新疆伊寧市部分售奶站生鮮乳中微生物污染的調(diào)查分析

陳 霞，比爾來西肯·賽都力，張海蘭，韓春曉，況 玲

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學，新疆烏魯木齊 830052；2.伊犁職業(yè)技術(shù)學院，新疆伊犁 835000)

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新疆伊寧市部分售奶站生鮮乳中微生物污染的調(diào)查分析

陳 霞1，2，比爾來西肯·賽都力2，張海蘭2，韓春曉2，況 玲1*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學，新疆烏魯木齊 830052；2.伊犁職業(yè)技術(shù)學院，新疆伊犁 835000)

[目的]研究伊寧市生鮮乳中主要微生物的含量，為散裝生鮮乳銷售環(huán)節(jié)的衛(wèi)生質(zhì)量安全檢測研究提供參考。[方法]針對新疆伊寧市8個不同片區(qū)售奶站進行采樣，研究不同季節(jié)生鮮乳中菌落總數(shù)、大腸菌群數(shù)、芽孢總數(shù)和耐熱芽孢總數(shù)的含量變化。[結(jié)果]2014年6月～2015年5月期間，伊寧市8個售奶站的生鮮乳在感官方面色澤、滋味、氣味均正常，且不存在凝塊、沉淀、肉眼可見異物現(xiàn)象；主要微生物含量指標菌落總數(shù)、大腸菌群數(shù)、芽孢總數(shù)和耐熱芽孢總數(shù)分別為：3.08×105～8.48×105CFU/mL、1.5×105～8.1×105MPN/L、21～75 CFU/mL和3～8 CFU/mL，均符合國家標準。但散奶戶所銷售的生鮮乳中檢查出微生物的含量要明顯高于售奶站的鮮乳。[結(jié)論]新疆伊寧市部分奶站所售生鮮乳中主要微生物含量各項指標整體均符合國家標準，反映出伊寧市生鮮乳衛(wèi)生管控整體水平較高。

售奶站生鮮乳；微生物污染；檢測

散裝生鮮乳消費在我國目前的畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管體系下是一個特有的領(lǐng)域，在歐美發(fā)達國家和其他許多國家不存在散裝生鮮乳銷售環(huán)節(jié)。因此，現(xiàn)階段如何做好散裝生鮮乳銷售環(huán)節(jié)的監(jiān)管具有重要的現(xiàn)實意義。筆者以散裝生鮮乳銷售環(huán)節(jié)的衛(wèi)生質(zhì)量安全檢測為主要研究內(nèi)容開展相關(guān)研究，根據(jù)我國的相關(guān)檢測方法對伊寧市當?shù)夭糠质勰陶舅鄣纳r乳進行調(diào)查、取樣并采用感官和微生物等多種檢測、試驗以及數(shù)據(jù)分析方法，對伊寧市生鮮乳的品質(zhì)和微生物污染情況做出分析和評估。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1樣品。樣品來自伊寧市8個不同片區(qū)的售奶站，共12批次，384份生鮮乳樣品。

1.1.2主要儀器。冰箱、試管、鑰匙、量筒、酒精燈、采樣箱、溫度計、均質(zhì)器、振蕩器、電爐、放大鏡、顯微鏡、載玻片、(0.01 mL刻度)1 mL滅菌刻度吸管、(0.1 mL刻度)10 mL滅菌刻度吸管、250 mL、500 mL滅菌錐形瓶、直徑90 mm滅菌培養(yǎng)皿、1～1 000 μL移液槍和槍頭、滅菌毛細管、剪子、鑷子、精密pH試紙、乳糖膽鹽發(fā)酵管、乳糖發(fā)酵管等。

1.1.3培養(yǎng)基和試劑。月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯，批號20130904等，青島海博生物技術(shù)有限公司；煌綠乳糖膽鹽肉湯，貨號22767-49-3，上海盈公實業(yè)有限公司；伊紅美蘭瓊脂平板，規(guī)格7 cm×10塊/包，廣州市迪景微生物科技有限公司；EC肉湯，批號20131002等，青島海博生物技術(shù)有限公司；血平板，規(guī)格90 mm×10個/包，鄭州安圖生物工程有限公司；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，批號HB0108-4，青島海博生物技術(shù)有限公司；結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂，批號20140503等，青島海博生物技術(shù)有限公司；磷酸鹽緩沖液，貨號mrgf-6235-12，Growcells。

