，納入標準：①55歲以上；②主訴排尿困難、尿細無力、尿流中斷、夜尿頻數(shù)等癥狀；③肛門指診示前列腺增大，中央溝變淺或消失；④B超示前列腺增大，體積20 mL以上；⑤最大尿流率＜15 mL/s。排除標準：①確診前列腺癌；②合并急性前列腺炎；③前列腺手術史；④長期使用影響前列腺功能的藥物；⑤合并嚴重內科疾??；⑥合并其他可能影響試驗結果的疾病或癥狀。將符合上述標準的患者隨機分為四組。

所有患者治療前通過自我評價或調查人員協(xié)助下評價完成國際前列腺癥狀評分（IPSS）及生活質量評分（QOL），B超測量前列腺體積（0.52×三徑線之乘積），尿流率檢查測定最大尿流率（Qmax）。四組患者在口服藥物治療前的各項指標，包括年齡、IPSS、QOL、Qmax、前列腺體積等一般資料差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

1.2給藥方法

對照組口服維生素C（浙江瑞新藥業(yè)，國藥準字H33021139，0.1 g×100）0.1 g，1次/d；非那雄胺組：口服非那雄胺（默沙東制藥，進口藥品注冊證號H2011 0485，5 mg×10片）5 mg/次，1次/d；度他雄胺組：口服度他雄胺（葛蘭素史克，進口藥品注冊證號H20110205，0.5 mg×10片）0.5 mg/次，1次/d；依立雄胺組：口服依立雄胺（江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)，國藥準字H20010669，5 mg× 10片）5 mg/次，2次/d。口服藥物治療8周結束后行經(jīng)尿道前列腺電切術，收集前列腺組織標本制成蠟塊。

1.3研究方法

所有標本收集完畢后切片，采用SP法行免疫組化染色。具體流程：甲醛固定標本后石蠟包埋，切片（4 μm/片），脫蠟水化，胃蛋白酶溶液（0.5%）消化，EDTA抗原液修復，加入一抗孵育過夜（4℃），加入二抗（50 μL，帶有生物素標記）孵育20～30 min，加入卵白素（50 μL）孵育10 min，確定顯色適時終止反應。顯色后的切片由三位專業(yè)病理科醫(yī)生獨立檢查，采取IHS法［7］對結果進行半定量分析：①染色強度，以多數(shù)細胞呈現(xiàn)的染色強弱計分（記為a）：無明顯著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；②陽性細胞率，即某類細胞5個視野（每400×高倍視野計數(shù)100個此類細胞）的陽性細胞的平均數(shù)（記為b）：1%～10%計1分，＞10%～50%計2分，＞50%～75%計3分，＞75%計4分；③a×b乘積為IHS評分：0分為陰性（-），1～4分為弱陽性（+），5～8分為中陽性（++），9～12分為強陽性（+++）。每個標本觀察3張切片，取平均值。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，之后多重比較采用LSD法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1　四組治療前各項基礎情況比較（x±s）

2　結果

AR在前列腺間質及上皮細胞均有表達；與對照組比較，口服不同5α-RI的各組前列腺組織中AR表達均顯著抑制，其中依立雄胺組更為顯著。ERα表達率不高，主要表達于前列腺組織的間質，僅個別標本見上皮表達；與對照組相比，口服不同5α-RI的各組前列腺組織中ERα的表達受到抑制，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。ERβ主要表達于上皮，在間質中也有少量表達；與對照組比較，度他雄胺組、依立雄胺組ERβ表達顯著增強（P＜0.05），非那雄胺組ERβ表達有所增強，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表2）。

3　討論

BPH是引起中老年男性排尿障礙的最常見原因，其發(fā)病機制尚不十分清楚，研究顯示性激素水平失衡可能與其發(fā)病密切相關［8，9］，Suzuki等［10］發(fā)現(xiàn)男性40歲以后開始出現(xiàn)雌/雄激素比值增加象，兩者的協(xié)同效應在BPH的發(fā)病中起關鍵作用，雌激素主要通過其受體發(fā)揮作用，目前發(fā)現(xiàn)ER有兩種亞型：ERα和ERβ，研究表明兩種ER具有不同的生物學作用［5，11，12］。5α-RI是目前唯一以縮小前列腺體積為治療手段的前列腺治療藥物，其通過抑制睪酮向雙氫睪酮轉變，降低前列腺組織內雙氫睪酮的濃度，進而達到縮小前列腺體積的目的。已有的研究多為5α-RI對前列腺組織中AR表達的影響，未曾研究其對ER表達的影響，本研究中我們觀察了5α-RI對前列腺組織中ER表達的影響。

