羊肚菌菌絲體富硒條件優(yōu)化及其硒多糖抗氧化活性研究

冮潔，麥海美，解彬，韓琳，冀春陽，曹蕾

(大連民族大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 遼寧 大連，116600)

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羊肚菌菌絲體富硒條件優(yōu)化及其硒多糖抗氧化活性研究

冮潔*，麥海美，解彬，韓琳，冀春陽，曹蕾

(大連民族大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 遼寧 大連，116600)

對(duì)羊肚菌菌絲體液體深層發(fā)酵富硒條件進(jìn)行優(yōu)化，考察培養(yǎng)基中硒濃度、溫度、裝液量和pH值對(duì)富硒率的影響。采用Fenton 法、鄰苯三酚自氧化法和DPPH(1，1-二苯基-2-苦基肼)還原法對(duì)羊肚菌菌絲體多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行了研究。羊肚菌菌絲體富硒的適宜培養(yǎng)條件為：亞硒酸鈉質(zhì)量濃度為10 mg/L，溫度25 ℃，裝液量100 mL/250 mL，初始pH值7。在此條件下，富硒率最大達(dá)9.10%。羊肚菌菌絲體多糖和羊肚菌菌絲體硒多糖清除羥自由基(·OH)IC50分別為：0.62 mg/mL和0.42 mg/mL；清除超氧陰離子(O2-·)IC50分別為：0.85 mg/mL和0.59 mg/mL；清除DPPH自由基IC50分別為：0.66 mg/mL和0.49 mg/mL。羊肚菌菌絲體多糖具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，且隨著多糖濃度的增大其抗氧化活性逐漸增強(qiáng)，羊肚菌菌絲體硒多糖抗氧化作用更強(qiáng)。

羊肚菌；菌絲體多糖；富硒率；抗氧化作用

羊肚菌(Morchellaesculenta)，隸屬子囊菌門(Ascomycota)、盤菌綱(Pezizomycetes)、盤菌目(Pezizales)、羊肚菌科(Morchellaceae)，是一種名貴野生食藥用真菌[1-2]。羊肚菌中重要的功效成分是其多糖。羊肚菌多糖對(duì)小鼠的肝臟損傷有明顯保護(hù)作用[3]；能夠顯著提高人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖活力，促進(jìn)膠原蛋白的合成，延緩細(xì)胞衰老[4]；具有提高小鼠腦SOD的活性、減少脂褐質(zhì)的沉積等功效[5]；對(duì)胃潰瘍[6]、胃黏膜[7]、輻射危害[8]具有保護(hù)作用；能顯著抑制S-180腫瘤的生長(zhǎng)[9]；具有抗氧化、抗炎癥和抗腫瘤的作用[10-11]。但羊肚菌大規(guī)模人工栽培目前仍較難實(shí)現(xiàn)[12]。羊肚菌菌絲體液體培養(yǎng)時(shí)，生長(zhǎng)速度快，高效經(jīng)濟(jì)，適合工業(yè)化生產(chǎn)，且液體發(fā)酵培養(yǎng)的食用菌菌絲體與其子實(shí)體在化學(xué)組成上、生理功能上都很相似[13]。因此，采用菌絲體的液體發(fā)酵培養(yǎng)方法是目前主要培養(yǎng)羊肚菌的方法[14]。硒是人體必需的微量元素，與人類健康有密切關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn)貧血、大骨節(jié)病、糖尿病、癌癥等疾病都與人體內(nèi)缺乏硒元素相關(guān)[15]。從地理?xiàng)l件分析，我國是一個(gè)缺硒大國，糧食等天然食物中硒含量較低，尤其是華北、東北、西北地區(qū)屬于嚴(yán)重硒匱乏地區(qū)，開發(fā)高效的富硒食品具有重要的意義[16]。多糖和硒結(jié)合成為硒多糖，是一種多糖有機(jī)硒化合物，其生物藥理活性普遍高于多糖和硒，更容易被機(jī)體吸收和利用[17]。食用菌因具有較強(qiáng)的富硒能力，通過菌絲細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝，使無機(jī)硒安全有效地轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒多糖，同時(shí)營(yíng)養(yǎng)成分因富硒得到改善[18-19]。羊肚菌對(duì)硒具有較強(qiáng)的的富集和轉(zhuǎn)化作用[20-21]。羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)后獲得的硒多糖的抗氧化性強(qiáng)于普通多糖[22]。香菇富硒培養(yǎng)的菌絲體提取物抗氧化、清除自由基的活性顯著增加[23]。硒與食用菌蛋白之間在清除自由基方面存在協(xié)同作用[24]。以金針菇為載體進(jìn)行硒的生物有機(jī)化不僅成本低，含硒量高，而且硒的主要存在形態(tài)安全無毒、人體利用率高[25]。本文對(duì)羊肚菌菌絲體液體深層培養(yǎng)富硒條件進(jìn)行了優(yōu)化，并研究其硒多糖的抗氧化活性。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