另外，試驗藥品和試劑還包括0.85%滅菌生理鹽水、75%乙醇、硫酸鹽緩沖液、革蘭氏染色液等。

1.2方法

1.2.1采樣。針對伊寧市8個不同片區(qū)售奶站進行采樣，包括①斯大林街三巷售奶屋、②都市田園售奶屋、③世紀家苑二期售奶屋、④農(nóng)四師售奶屋、⑤濱河家園售奶屋、⑥南苑散奶點1、⑦南苑散奶戶2和⑧漢人街散奶戶。根據(jù)實際情況每次試驗在各個奶站稱取1 kg生鮮牛乳，帶一次性采樣手套將乳樣存放在無菌采樣杯(無菌采樣袋)中。

將稱取好的生鮮乳以無菌采樣袋形式放置于樣品采集箱中，采樣箱中放入一套冰盒，以控制樣品溫度在0～4 ℃保存，減少貯運溫度波動，盡快帶回試驗點(系無菌實驗室或伊犁哈薩克自治州出入境檢驗檢疫局)。

1.2.2檢測。該試驗檢測菌落總數(shù)和大腸菌群數(shù)的方法均按中華人民共和國國家標準《食品衛(wèi)生學檢驗》中GB/T4789.2—2010菌落總數(shù)測定[1]和GB/T4789.3—2010大腸菌群計數(shù)程序[2]方法進行。

1.2.2.1菌落總數(shù)測定方法。以無菌操作將采樣杯中的奶樣25 mL放入225 mL無菌生理鹽水中，用均質(zhì)器拍打混勻，做10倍系列稀釋，選擇適度3個連續(xù)稀釋液的樣品，各取1 mL分別加入無菌培養(yǎng)皿中，每個平皿中加入20 mL左右營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，混勻，待凝固后，放入(36±1)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(48±2)h。詳細參見GB/T4789.2—2010《食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定》[1]。

1.2.2.2大腸菌群測定方法。以無菌操作將采樣杯中奶樣25 mL放入225 mL無菌生理鹽水的滅菌玻璃杯中，做10倍系列稀釋，選擇3個連續(xù)稀釋度的奶樣均液接種3管，做乳糖發(fā)酵試驗和分離培養(yǎng)試驗。詳細參見GB/T4789.3—2010《食品衛(wèi)生微生物學檢驗大腸菌群計數(shù)》[2]。

1.2.2.3芽孢總數(shù)測定方法。芽孢總數(shù)和耐熱芽孢總數(shù)檢測按照實驗室要求標準操作規(guī)程，進行檢驗分析。量取采樣杯奶樣10 mL放入無菌試管，在另一個試管內(nèi)放入10 mL蒸餾水，將2支試管放在80 ℃恒溫水浴鍋中，將溫度計放于試管中，計時10 min后，將試管取出，迅速冷卻到室溫，將調(diào)劑好的營養(yǎng)瓊脂加入40 ℃水浴鍋中。用加熱后的乳樣制備稀釋樣品，做10倍系列稀釋如菌落總數(shù)測定方法，將培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h。

1.2.2.4耐熱芽孢總數(shù)測定方法。量取采樣杯奶樣10 mL加熱到100 ℃，保持10 min，用恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)，方法等同芽孢總數(shù)的測定方法，培養(yǎng)溫度為30～35 ℃和50～55 ℃。

1.2.3數(shù)據(jù)處理。使用Excel軟件繪制圖表，導出表格，進行檢測項目的數(shù)據(jù)分析。

1.2.4評價標準。微生物評價按照2010年《食品衛(wèi)生國家標準》進行評價，樣品不合格認定標準為有1項或1項以上指標不符合國家標準，國家食品安全標準中規(guī)定，生鮮乳的菌落總數(shù)限量應當≤2.0×106CFU/mL，菌落總數(shù)≤5.0×105CFU/mL為1級，大腸菌群數(shù)≤1.0×106MPN/L，芽孢總數(shù)≤100 CFU/mL和耐熱芽孢總數(shù)≤10 CFU/mL均為正常。