表2　四組AR、ERα、ERβ免疫組化表達評分比較（x±s，分）

在本研究中，對照組AR表達絕大部分呈強陽性，在應用不同的5α-RI后，AR表達受到抑制，與文獻一致［13，14］，而應用依立雄胺后，AR受抑制更為明顯，與非那雄胺組、度他雄胺組有顯著差異，可能與依立雄胺的藥理特點相關，依立雄胺是不可逆的非競爭性抑制劑，不直接與睪酮形成競爭，而是與底物-酶-NADP+形成優(yōu)勢復合物，抑制5α-還原酶釋出，進而阻止睪酮向雙氫睪酮轉化，其對5α-還原酶的抑制強度理論上高于非那雄胺和度他雄胺，故其對AR表達抑制較高。

在本研究中，ERα主要表達于間質，僅個別標本見上皮表達，與文獻一致［13，15，16］。在5α-RI治療后，ERα的表達受到了一定的抑制，但不存在顯著性差異，可能與應用5α-RI治療的時間不足有關。ERβ主要表達于上皮，在間質中有少量表達，與文獻一致［5，15，17，18］?？诜人郯坊蛞懒⑿郯泛驟Rβ表達顯著增強，而口服非那雄胺后ERβ表達雖然有所增強，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

口服5α-RI對前列腺組織內的兩種ER表達產(chǎn)生了方向不一致的影響，對ERα的表達以抑制為主，對ERβ的表達以增強為主，且不同的5α-RI所產(chǎn)生的影響程度有所不同，可能與兩種ER的生物學特點及不同5α-RI的藥理特點相關。三種5α-RI的藥理特性有細微的差別，依立雄胺直接阻斷了5α-還原酶從復合物中釋出，度他雄胺是Ⅰ型和Ⅱ型5α-還原酶的雙重競爭性抑制劑，能最大程度抑制5α-還原酶，而非那雄胺僅是Ⅱ型5α-還原酶的競爭性抑制劑，因而這三種不同的5α-RI對5α-還原酶的抑制程度存在一定的差異，最終對ERα、ERβ的表達所產(chǎn)生的影響程度有所不同。

目前對于雌激素及其兩個受體在BPH中的作用尚無一致的觀點。Sciarra等［19］發(fā)現(xiàn)BPH標本中ER陽性表達率隨著年齡的增加而增加。Tsurusaki等［15］發(fā)現(xiàn)ERα僅表達于外周帶間質，ERβ表達于外周帶及移行區(qū)的基質與上皮細胞，認為ERβ在BPH的形成中有重要“促進”作用。在雄性ERβ基因敲除小鼠前列腺中，上皮細胞增殖增加，凋亡減少；且ERβ選擇激動劑能逆轉雄性芳香化酶基因敲除小鼠的前列腺增生，而ERα選擇激動劑不能，這兩項研究提示ERβ是前列腺增生的保護因子［20，21］。另有研究［5，20-23］發(fā)現(xiàn)ERα介導雌激素對前列腺基質細胞的增殖作用，而ERβ具有抗增殖促凋亡的作用，與前列腺內的細胞凋亡密切相關。這些研究均表明ERα和ERβ具有明顯不同的生物學效應，提示雌激素及其不同受體與BPH之間關系復雜，存在雙重作用可能。BPH患者口服5α-RI治療后，其體內特別是前列腺組織內的雄激素雌激素之間、雌激素與其兩受體之間存在尚有待我們進一步深入了解的相互關系，這將是我們以后進一步研究的重要領域。

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Effects of 5α reductor inhibitors on the expression of estrogen receptor and androgen receptor in the tissues of prostatic hyperplasia

LU Yongyong1HUANG Hang1LI Peng2WU Zhigang1WU Xiuling2
1.Department of Urology Surgery，Wenzhou Medical University Affiliated First Hospital，Wenzhou 325000，China；2. Department of Pathology，Wenzhou Medical University Affiliated First Hospital，Wenzhou325000，China

R697.3

A

1673-9701（2016）24-0004-04

2016-05-24）

浙江省溫州市科技計劃項目（Y20120217）