中空纖維離心超濾-高效液相色譜法測(cè)定雙氯芬酸鈉凝膠含量

豆妮娜，冉叢聰，趙可新，蔣 曄*

(1.中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院藥學(xué)部，河北廊坊 065000；2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，河北石家莊 050017)

凝膠類制劑作為近年來(lái)興起的一種藥物新劑型，具有易吸收、無(wú)刺激、不污染衣物等突出的優(yōu)勢(shì)，其制備和應(yīng)用范圍越來(lái)越廣泛[1 - 3]。凝膠劑的基質(zhì)通常采用一些新型的高分子藥用輔料如卡波姆、羧甲基纖維素鈉等[4]。這些大分子物質(zhì)的存在對(duì)于其制劑質(zhì)量、制劑性能提高的同時(shí)，在色譜分析時(shí)易附著在色譜柱中，從而會(huì)降低分析準(zhǔn)確度。因此在分析測(cè)定前，樣品的前處理是至關(guān)重要的過(guò)程。傳統(tǒng)的去除大分子物質(zhì)的方法有大孔樹(shù)脂法、離心沉淀法等[5,6]，但以卡波姆為基質(zhì)的凝膠劑在水溶液和有機(jī)溶劑中均有較好的溶解度，使得待測(cè)樣品溶液中含有大量大分子物質(zhì)，傳統(tǒng)的樣品前處理很難將小分子藥物從基質(zhì)分離出來(lái)。

本文采用中空纖維離心超濾技術(shù)處理凝膠類制劑樣品，去除了高分子凝膠輔料，有效分離出小分子藥物，并結(jié)合高效液相色譜(HPLC)法直接進(jìn)行含量分析。將所建立的方法用于雙氯芬酸鈉凝膠的含量分析，簡(jiǎn)便、快速、可靠地反映了藥物制劑質(zhì)量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀，包括L-6200A ternary泵(日本，日立公司)，785A紫外檢測(cè)器(美國(guó))，HW-2000色譜工作站；聚偏氟乙烯、聚砜中空纖維(壁厚150 μm，內(nèi)徑1 000 μm，截留分子量10 kDa，天津北奧膜工程技術(shù)有限公司)；LXJ-64-01離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。

雙氯芬酸鈉對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院提供)；雙氯芬酸鈉凝膠(海南全星制藥有限公司，產(chǎn)品批號(hào)20140104，規(guī)格15 g:0.15 g)；甲醇(色譜純，DIKMA科技有限公司)；冰乙酸為分析純；水為重蒸水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Phenomenexc C18柱(250×4.6 mm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%乙酸溶液(體積比85∶15)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

1.3 溶液的配制

1.3.1對(duì)照品溶液精密稱取雙氯芬酸鈉對(duì)照品10.2 mg于1 mL安培瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得10.2 mg·mL-1對(duì)照品貯備液。精密移取對(duì)照品貯備液0.5 mL置10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，得510 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。精密移取510 μg·mL-1對(duì)照品溶液適量置10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，得濃度為5.10、10.2、15.3、20.4、25.5、30.6 μg·mL-1的系列對(duì)照品工作溶液。

1.3.2供試品溶液精密稱取供試品1.041 g(含雙氯芬酸鈉約10 mg)于10 mL容量瓶中，然后加入0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。將中空纖維切成約15 cm的小段，在水中超聲清洗15 min后，晾干，備用。將兩個(gè)注射用針頭穿過(guò)橡膠塞，固定已處理的中空纖維并置于10 mL離心管中，取適量供試品溶液于離心管，5 000 r·min-1離心10 min，取出中空纖維，收集腔內(nèi)溶液，用流動(dòng)相稀釋，得約20.0 μg·mL-1的供試品溶液。

1.3.3空白溶液精密稱取空白輔料1.032 g于10 mL容量瓶中，用0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。中空纖維離心超濾法同上制備空白溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

參照文獻(xiàn)報(bào)道[7 - 9]測(cè)定雙氯芬酸鈉的色譜條件，對(duì)流動(dòng)相體系調(diào)整后，確定為甲醇-0.1%乙酸溶液(體積比85∶15)。在此色譜條件下，雙氯芬酸鈉保留時(shí)間為7.8 min。