羊肚菌(Morchellaesculenta)，遼寧朝陽食用菌研究所提供；3,3’-二氨基聯(lián)苯胺，阿拉丁試劑(上海)有限公司；二苯代苦味?；杂苫?DPPH)，美國Sigma公司；馬鈴薯，市購；亞硒酸鈉、苯酚、H2SO4、HNO3、NaOH、HCl、甲苯、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙醇、Tris-HCl、硫酸亞鐵銨、鄰二氮菲、VC、鄰苯三酚、MgSO4·7H2O、葡萄糖、瓊脂粉、KH2PO4等均為分析純?cè)噭?/p>

1.2實(shí)驗(yàn)儀器

PL203電子精密天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；HYG-3多功能搖床，杰瑞爾電器有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，亞榮生化儀器廠；UV2800型紫外可見分光光度計(jì)，尤尼柯(上海)儀器有限公司；GRP-9080恒溫培養(yǎng)箱，森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；TGL-16C高速臺(tái)式離心機(jī)，江蘇省興化市分析儀器廠；KDB-III COD微波消解儀，青島科迪博電子科技有限公司；MLS-3750高壓滅菌鍋，日本三洋；SW-CJ-1C無菌操作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1硒含量的測(cè)定

采用3,3’- 二氨基聯(lián)苯胺比色法[26]。

(1)

式中：Wi為富硒菌絲體硒含量，μg/g，W0為空白(不添加硒)菌絲體硒含量，μg/g，Mi為富硒菌絲體干重，g/100 mL，Wj為培養(yǎng)基內(nèi)添加的初始硒含量，μg/100 mL。

1.3.2多糖的提取及測(cè)定

熱水浸提法提取多糖：稱取干燥粉碎后的羊肚菌菌絲體樣品5.0 g，加入120 mL的去離子水，置于250 mL錐形瓶中，在90 ℃的水浴鍋中保溫120 min，殘?jiān)貜?fù)提1次。合并上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至適當(dāng)體積，加3倍體積的無水乙醇進(jìn)行醇沉，4 ℃靜置過夜，3 500 r/min離心20 min，棄去上清液，沉淀用無水乙醇洗2次后，置于60 ℃烘干，即為粗多糖。

(2)

將粗多糖用蒸餾水配制成1 mg/mL的樣品溶液，采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量[27]。

1.3.3羊肚菌菌種制備

培養(yǎng)基：斜面培養(yǎng)基(綜合PDA培養(yǎng)基)：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、KH2PO41.5，MgSO41.0，瓊脂粉20 g、水1 000 mL，pH 自然。液體種子和發(fā)酵培養(yǎng)基：不加瓊脂的綜合PDA培養(yǎng)基。

菌種活化：將保存菌種用接種針接入斜面培養(yǎng)基中，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d。

液體菌種培養(yǎng)：將活化的斜面菌種4塊(黃豆粒大小)接種到裝有100 mL液體PDA綜合培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，置25 ℃，150 r/min恒溫振蕩培養(yǎng)5 d。