2　結(jié)果與分析

2.1菌落總數(shù)測定數(shù)據(jù)根據(jù)圖1和表1分析，對取自各售奶站的生鮮牛乳檢測的數(shù)據(jù)進行分析，這12批次的奶樣中菌落總數(shù)介于3.08×105～8.48×105CFU/mL，均低于國家對于牛奶中微生物的限量2.0×106CFU/mL。售奶站①～⑤中微生物的含量小于5.00×105CFU/mL，可以評定為1級，奶樣中細菌總數(shù)達1級的占62.5%，對比原國標，售奶站⑥、⑦和⑧中微生物的含量介于5.00×105～2.00×106CFU/mL，認定為2級。

2.2大腸菌群測定數(shù)據(jù)根據(jù)圖2和表2分析，對取自各售奶站的生鮮乳檢測的數(shù)據(jù)進行分析，這12批次的乳樣中大腸菌群介于1.5×105～8.1×105MPN/L，均低于國家對于牛奶中的限量1.0×106MPN/L。但是，售奶站⑥、⑦和⑧中的數(shù)值要較前5個售奶站稍高些。

圖1　2014年6月～2015年5月伊寧市8個售奶站的樣品菌落總數(shù)檢測數(shù)據(jù)Fig.1　Total number of colonies in raw milk from eight milk stations in Yining City from June 2014 to May 2015

Table 1The average results of total number of colonies in raw milk from some milk stations in Yining City within a year

奶站序號MilkstationserialNo.菌落總數(shù)Totalnumberofcolonies×105CFU/mL是否超標Whetherexceedstandard①4.79否②4.22否③3.08否④3.89否⑤3.67否⑥8.48否⑦7.85否⑧7.16否

圖2　2014年6月～2015年5月伊寧市8個售奶站的樣品大腸菌群數(shù)檢測數(shù)據(jù)Fig.2　The data of coliform test for raw milk from the eight milk stations in Yining City from June 2014 to May 2015

2.3芽孢總數(shù)測定數(shù)據(jù)根據(jù)圖3和表3分析，對取自各售奶站的生鮮乳檢測的數(shù)據(jù)進行分析，這12批次的乳樣中芽孢總數(shù)介于21～75 CFU/mL，均低于國家標準≤100 CFU/mL。但是售奶站⑦和⑧大于60 CFU/mL。

表2伊寧市部分奶站生鮮乳樣品1年大腸菌群的平均檢測結(jié)果

Table 2The average results of coliform groups in raw milk from some milk stations

奶站序號MilkstationserialNo大腸菌群數(shù)Coliformgroups×105MPN/mL是否超標Whetherexceedstandard①2.8否②4.0否③2.0否④1.5否⑤4.1否⑥7.1否⑦8.1否⑧5.6否

圖3　2014年6月～2015年5月伊寧市8個售奶站的樣品芽孢總數(shù)檢測數(shù)據(jù)Fig.3　The data of total spores in raw milk from eight milk stations in Yining City from June 2014 to May 2015

Table 3The average results of total spores in raw milk from some milk stations in Yining City within a year

奶站序號MilkstationserialNo芽孢總數(shù)TotalsporesCFU/mL是否超標Whetherexceedingstandards①29否②21否③31否④27否⑤30否⑥75否⑦64否⑧52否

2.4耐熱芽孢總數(shù)測定數(shù)據(jù)根據(jù)圖4和表4分析，對取自各售奶站的生鮮乳檢測的數(shù)據(jù)進行分析，這12批次的奶樣中耐熱芽孢總數(shù)介于3～8 CFU/mL，均低于國家標準≤10 CFU/mL。但是售奶站⑥、⑦和⑧的數(shù)值要較前5個售奶屋稍高些。

綜合上述的圖表和數(shù)據(jù)分析，奶站的生鮮乳樣品中細菌菌落總數(shù)、大腸菌群數(shù)、芽孢總數(shù)和耐熱芽孢數(shù)均未超標，符合國家標準，但通過平均檢測結(jié)果可以看出，斯大林街三巷售奶屋、都市田園售奶屋、世紀家苑二期售奶屋、農(nóng)四師售奶屋、濱河家園售奶屋這5個政府奶業(yè)辦管理下的固定售奶站的生鮮乳質(zhì)量較南苑和漢人街的3家固定散戶的乳樣質(zhì)量要高，但均在國家要求的范圍之內(nèi)，說明生鮮乳衛(wèi)生管控整體水平較好。

圖4　2014年6月～2015年5月伊寧市8個售奶站的樣品耐熱芽孢總數(shù)檢測數(shù)據(jù)Fig.4　The data graph of total heat-resistant spores test for raw milk from the eight milk stations samples in Yining city from June 2014 to May 2015

