赤點石斑魚FAS基因的克隆及序列分析

陳斯鈺,張 芮,楊云霞

(浙江海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,浙江舟山 316022)

?

赤點石斑魚FAS基因的克隆及序列分析

陳斯鈺,張 芮,楊云霞*

(浙江海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,浙江舟山 316022)

[目的]研究赤點石斑魚 (Epinephelus akaara) FAS基因的結(jié)構(gòu)與表達特性。[方法]以前期獲得的轉(zhuǎn)錄組序列作為數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用PCR技術(shù)，獲得赤點石斑魚FAS 基因的cDNA全序列。[結(jié)果]該序列與大黃魚(Larimichthy scrocea)FAS基因的相似度最高，為87%。該序列全長8 505 bp，包括712 bp的3′UTR區(qū)、7 548 bp的開放閱讀框(ORF)以及245 bp的5′UTR區(qū)，可編碼2 515個氨基酸。經(jīng)預(yù)測，該蛋白分子量為274.03 ku，等電點為5.98，其屬于親水性蛋白。通過Real-time PCR方法獲得FAS在赤點石斑魚各個組織中的表達，結(jié)果顯示，其在心臟中表達量最高，其次是在肝臟中。FAS基因的進化與物種進化一致。[結(jié)論]該研究為進一步研究赤點石斑魚脂肪代謝奠定理論基礎(chǔ)，也為赤點石斑魚在養(yǎng)殖方面的工作提供基礎(chǔ)資料。

赤點石斑魚；FAS基因；組織分布

赤點石斑魚(Epinephelus akaara)俗稱紅斑、紅過魚，隸屬于鱸形目(Perciformes)鮨科(Serranidae)石斑魚屬(Epinephelus)，是我國南方名貴的經(jīng)濟養(yǎng)殖魚類[1]。其屬于亞熱帶暖溫性底層魚類，多生活于巖礁底質(zhì)的海域，一般不結(jié)成大群，喜光線較暗區(qū)域，主要攝食魚類和蝦類[2]，主要分布于北太平洋西部，我國產(chǎn)于舟山群島以南經(jīng)臺灣海峽至南海、北部灣一帶海域。赤點石斑魚富含EPA、DHA等高不飽和脂肪酸，可預(yù)防心血管等疾病發(fā)生。赤點石斑魚肉味鮮美，又因人們認為其身上的紅斑為吉祥之意，故市場上售價很高，是香港、廣東的主要養(yǎng)殖品種[3]。

FAS(fatty acid synthetase)基因是生物體內(nèi)脂肪酸合成的關(guān)鍵酶，當其表達水平和活性升高時，會顯著增加甘油三脂在體內(nèi)的沉積[4-6]；當其活性受到抑制時，會阻滯生脂通路、減少脂肪的合成，還會造成丙二酰COA濃度的升高，降低食欲[7]。為深入了解FAS基因，很多學(xué)者對FAS功能、表達活性、調(diào)控機制等方面進行了研究[8-14]。迄今為止，人們已分離得到人脂肪酸合成酶代謝調(diào)控基因，發(fā)現(xiàn)其脂肪酸合成酶基因位于17q25[15]，另外，牛的基因位于19q22，雞的基因位于18號染色體上[16]。此外，還有學(xué)者對綿羊肌肉中FAS基因表達的發(fā)育性變化進行了研究，發(fā)現(xiàn)FAS基因mRNA水平在哈薩克羊肌肉中初生時最高(P<0.05)，隨日齡的增加呈下降趨勢；在新疆細毛羊肌肉中，F(xiàn)ASmRNA水平則表現(xiàn)出“下降-上升-下降-上升”的發(fā)育模式，其中，60日齡顯著高于90日齡(P<0.05)，其余日齡之間差異不顯著[17]。另有學(xué)者研究了不同填飼期肥肝鵝肝臟組織中不同脂肪酸沉積與脂肪酸合成酶FAS基因mRNA的表達豐度及相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)FAS基因mRNA的表達對肥肝鵝肝臟中脂肪的沉積具有填飼前、中期快速增加，填飼后期下降的調(diào)控作用[18]。熊文中等[19]研究發(fā)現(xiàn)，豬脂肪組織中脂肪酸合成酶和酮體脂肪量具有極顯著(P<0.01)的正相關(guān)關(guān)系。