1.3.4羊肚菌菌絲體液體培養(yǎng)

將液體菌種接入裝100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，接種量為10%， 25 ℃，150 r/min振蕩培養(yǎng)7 d。培養(yǎng)結(jié)束后將菌絲體過濾，蒸餾水洗滌2遍，60 ℃烘干，稱重后測(cè)定菌絲體中硒含量。

1.3.5單因素法優(yōu)化羊肚菌菌絲體的富硒培養(yǎng)條件

硒濃度的選擇：向PDA液體培養(yǎng)基中加入亞硒酸鈉制備含不同硒濃度的培養(yǎng)基，硒濃度(mg/L)分別為：5，10，20，30，40，50，60，70，80，以不加亞硒酸鈉為空白對(duì)照。

培養(yǎng)溫度的選擇：分別取22，25，28 ℃。

裝液量的選擇：分別取50，100，150 mL于250 mL三角瓶中。

pH的選擇：分別取5，6，7，8，9。

1.3.6正交試驗(yàn)優(yōu)化羊肚菌的富硒培養(yǎng)條件

采用4因素3水平正交試驗(yàn)優(yōu)化羊肚菌的富硒培養(yǎng)條件。分別考察培養(yǎng)基中硒濃度、pH值、裝液量和溫度4方面對(duì)羊肚菌富硒率的影響。

表1　羊肚菌富硒培養(yǎng)條件正交試驗(yàn)因素水平表

1.3.7羊肚菌菌絲體多糖抗氧化性的研究

1.3.7.1清除羥自由基(·OH)試驗(yàn)

取8支10 mL刻度管，依次加入1 .0 mL的Tris-HCl溶液(pH 8.2)，0.3 mL硫酸亞鐵銨(5.0 mmol/L)和0.3 mL的鄰二氮菲溶液(7.5 mmol/L)，1號(hào)為空白，3～7號(hào)管分別加入0.2，0.4，0.6，0.8 mL和 1.0 mL 的樣品溶液(1 mg/mL)，8號(hào)管加入1.0 mL的 VC溶液(0.2 mg/mL)，最后向 2～8號(hào)管分別加入1.0 mL H2O2溶液(7.5 mmol/L)，定容至刻度。在37℃水浴鍋中反應(yīng) 1.0 h 。以Tris-HCl 溶液調(diào)零，在510 nm 處測(cè)吸光度A，計(jì)算對(duì)·OH 的清除率。

(3)

式中：A1和A2分別是體系不加 H2O2及加入 H2O2的吸光值;A3是加入樣品溶液以后的吸光值。

1.3.7.2抑制超氧陰離子(O2-·)試驗(yàn)

取5支10 mL刻度管，均加入4.5 mL的Tris-HCl緩沖液(0.05 mol/L)，置于25 ℃水浴中預(yù)熱25 min，分別加入0.1 mL不同濃度的樣品溶液和0.4 mL鄰苯三酚溶液(0.5 mmol/L)，于25 ℃水浴中反應(yīng)4.0 min，加入8.0 mol/L HCl 2滴終止反應(yīng)。以Tris-HCl溶液調(diào)零，在320 nm 處測(cè)定吸光度(Ai)，空白對(duì)照組以相同體積的蒸餾水代替。

(4)

式中：A0為空白的吸光度；Ai為多糖的吸光度。

1.3.7.3清除DPPH·試驗(yàn)

吸取樣品2.0 mL，加入2.0 mL DPPH溶液(0.2 mmol/L)，搖勻，避光靜置30 min。以無水乙醇調(diào)零，測(cè)定 517 nm 波長(zhǎng)處的吸光度(A樣品)。測(cè)定樣品2.0 mL與無水乙醇2.0 mL混合液在517 nm 處的吸光度(A對(duì)照)，再測(cè)定2.0 mL DPPH溶液與2.0 mL無水乙醇在517 nm波長(zhǎng)處的吸光度(A空白)。計(jì)算DPPH·的清除率。

