銅綠假單胞菌耐藥性分析及金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測

內(nèi)蒙古婦幼保健院（010020）史今凡

銅綠假單胞菌是一種條件致病菌，隨著抗菌藥物的廣泛應用，銅綠假單胞菌表現(xiàn)出多種抗菌藥物的天然或獲得性耐藥[1]。及時了解銅綠假單胞菌的耐藥及金屬β-內(nèi)酰胺酶的檢測情況，對指導臨床抗生素的合理使用尤為重要，因此我們擬對2015年1月～2015年10月我院檢驗科分離出的200株銅綠假單胞菌進行分析，將銅綠假單胞菌耐藥性情況及金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測結果報道如下。

1 方法

1.1 細菌選擇 收集2015年1月～2015年10月我院檢驗科分離出的銅綠假單胞菌，采取法國梅里埃公司的VITEK2 COMPACT全自動細菌鑒定儀及配套的藥敏卡。以銅綠假單胞菌ATCC 27853為標準質(zhì)控菌株，藥敏試驗采用Kirby-Bauer紙片擴散法，藥敏結果參照美國臨床和實驗室標準化委員會頒布的標準判定。金屬β-內(nèi)酰胺酶采用紙片協(xié)同法進行測定。將待測菌涂布于瓊脂平板，將2張亞胺培南紙片貼在平皿上，其中一張亞胺培南紙片上加入EDTA，抑菌圈直徑較亞胺培南紙片增加6cm為陽性。

1.2 質(zhì)控菌株 大腸埃希菌ATCC25922、VIM-2型金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性的PA。

1.3 質(zhì)量控制 要求參與本次研究的臨床微生物室工作人員有扎實的理論基礎，參加國家臨床實驗室質(zhì)控考核并合格，并進行統(tǒng)一技術培訓。

1.4 觀察指標 根據(jù)金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測結果，將銅綠假單胞菌分為金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性組（100株）與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性組（100株）。①分析200株銅綠假單胞菌的標本來源。②對比金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結果。

1.5 統(tǒng)計學 研究數(shù)據(jù)錄入 SPSS18.0分析系統(tǒng)，計數(shù)資料采用（n，%）表示，用χ2檢驗法，當P＜0.05，判斷有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 200株銅綠假單胞菌標本來源 200株銅綠假單胞菌標本來源中以呼吸道標本來源最多、其次為尿液、引流管。其中呼吸道標本75株，黏液標本42株，引流管標本31株，血液標本28株，其他標本24株。

2.2 金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌藥敏結果 金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結果結果比較有差異（P＜0.05），見附表。

附表 金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌藥敏結果

3 討論

銅綠假單胞菌是人體最重要的條件致病之一，可引起機體多系統(tǒng)、多臟器、多部位感染。有研究顯示ICU為銅綠假單胞菌感染的高?？剖遥饕cICU患者抵抗力低，基礎疾病多、病情危重有關。

銅綠假單胞菌的耐藥復雜，與以下途徑有關：①產(chǎn)生抗菌活性酶，如β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷鈍化酶、頭孢菌素酶、超光譜β-內(nèi)酰胺酶、金屬β-內(nèi)酰胺酶等；②通過改變DNA回旋酶和DNA拓撲異構酶IV，使喹諾酮類抗菌藥物作用的靶目標發(fā)生改變。③通過改變整合酶基因編碼的整合酶不斷地從周圍環(huán)境中捕獲和積累耐藥基因盒，形成巨大的耐藥基因多基因座。④改變細胞壁的內(nèi)膜和外膜，使膜通透性降低，尤其是造成外膜微孔蛋白 OprD2的缺乏，可引發(fā)對亞胺培南耐藥[2]。⑤定植的細菌經(jīng)繁殖增多后，使生物被膜結構成熟，促進細菌黏附到物體表面并維持細菌的群落狀態(tài)；⑥主動外排系統(tǒng)形成，以MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEFOprN、MexXY-OprM最為多見，隨時將抗菌藥物泵出和排出體外。

金屬β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生是引起銅綠假單胞菌耐藥的重要機制。同樣本次研究發(fā)現(xiàn)金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結果結果比較有差異（P＜0.05）。金屬β-內(nèi)酰胺酶分為4類：①ESBLs 我國銅綠假單胞的ESBLs基因型以TEM-10、TEM-12、CTX-M型較多見，能水解臨床上大部分第三代頭孢菌素。②MBLs，有IMP、VIM、GIM、SPM、GIM、AIM型，能水解除單環(huán)類以外的所有β-內(nèi)酰胺類藥物的能力，常對氨基糖苷類協(xié)同耐受。③AmpC酶，能水解第一到第三代頭孢菌素、單環(huán)類抗生素，且不能被克拉維酸、他唑巴坦、舒巴坦等酶抑制劑所抑制。④OXA型酶，可以水解青霉素G，氨芐西林、阿莫西林、氯唑西林、亞胺培南等，但不能水解氨基噻吩、頭孢菌素和單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素。

綜上所述，本次研究認為金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性的銅綠假單胞菌耐藥性強，耐藥機制復雜，臨床中醫(yī)生應該及時根據(jù)細菌藥敏結果調(diào)整抗菌藥物。