關(guān)于FAS基因在哺乳動物上的研究已很深入，而在魚類上，研究者對FAS的研究僅局限于FAS活性研究，對其基因研究相對較少。目前，GenBank 數(shù)據(jù)庫上僅見預(yù)測的斑馬魚 Danio rerio FAS基因mRNA全序列 (GenBank:XM_001923608.2) 以及吉富羅非魚 Oreochromis niloticus (GenBank:GU433188.1)、黑鯛 Acanthopagrusschlegelii (GenBank:EU780581.1)、軍曹魚 Rachycent roncanadum (GenBank:FJ842647.1)、點帶石斑魚Epinephelus coioides (GenBank:FJ196231.1)、黑青斑河豚 Tetraodonnigroviridis (GenBank:CAF94659.1)等少數(shù)魚類的FAS基因部分mRNA序列。關(guān)于赤點石斑魚的FAS基因，目前尚未見相關(guān)方面的研究。筆者以赤點石斑魚為研究對象，研究赤點石斑魚FAS基因的克隆及序列分析，為進一步研究赤點石斑魚脂肪代謝奠定理論基礎(chǔ)，也為赤點石斑魚在養(yǎng)殖方面的工作提供基礎(chǔ)資料。

1　材料與方法

1.1試驗材料赤點石斑魚來自浙江海洋大學(xué)分子生物學(xué)實驗室。將赤點石斑魚暫養(yǎng)7 d后，選擇外觀無明顯病狀、較為健康的赤點石斑魚。在超凈工作臺上進行無RNA操作：將其解剖后，獲得頭腎、腦、腸、脾、腹肌、肝、鰓、胃、心臟、背肌等組織。將各組織用錫箔紙包裹，做好標記后，放入-80 ℃的冰箱中冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2引物設(shè)計在NCBI網(wǎng)站上下載與赤點石斑魚相似的其他魚類FAS基因序列，即大黃魚 (Larimichthys crocea KP889061.1)、軍曹魚(Rachycentron canadum FJ842648.1)、羅非魚 (Oreochromis niloticus GU433188.1)、南極鱈魚 (Notothenia coriiceps XM_010792091.1) 的FAS基因序列，遵循引物設(shè)計原則，采用引物設(shè)計軟件Primer Premier 5.0[20]和評估軟件PrimerSelect設(shè)計上、下游引物。由測序結(jié)果獲得FAS基因片段，同時結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測序的結(jié)果，獲得赤點石斑魚FAS基因的開放閱讀框(Open read frame ,ORF) 序列,設(shè)計半定量RT-PCR反應(yīng)引物。引物序列由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。EA-fas-CF：3′-CTTGATGGGTGTGGAGGTTCG-5′，EA-fas-CR：3′-AGTCTCGGCTGATGTTCTTGTG-5′；EA-fas-RT-ZF：3′-GCCAACAGCAAGCCAGAATCTC-5′，EA-fas-RT-ZR：3′-GCAGCAGTGGAGCCCTCAAT-5′；β-actin-F：3′-CGACCTCACAGACTACCT-5′，β-actin-R：3′-AACGGAACCTCTCATTGC-5′。

1.3試驗方法

1.3.1總RNA的提取并檢測。取各新鮮組織于Eppendorf 離心管中,采用Trizol法，通過取樣、處理、去蛋白、沉淀、洗滌、干燥、溶解等步驟，提取各個組織的總RNA。并將所提取的總RNA進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.3.2cDNA模板的制備及FAS基因序列全長的獲得。根據(jù)RNA的檢測濃度，取各組織RNA 2 μL于Eppendorf離心管中，再加入2.0 μL Buffer、0.5 uL oligo(dT)、0.5 μL Random.6、0.5 μL mix，最后加4.5 μL RNase FreedH2O補足。將PCR儀反應(yīng)程序設(shè)置為37 ℃，15 min；85 ℃，5 s；4 ℃后，進行反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA，最后加入40.0 μL ddH2O進行稀釋，獲得cDNA模板，放入4 ℃冰箱中備用。