(5)

IC50值是清除率為50%時(shí)對(duì)應(yīng)的樣品濃度。

1.4數(shù)據(jù)分析

每個(gè)試驗(yàn)處理3次重復(fù)，用Microsoft Excel軟件計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2　結(jié)果與分析

2.1羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)條件優(yōu)化的單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)適宜硒濃度的選擇

結(jié)果如表2所示，硒的濃度(5～10 mg/L)范圍內(nèi)促進(jìn)菌絲體生長(zhǎng)，在高濃度(大于10 mg/L)范圍內(nèi)則抑制菌絲體生長(zhǎng)，硒對(duì)羊肚菌菌絲體具有促進(jìn)生長(zhǎng)與抑制生長(zhǎng)的雙重性。硒濃度為5 mg/L時(shí)，菌絲體生物量為7.48 g/L，硒含量為0.07 mg/g，富硒率為7.48%；硒濃度為10 mg/L時(shí)，菌絲體生物量為6.72 g/L，硒含量為0.11mg/g，富硒率為6.05%。雖然硒濃度為5 mg/L時(shí)的富硒率高于硒濃度為10 mg/L時(shí)，但考慮到菌絲體中的硒含量，選擇的硒濃度為10 mg/L。

表2　羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)適宜硒濃度的選擇

2.1.2羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)適宜溫度的選擇

培養(yǎng)基中硒濃度為10 mg/L，將已接種好的三角瓶置于18、22、25、28 ℃培養(yǎng)，測(cè)定菌絲體生物量和硒含量，計(jì)算富硒率，結(jié)果如表3所示。培養(yǎng)溫度對(duì)菌絲體硒含量的影響效果不顯著，但對(duì)菌絲體生物量的影響比較大，羊肚菌菌絲體干重隨溫度的升高呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，且溫度為25 ℃時(shí)菌絲體生物量和富硒率最大。因此，選擇25 ℃為最佳培養(yǎng)溫度。

表3　羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)適宜溫度的選擇

2.1.3羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)適宜裝液量的選擇

裝液量影響菌絲體液體培養(yǎng)過程中發(fā)酵液的溶氧狀態(tài)，因此可以考察該菌生長(zhǎng)和富硒對(duì)氧的需求程度。裝液量對(duì)羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)的影響(表4)，裝液量對(duì)菌絲體硒含量的影響效果不顯著， 但對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響效果顯著。羊肚菌菌絲體在250 mL三角瓶中裝液量為100 mL時(shí)，菌絲干重達(dá)到最大值7.85 g/L，此時(shí)菌絲體的富硒率為7.85%。從裝液量來看，并不是溶氧越大越有利于羊肚菌菌絲生長(zhǎng)和富硒。

表4　羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)適宜裝液量的選擇

2.1.4羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)適宜pH的選擇

培養(yǎng)基配制后滅菌前，自然pH值為6.85，pH對(duì)羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)的影響結(jié)果如表5所示。羊肚菌富硒培養(yǎng)時(shí)，初始pH值小于6或大于7菌絲體生長(zhǎng)都受到抑制，當(dāng)pH為 7.0以上時(shí)， 菌體干重開始急劇下降，pH在6～7范圍內(nèi)比較適合菌絲體生長(zhǎng)。當(dāng)pH為7時(shí)菌絲體生物量最高，pH為7時(shí)富硒率最高。因此，初步選擇初始pH值為7。

表5　pH值對(duì)羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)的影響

2.2正交試驗(yàn)優(yōu)化羊肚菌菌絲體富硒的培養(yǎng)條件

優(yōu)化得到的羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)條件方案為：A2B3C2D2，即培養(yǎng)基中硒濃度10 mg/L、pH值7.0、裝液量100 mL/250 mL、溫度25 ℃。實(shí)驗(yàn)因素對(duì)羊肚菌菌絲體富硒影響的大小順序?yàn)椋何鴿舛醛儨囟醛冄b液量﹥pH值。經(jīng)方差分析，正交試驗(yàn)的4個(gè)因素在所選實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，對(duì)富硒率無顯著影響。通過驗(yàn)證試驗(yàn)，在上述優(yōu)化的適宜條件下得到菌絲體生物量為8.27 g/L、硒含量0.13 mg/g，富硒率為9.10%，比優(yōu)化前的富硒率6.05%提高50.41%。