2.2 樣品前處理方法的選擇

凝膠類制劑中的大分子主要來(lái)源于輔料中的卡波姆等，卡波姆在樣品稀釋液中以膠體形式存在，文獻(xiàn)報(bào)道[9 - 11]通常采用直接稀釋樣品、離心沉淀或過(guò)濾法將小分子物質(zhì)與高分子輔料或基質(zhì)分離，但是很難達(dá)到理想的分離效果。本研究采用中空纖維離心超濾法對(duì)凝膠劑進(jìn)行樣品前處理，利用中空纖維膜對(duì)大分子截留的原理，有效去除大分子的干擾，并避免了對(duì)色譜儀的損害。

2.3 溶劑的選擇

實(shí)驗(yàn)考察了水、流動(dòng)相、0.1 mol·L-1NaOH溶液不同稀釋溶劑對(duì)測(cè)定的影響，結(jié)果表明采用NaOH溶液作為溶劑，在堿性環(huán)境中可保證雙氯芬酸鈉以離子的形式完全溶解。因此，最終選擇0.1 mol·L-1NaOH溶液為溶劑，樣品含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.4 中空纖維膜的選擇

考察了在中空纖維離心超濾分離過(guò)程中不同膜材對(duì)待測(cè)物的非特異性吸附(NSB)，進(jìn)而選擇合適的中空纖維膜。本文以20.4 μg·mL-1的對(duì)照品溶液研究了其在聚偏氟乙烯和聚砜?jī)煞N不同中空纖維膜材中的回收率，結(jié)果表明以聚偏氟乙烯中空纖維膜進(jìn)行超濾分離時(shí)，回收率可達(dá)100%，而聚砜中空纖維膜對(duì)待測(cè)成分存在明顯的NSB現(xiàn)象，回收率僅為57%。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇聚偏氟乙烯膜材對(duì)樣品進(jìn)行中空纖維離心超濾處理。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別取空白溶液、雙氯芬酸鈉對(duì)照品溶液(20.4 μg·mL-1)、供試品溶液，在1.2節(jié)色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖(如圖1A～C)。雙氯芬酸鈉的出峰時(shí)間為7.8 min，分離度良好，空白輔料不干擾測(cè)定，理論塔板數(shù)以雙氯芬酸鈉計(jì)算不低于3 000N/m。結(jié)果表明，色譜系統(tǒng)的適應(yīng)性良好。

2.6 校正曲線

取1.3節(jié)下系列對(duì)照品工作液，在1.2節(jié)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以峰面積(A)對(duì)樣品的濃度(c)進(jìn)行線性回歸，所得方程為：A=5.90×104c+1.73×104(r=0.9998)。結(jié)果表明，雙氯芬酸鈉在5.10～30.6 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度與重復(fù)性試驗(yàn)

取1.3節(jié)下對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，色譜峰面積，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.2%，表明方法精密度良好。取同批雙氯芬酸鈉凝膠樣品，按1.3節(jié)下方法配制6份供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，其色譜峰面積的RSD為1.4%。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取空白輔料約1 g，置10 mL容量瓶中，精密量取10.2 mg·mL-1對(duì)照品貯備液0.8、1.0、1.2 mL，用0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解，并稀釋至刻度，制備高、中、低三個(gè)濃度的溶液，每個(gè)濃度三份，按1.3節(jié)下方法配制供試品溶液。在1.2節(jié)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 雙氯芬酸鈉的回收率測(cè)定結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定

取雙氯芬酸鈉凝膠樣品，按“1.3”節(jié)下方法配制成供試品溶液，在“1.2”節(jié)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中雙氯芬酸鈉含量分別為樣品標(biāo)示量的99.1%、98.9%和99.4%。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本文所建立的中空纖維離心超濾樣品前處理法應(yīng)用于以卡波姆為基質(zhì)的凝膠類制劑，可簡(jiǎn)單快速地分離出小分子藥物，空白輔料不干擾測(cè)定，提高了方法的分析準(zhǔn)確性，為凝膠類制劑中高分子輔料的去除提供了簡(jiǎn)便可靠的前處理手段。