利用合成的引物(EA-fas-CF、EA-fas-CR)，并結(jié)合腦、胃、心臟等模板進行中間片段的PCR擴增。根據(jù)說明書添加如下反應(yīng)體系：10×Buffer 3.0 μL、dNTP 2.0 μL、上下引物各0.4 μL、rTaq 0.2 μL、模板0.6 μL、ddH2O 23.4 μL。PCR擴增反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環(huán)；最后72 ℃延伸8 min。當PCR擴增結(jié)束后，進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，選擇檢測結(jié)果具有明亮條帶的PCR產(chǎn)物，送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進行純化、克隆，獲得基因序列，再以實驗室前期獲得的轉(zhuǎn)錄組序列作為數(shù)據(jù)庫，搜索獲得FAS基因序列，并通過NCBI數(shù)據(jù)庫Blast程序進行序列驗證。

1.3.3RT-PCR擴增。以β-actin作為參考基因，重新設(shè)計RT-PCR引物(EA-fas-RT-CF、EA-fasR-T-CR)，以腦、腸、脾、腹肌、肝、鰓、胃、心臟、背肌作為模板進行RT-PCR擴增。每個樣品進行3次重復(fù)擴增，每組反應(yīng)體系：premix 7.5 uL、模板 1.0 μL、上下引物各0.6 μL、ddH2O 6.3 μL。RT-PCR擴增反應(yīng)程序：95.5 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40個循環(huán)。

1.4數(shù)據(jù)分析所得數(shù)據(jù)采用2-ΔCt法，計算FAS基因在赤點石斑魚各組織中的相對表達量。

2　結(jié)果與分析

2.1總RNA檢測結(jié)果將所提取的總RNA進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果見圖1。由圖1可知，在每個組織中均能觀察到28S、18S、5S 3條明亮、清晰的條帶。

注：1.腦；2.腸；3.脾；4.腹?。?.肝；6.鰓；7.胃；8.心臟；9.背肌。Note: 1.Brain;2.Intestine;3.Spleen;4.Abdo minal muscle;5.Liver;6.Gills;7.Stomach;8.Heart;9.Back muscle.圖1　赤點石斑魚9個組織的總RNA電泳分析Fig.1　Electrophoretic analysis of total RNA expression in nine tissues of Epinephelus akaara

2.2FAS基因cDNA全長序列及其編碼氨基酸序列利用赤點石斑魚肝臟的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，以及與其他物種FAS基因序列，通過PCR擴增和克隆測序分析，拼接得到cDNA全序列長度為8 505 bp。由ORF-Finder檢索得到，該序列由7 548 bp編碼區(qū)、712 bp的3′UTR區(qū)和245 bp的5′UTR區(qū)組成，共編碼2 515個氨基酸。經(jīng)ProtParam (http://web.expasy.org/ protparam)軟件分析，預(yù)測赤點石斑魚FAS蛋白質(zhì)分子量為274.03 ku，等電點為5.98。利用ProtScale (http://web.expasy.org/protscale)在線預(yù)測赤點石斑魚FAS的氨基酸親/疏水性，結(jié)果顯示，赤點石斑魚FAS蛋白序列中疏水性氨基酸殘基所占面積小于親水性氨基酸殘基，其中，疏水性最大值為2.689，親水性最大值為3.000，可以推測該蛋白屬于親水性蛋白。此外，經(jīng)過SMART (http://smart.embl-heidelberg.de/)在線預(yù)測，得知FAS蛋白有2個特有的結(jié)構(gòu)域，一個是PKS_ER 結(jié)構(gòu)域(位于第1 549～1 864個氨基酸)；另一個是PKS_KR結(jié)構(gòu)域(位于第1 896～2 077個氨基酸)。

2.3FAS基因的同源性和系統(tǒng)進化分析利用NCBI數(shù)據(jù)庫Blast程序進行序列驗證，結(jié)果顯示，該序列與大黃魚(Larimichthy scrocea)、深裂眶鋸雀鯛(Stegastes partitus)、羅非魚(Stegastes partitus)等的FAS基因核苷酸序列均有較高的相似度，分別為87%、86%、83%。選取NCBI上已知的魚類及其他高等脊椎動物的FAS基因序列，運用軟件ClustalX進行多序列比對分析，并以MEGA5.1軟件中的鄰接法(Neighbor Joining)構(gòu)建多物種的FAS基因系統(tǒng)發(fā)生樹(圖2)。由圖2可知，所獲得的進化樹由2個主要分支組成，其中一支主要分支又分為兩分支，一支為各種魚類，一支為原雞和熱帶爪蟾，另一支主要分支為人和小鼠。