表6　羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)條件正交試驗(yàn)結(jié)果

2.3富硒羊肚菌菌絲體多糖抗氧化性的研究

2.3.1羊肚菌菌絲體多糖提取及富硒率的測(cè)定

采用液體深層發(fā)酵技術(shù)進(jìn)行羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)，其菌絲體多糖提取和富硒率計(jì)算結(jié)果如表7所示。羊肚菌菌絲體多糖的純度和提取率分別為88.07 %和10.94 %，硒多糖的純度和提取率分別為 90.18 %和11.64 %，在相同的培養(yǎng)條件下得到硒多糖的量比羊肚菌菌絲體多糖的量高6.40 %，表明羊肚菌菌絲體富硒培養(yǎng)，在一定程度上可以促進(jìn)菌絲體產(chǎn)糖，且提高多糖的提取率。

表7　羊肚菌菌絲體多糖提取

2.3.2羊肚菌菌絲體多糖清除羥自由基(·OH)

通過H2O2/Fe2+體系測(cè)定羊肚菌富硒菌絲體多糖和沒加硒的菌絲體多糖清除羥自由基(·OH)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖2所示。Vc的線性回歸方程為：y=52.5x+31.2(R2=0.990 9)，IC50為0.36 mg/mL，硒多糖的線性回歸方程為：y=43.35x+31.735(R2=0.986 3)，IC50為0.42 mg/mL，羊肚菌多糖的線性回歸方程為：y=51.3x+18.33(R2=0.936 4)，IC50為0.62 mg/mL。對(duì)羥自由基的清除作用大小為：Vc>羊肚菌富硒菌絲體多糖>羊肚菌菌絲體多糖。在一定的多糖濃度范圍內(nèi)，3者的羥自由基清除能力與樣品多糖濃度成正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)表明羊肚菌富硒后，其多糖的羥自由基清除能力增強(qiáng)，羊肚菌富硒菌絲體多糖清除·OH的活性比羊肚菌菌絲體多糖提高52.38 %。

圖2　羊肚菌菌絲體多糖對(duì)·OH清除率Fig.2　Scavenging rates of Morchella esculenta mycelium polysaccharides on hydroxyl free radicals

2.3.3羊肚菌菌絲體多糖清除超氧陰離子(O2-·)

通過測(cè)定Vc、羊肚菌富硒菌絲體多糖和沒添加硒源的菌絲體多糖對(duì)鄰苯三酚的自氧化抑制作用來表明它們清除O2-·活性，結(jié)果如圖3所示。

圖3　羊肚菌菌絲體多糖對(duì)O2-·的清除率Fig.3　Scavenging rates of Morchella esculenta mycelium polysaccharides on superoxide anion free radicals

由圖3可見，清除O2-·活性，Vc的線性回歸方程為：y=59.55x+26.855(R2= 0.991 8)，IC50為0.39 mg/mL，硒多糖的線性回歸方程為：y=59.9x+14.69(R2=0.993 6)，IC50為0.59 mg/mL，羊肚菌多糖的線性回歸方程為：y=47.65x+9.515(R2=0.967 6)，IC50為0.85 mg/mL，對(duì)O2-·清除作用大小為：Vc >羊肚菌富硒菌絲體多糖 > 羊肚菌菌絲體多糖。羊肚菌富硒菌絲體多糖清除O2-·活性比羊肚菌菌絲體多糖提高44.07 %。

2.3.4羊肚菌菌絲體多糖清除DPPH·

DPPH在有機(jī)溶劑中呈現(xiàn)深紫色，通過測(cè)定顏色的褪色程度來評(píng)價(jià)多糖對(duì)DPPH·的清除效果，其測(cè)定結(jié)果如圖4所示。