Table 4The average results of total heat-resistant spores in raw milk from some milk stations in Yining City within a year

奶站序號MilkstationserialNo.耐熱芽孢總數(shù)Totalnumberofheat-resistantspores∥CFU/mL是否超標Whetherexceedstandard①4否②6否③5否④3否⑤4否⑥8否⑦7否⑧7否

3　結(jié)論與討論

該試驗收集整理了2014年6月～2015年5月間伊寧市部分售奶站所售生鮮牛乳中微生物的檢驗情況。從數(shù)據(jù)分析圖和表得出政府指定奶站的生鮮乳樣品質(zhì)量要優(yōu)于散戶的鮮乳質(zhì)量，這些可能與奶源、生鮮乳儲存環(huán)境、售奶點的污染狀況、承裝鮮奶的容器等因素有關(guān)，奶站都擁有固定的房屋、冰箱、相應承載生鮮乳的容器，以及定期質(zhì)檢部門的監(jiān)督檢查，而散奶戶銷售情況、鮮奶品質(zhì)隨天氣變化大，尤其是冬季、夏季受溫度、濕度影響大，且不易監(jiān)管。固定奶站的奶源為企業(yè)或養(yǎng)殖合作社提供，質(zhì)量控制較好，而散奶戶的生鮮乳多源于自家奶牛生產(chǎn)出的，存在衛(wèi)生意識差，貯奶裝備不衛(wèi)生等情況，也是造成散奶戶大腸菌群數(shù)較嚴重的主要原因。其中個別數(shù)值較高的售奶點奶樣，原因可能采奶時間為夏季，此夏季溫度較高，比較利于微生物的繁殖。散戶奶個別指標略高，接近限制量，要作為參考，繼續(xù)考察散奶戶的衛(wèi)

生管理狀況，也能得出固定售奶屋比散戶奶生產(chǎn)管理更加規(guī)范，因為奶源多為固定奶源提供[3-4]，所以奶樣的4項指標均能符合我國現(xiàn)在的標準。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.食品衛(wèi)生微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定：GB/T4789.2—2010[S].北京：中國標準出版社，2010.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.食品衛(wèi)生微生物學檢驗 大腸菌群計數(shù)：GB/T4789.3—2010[S].北京：中國標準出版社，2010.

[3]比爾來西肯·賽都麗，王一明，阿曼土爾，等.伊寧市區(qū)生鮮乳中微生物污染程度檢測與分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014(7)：209-210.

[4]夏冬.如何控制原料奶中微生物污染[J].中國乳業(yè)，2003(9)：25-26.

Investigation and Analysis of Microbial Contamination of Raw Milk from Parts of Milk Station in Yining City,Xinjiang

CHEN Xia1,2,Bierlaixiken Saidouli2,ZHANG Hai-lan2,KUANG Ling1*et al

(1.Xinjiang Agricultural University,Urumqi,Xinjiang 830052;2.Yili Vocational and Technical College,Yili,Xinjiang 835000)

[Objective]The aim was to study major microorganism content in raw milk in Yining City,provide reference for quality detection in sales link of bulk raw milk.[Method]Collecting samples from milk stations in 8 districts of Yining City,the changes of total bacterial colonies,total coliform groups,total spores and heat-resistant spores were studied.[Result]During June 2014-May 2015,color,taste and smell of raw milk from 8 milk stations in Yining were normal,and there was no block,precipitation and visible foreign matter phenomenon;The content of total bacterial colonies,total coliform groups,total spores and heat-resistant spores were 3.08×105-8.48×105CFU/mL,1.5×105-8.1×105MPN/L,21-75 CFU/mL and 3-8 CFU/mL,respectively.The content of microorganisms in fresh milk sold by the scattered milk households was obviously higher than that of the milk station.[Conclusion]The indicators of main microorganisms content in raw milk from some milk stations in Yining City are in line with national standards,reflecting the overall level of health management and control of fresh milk in Yining City is relative high.

Raw milk in milk station;Microbiological contamination;Detection

伊犁哈薩克自治州科技計劃項目(YZ201201026)。

陳霞(1984- )，女，江蘇溧陽人，助教，在讀碩士，從事動物產(chǎn)品質(zhì)量安全研究。*通訊作者，教授，博士，從事獸醫(yī)臨床的教學和研究工作。

2016-08-03

TS 252.7

A

0517-6611(2016)25-048-03