圖2　基于FAS氨基酸序列構(gòu)建脊椎動物系統(tǒng)進化樹(NJ樹)Fig.2　Phylogenetic tree of vertebrates based on FAS a mino acid sequence

2.4赤點石斑魚FAS基因在各組織中的差異表達為研究赤點石斑魚不同組織FAS表達的差異性,通過RT-PCR對赤點石斑魚9個組織的FAS相對表達量進行檢測。結(jié)果表明，F(xiàn)AS基因在各個組織中均有表達(圖3)，但不同組織中的表達量明顯不同，心臟中相對表達量最高，為0.069；其次是肝和腸，表達量分別為0.017和0.015；而腦與脾的表達量相同，均為0.011；在腹肌、鰓、胃、背肌中的相對表達量差異不大，分別為0.007、0.003、0.002、0.003。

圖3　赤點石斑魚FAS基因在不同組織中的表達情況Fig.3　Tissue expression of FAS gene in different tissues of Epinephelus akaara

3　討論

脂肪酸合成酶是一種多功能酶復(fù)合物，在動物生命活動中發(fā)揮重要作用，其最早是在鵝的肝臟中發(fā)現(xiàn)的，隨后研究者對人、鼠、豬、牛也進行了相關(guān)方面的研究[21-23]。該研究獲得FAS基因全序列，其全長為8 505 bp，由712 bp的3′UTR區(qū)、7 548 bp的開放閱讀框(ORF)以及245 bp的5′UTR區(qū)組成，共編碼2 515個氨基酸。該序列與大黃魚FAS基因序列相似度最高，為87%，其高度保守性揭示魚類FAS蛋白可能具有相似的功能和特性，在動物生長過程中起重要作用。經(jīng)預(yù)測，F(xiàn)AS蛋白屬于親水性蛋白，蛋白分子量為274.03 ku，等電點為5.98。且FAS蛋白具有2個特有的結(jié)構(gòu)域，分別為PKS_ER 結(jié)構(gòu)域和PKS_KR結(jié)構(gòu)域，這2個結(jié)構(gòu)域在生物脂肪酸合成過程中起關(guān)鍵性作用。此外，通過構(gòu)建FAS基因系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)赤點石斑魚與大黃魚、軍曹魚親緣關(guān)系更接近，與人和小鼠的親緣關(guān)系最遠，而與原雞、熱帶爪蟾在FAS基因進化上比哺乳類有更近的親緣關(guān)系。該結(jié)果不僅支持了硬骨魚類的單系起源，也顯示脊椎動物從水生到陸生的進化軌跡，反映了物種間的進化關(guān)系。

該研究通過RT-PCR擴增發(fā)現(xiàn)赤點石斑魚FAS基因在腦、腸、脾、腹肌、肝臟、鰓、心臟、胃、背肌等組織中均有表達，且在心臟中表達量最高，其次是在肝臟中。FAS基因的表達直接影響脂肪酸合成酶的多寡，對魚體內(nèi)脂肪酸的合成具有極大影響。關(guān)于脂肪酸合成部位，研究表明，脂肪酸的合成部位在不同物種中具有差異性，哺乳動物主要在脂肪組織中合成脂肪酸，而家禽脂肪酸合成部位主要在肝臟，由肝臟合成的脂肪酸約占總量的90%[24]。研究發(fā)現(xiàn)，不同魚類在不同組織中FAS基因mRNA表達量不同，瓦氏黃顙魚 (Pelteobaggrus vachelli) 在腸道中表達量最高，且顯著高于其他組織，肝臟組織中的表達量顯著高于肌肉、腦組織和腹腔脂肪組織[25]；匙吻鱘 (Polyodon spathula)在肝臟中表達量最高，其次是在腹腔脂肪中，在胃中表達量最低；而鳙 (Aristichthysnobilis) 在咽器官表達量最高，其次在腸道組織中，在鰓中表達量最低[26]。研究發(fā)現(xiàn)，吉富羅非魚肝臟中FASmRNA的表達豐度高于肌肉,且飼料脂肪水平能夠抑制FASmRNA表達,脂肪水平越高抑制作用越明顯[27]。由于個體差異，不同物種在不同生長條件下，各個組織中FAS基因mRNA表達量不同。該研究對赤點石斑魚不同組織中FAS基因不同表達量的探索，對脂肪酸合成調(diào)控研究具有一定的現(xiàn)實意義，通過對組織中脂肪酸合成酶量的調(diào)節(jié)，可以有效地控制魚體內(nèi)脂肪的沉積，從而提高魚肉品質(zhì)。因此，對FAS基因mRNA表達的時空性及不同條件下的表達調(diào)控需要在今后研究中進一步探索。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟，人們從分子生物學(xué)水平對脂肪代謝的調(diào)控進行了一定探索性的研究。而該研究獲得的赤點石斑魚FAS基因全長序列，為進一步對赤點石斑魚脂肪相關(guān)的研究以及育種提供了理論基礎(chǔ)，同時也為今后研究赤點石斑魚與鱸魚目等近緣物種間分子進化和遺傳分化奠定理論基礎(chǔ)。