圖4　羊肚菌菌絲體多糖對(duì)DPPH·的清除率Fig.4　Scavenging rates of Morchella esculenta mycelium polysaccharides on DPPH free radicals

由圖4清除DPPH·實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Vc對(duì)DPPH·的清除率的線性回歸方程為：y=72.15x+27.715(R2= 0.956 1)，IC50為0.31 mg/mL，硒多糖的線性回歸方程為：y=39.4x+30.74(R2=0.998 6)，IC50為0.49 mg/mL，羊肚菌多糖的線性回歸方程為：y=37.1x+25.36(R2=0.972 8)，IC50為0.66 mg/mL。對(duì)DPPH·清除作用大小為：Vc >羊肚菌富硒菌絲體多糖 > 羊肚菌菌絲體多糖。羊肚菌富硒菌絲體多糖清除DPPH·活性比羊肚菌菌絲體多糖提高34.69 %。

3　結(jié)論

羊肚菌菌絲體具有較強(qiáng)的富硒能力，通過優(yōu)化獲得的適宜富硒條件為：硒濃度10 mg/L、pH值7.0、裝液量100 mL/250 mL、溫度25 ℃。菌絲體中硒含量可達(dá)0.13 mg/g，富硒率為9.10%，提高了50.41%。通過清除·OH、O2-·和DPPH·證明了羊肚菌菌絲體多糖具有較強(qiáng)的體外抗氧化性，由于多糖和硒的雙重作用，通過富硒培養(yǎng)獲得的羊肚菌富硒菌絲體多糖比羊肚菌菌絲體多糖具有更強(qiáng)的體外抗氧化活性，其中清除·OH的活性提高了52.38 %，清除O2-·活性提高了44.07 %，清除DPPH·活性提高了34.69%。富硒羊肚菌多糖可作為天然抗氧化劑和補(bǔ)硒制劑開發(fā)利用。

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Optimization of Se-rich culture conditions and antioxidant activities of polysaccharides fromMorchellaesculentamycelium

GANG Jie*,MA Hai-mei,XIE Bin,HAN Lin,JI Chun-yang,CAO Lei

(College of Life Sciences,Dalian Nationalities University,Dalian 116600，China)

The cultivation conditions for a selenium-accumulating ofMorchellaesculentamycelium was optimized using submerged liquid culture. The influences of selenium concentration,temperature,liquid volume,pH value of cultivation medium on selenium accumulation rate were studied. The results showed that the optimum conditions were as follows: the selenium concentration in cultivation medium was 10 mg/L,temperature was 25 ℃,liquid volume was 100 mL/250 mL and initial pH was 7.0. Under such conditions,the selenium-rich rate can reach 9.10%. The crude polysaccharides were isolated fromMorchellaesculentamycelium,and their antioxidant abilities in scavenging hydroxyl radical, inhibiting superoxide anion, scavenging DPPH radical were studied. The IC50values of ·OH clearance forMorchellaesculentamycelium polysaccharide and mycelium selenium-accumulating polysaccharide were 0.62 mg/mL and 0.42 mg/mL respectively. The IC50values of O2-·clearance were 0.85 mg/mL and 0.59 mg/mL respectively. The IC50values of DPPH· clearance were 0.66 mg/mL and 0.49 mg/mL, respectively.Morchellaesculentamycelium polysaccharides exerted antioxidant activities in a concentration-dependent manner, and the antioxidant activities of mycelium selenium-rich polysaccharides were higher than those of mycelium polysaccharides without selenium-rich culture.

Morchellaesculenta; mycelium polysaccharide; selenium accumulation rate; antioxidant activity

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201609021

博士，教授(本文通訊作者， E-mial:gangjie@dlnu.edu.cn)。

遼寧省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2015020676)；財(cái)政專項(xiàng)-中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)資助項(xiàng)目(DC201501020301)

2016-02-26，改回日期：2016-05-23