[1]陳省平,丁少雄,陳嘉慧.赤點石斑魚群體遺傳結(jié)構(gòu)的微衛(wèi)星分析[J].中山大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2012,51(3): 83-89.

[2]林龍山.東山灣及其鄰近海域常見游泳動物[M].北京:海洋出版社,2013: 69.

[3]姚善成,從嬌日.海水魚類養(yǎng)殖技術(shù)[M].青島:青島海洋大學(xué)出版社,1998: 100.

[4]顏新春,汪以真,許梓榮.動物脂肪酸合成酶(FAS)基因表達調(diào)控[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2002,14(2): 1-4.

[5]羅建學(xué),李春風(fēng),初曉輝,等.脂肪酸合成酶基因的研究進展[J].中國畜牧獸醫(yī),2011,38(6): 118-123.

[6]孟冬梅,王繼文,李亞峰.脂肪酸合成酶基因的研究進展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2004(1): 12-15.

[7]馬慧敏,劉昌奇.脂肪酸合成酶(FAS)基因的研究進展以及日糧成分對其表達的調(diào)控[J].飼料工業(yè),2007,28(22): 59-64.

[8]WANG W,ZHAO X Y,WANG H Y,et al.Increased fatty acid synthase as a potential therapeutic target in multiple myeloma[J].Journal of Zhejiang University Science B,2008,9(6):441-447.

[9]HAUVERMALE A,KUNER J,ROSENZWEIG B,et al.Fatty acid production in Schizochytrium sp: Involvement of a polyunsaturated fatty acid synthase and a type I fatty acid synthase[J].Lipids,2006,41(8): 739-747.

[10]SMITH S.The animal fatty acid synthase: One gene,one polypeptide,seven enzymes[J].The FASEB journal,1994,8(15): 1248-1259.

[11]MORRIS S M,NILSON J H,JENIK R A,et al.Molecular cloning of gene sequences for avian fatty acidsynthase and evidence for nutritional regulation offatty acid synthase mRNA concentration[J].Journal of biological chemistry,1982,257(6): 3225-3229.

[12]ALLAN E S,THOMAS A M,MARTA G T.Conversion of palmitate to unsaturated fatty acids differs in a Neurospora crassa mutant with impaired fatty acid synthase activity[J].Lipids,1998,33(3): 303-306.

[13]MISRA S,SAKAMOTO K,MOUSTA?D N,et al.Localization of sequences for the basal and insulin-like growth factor-I inducible activity of the fatty acid synthase promoter in 3T3-L1 fibroblasts[J].The biochemical journal,1994,298(3): 575-578.

[14]ROLLAND V,LIEPVRE X L,JUMP D B,et al.A GC-rich region containing Sp1 and Sp1-like binding sites is a crucial regulatory motif for fatty acid synthase gene promoter activity in adipocytes.Implication In the overactivity of FAS promoter in obese Zucker rats[J].The journal of biological chemistry,1996,271(35): 21297-21302.

[15]MATTHEW H H,CHIRALA S S,WAKIL S J.Human fatty-acid synthase gene[J].The journal of biological chemistry,1996,271:13584-13592.

[16]KAMEDA K,GOODRIDGE A G.Isolation and partial characterization ofthe gene for goose fatty acid synthase[J].The journal of biological chemistry,1991,266(1):419-426.

[17]喬永,黃治國,李齊發(fā),等.綿羊肌肉中FAS基因和HSL基因的發(fā)育性變化及其對肌內(nèi)脂肪含量的影響(英文)[J].遺傳學(xué)報,2007(10):909-917.

[18]舒常平,王寶維,李楨,等.填飼鵝肝臟組織中脂肪酸沉積與FAS基因mRNA的表達豐度[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2012(10):2002-2011.

[19]熊文中,楊鳳,周安國.豬重組生長激素對不同雜交肥育豬脂肪代謝調(diào)控的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2001,32(1):4.

[20]任亮,朱寶芹,張軼博,等.利用軟件Primer Premier 5.0進行PCR引物設(shè)計的研究[J].錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2004,25(6):43-46.

[21]MORRIS C A,CULLEN N G,GLASS B C,et al.Fatty acid synthase effects on bovine adipose fat and milk fat[J].Mammalian genome,2007,18(1):64-74.

[22]MUNOZ G,OVILO C,NOGUERA J L,et al.Assignment of the fatty acid synthase (FASN) gene to pig chromosome12 by physical and Linkage mapping[J].Animal genetics,2003,34(3):234-235.

[23]ROY R,GAUTIER M,HAYES H,et al.Assignment of the fatty acid synthase(FASN) gene to bovine chromosome19(19q22)by in situ hybridization and confirmation by somatic cell hybrid mapping[J].Cytogenetics and cell genetics,2001,93(1/2):141-142.

[24]張宜輝,張蕊,王健,等.番鴨脂肪酸合成酶基因的克隆及填飼對其mRNA水平的影響[J].中國畜牧獸醫(yī),2014,41(1):84-87.

[25]覃川杰.瓦氏黃顙魚 (Pelteobagrus vachelli) 脂肪代謝相關(guān)基因cDNA的克隆及表達分析[D].上海：華東師范大學(xué),2010.

[26]施培松.匙吻鱘和鳙的生長、肌肉品質(zhì)比較及FAS基因克隆與表達[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

[27]王愛民,韓光明,韋信鍵,等.吉富羅非魚FAS基因的克隆及再投喂和飼料脂肪水平對其表達的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報,2010(7): 1113-1120.

Cloning and Sequence Analysis of FAS Gene in Epinephelus akaara

CHEN Si-yu,ZHANG Rui,YANG Yun-xia*

(College of Fishery,Zhejiang Ocean University,Zhoushan,Zhejiang 316022)

[Objective]To research the structure and expression characteristics of FAS (Fatty Acid Synthase) gene in Epinephelus akaara.[Method]With the transcriptome sequence obtained in previous research as the database,PCR technology was used to obtain the cDNA sequence of FAS gene in E.akaara.[Result]This sequence had high similarity with that of Larimichthy scrocea (87%).The total length of FAS gene was 8 505 bp,which included 712 bp 3′UTR,7 548 bp open reading frame (ORF),and 245 bp 5′UTR.A total of 2 515 amino acids were encoded.The protein molecular weight was 274.03 ku,isoelectric point was 5.98,and it belonged to the hydrophilic protein.Results of Real-time PCR showed that FAS gene had the highest expression in heart,followed with liver.Evolution of FAS gene was in accord with that of species.[Conclusion]This research lays theoretical basis for the fat metabolism of E.akaara,and provides basic data for the cultivation of E.akaara.

Epinephelus akaara;FAS gene;Tissue distribution

浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動計劃暨新苗人才計劃項目(2016R411016)；浙江海洋學(xué)院科研啟動經(jīng)費項目(Q1418)；浙江海洋大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新項目(xj201512)。

陳斯鈺(1995- )，女，浙江紹興人，本科生，專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖。*通訊作者，講師，博士，從事動物分子營養(yǎng)研究。

2016-07-08

S 965.334

A

0517-6611(2016)25-109-03