半乳凝素-3在宮頸上皮瘤變和宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)

唐　瑤， 何　麗， 李玨杉

(成都市婦女兒童中心醫(yī)院 婦科， 四川 成都　610000)

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半乳凝素-3在宮頸上皮瘤變和宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)

唐瑤， 何麗， 李玨杉

(成都市婦女兒童中心醫(yī)院 婦科， 四川 成都610000)

目的： 探討半乳凝素-3(Galectin-3)在宮頸上皮瘤變(CIN)、宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其意義。方法： 選擇80例宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本、60例CIN標(biāo)本及20例正常宮頸組織標(biāo)本作為研究對象，采用免疫組化法檢測組織中Galectin-3蛋白表達(dá)，觀察不同CIN分級及宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者的分化程度、病灶大小、是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移、年齡及臨床分期與Galectin-3蛋白陽性表達(dá)率的關(guān)系。結(jié)果： 3組Galectin-3蛋白陽性表達(dá)率比較，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中顯著高于CIN和正常宮頸組織(P<0.05)，CIN組織和正常宮頸組織差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；不同CIN分級患者組織中Galectin-3蛋白陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；宮頸鱗癌組織中Galectin-3蛋白陽性表達(dá)率在低分化、病灶≥2cm及癌細(xì)胞未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移患者中顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在不同年齡和不同臨床分期患者間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論： 宮頸鱗癌組織中Galectin-3蛋白陽性表達(dá)率顯著增高，與患者的癌細(xì)胞的分化程度、病灶大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

半乳凝素-3； 宮頸上皮瘤變； 宮頸鱗狀細(xì)胞癌； 免疫組織化學(xué)； 淋巴轉(zhuǎn)移； 腫瘤分期

[Abstract]Objective: To investigate the expression and significance of -3 (Galectin-3) in cervical squamous cell carcinoma (CIN) and cervical squamous cell carcinoma (SCC). Methods： 80 cases of cervical squamous cell carcinoma tissue specimens and 60 cases of CIN tissues, 20 cases of normal cervical tissue specimens were collected, using immunohistochemical method to detect the expressive intensity of galectin-3 in three groups, and analyzing galectin-3 protein and cervical squamous cell carcinoma patients clinical pathological features. Results: In squamous cell carcinoma of cervix galectin-3 protein positive expression rate was 82.50% significantly than 31.67% in CIN tissues and normal cervical tissues of 35.00%, the difference has statistical significance (P<0.05); normal cervical tissue and CIN and galectin-3 protein positive expression rate differences had no statistical significance (P>0.05). Cervical squamous cell carcinoma in galectin-3 protein positive expression rate in patients with different degree of differentiation, tumor size, whether lymph node metastasis has a statistically significant relationship (P<0.05), and the age of patients, the clinical staging was not significant (P>0.05). Conclusion: The positive expression rate of Galectin-3 protein in cervical squamous cell carcinoma was significantly increased, and it had a certain relationship with the degree of differentiation, the size of the lesion and lymph node metastasis.

[Key words]Galectin-3; cervical intraepithelial neoplasia; cervical squamous cell carcinoma; immunohistochemistry; lymphnode metastasis; tumor stage

宮頸癌以及宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是宮頸細(xì)胞長期病變的結(jié)果，大多學(xué)者認(rèn)為宮頸上皮HPV病毒感染是導(dǎo)致CIN及宮頸原位癌連續(xù)性病變的主要因素，但近年來的研究發(fā)現(xiàn)，單純的HPV感染不足以導(dǎo)致宮頸原位癌或者浸潤型癌的發(fā)生[1-2]。有學(xué)者提出細(xì)胞增殖周期調(diào)節(jié)、代謝以及細(xì)胞生理特征調(diào)控可能參與了宮頸病變的發(fā)生過程，半乳凝素-3(Galectin-3)是一個(gè)富含多N-乙?；樘堑耐庠茨丶易宄蓡T，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)、血管新生和腫瘤進(jìn)展等方面具有重要的意義，特別是對于早期異常增生或者腫瘤細(xì)胞同型誘導(dǎo)聚集作用更為明顯[3-4]。相關(guān)研究證實(shí)Galectin-3在乳腺癌、卵巢癌以及甲狀腺癌等惡性腫瘤中異常表達(dá)，并與腫瘤的臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移等臨床特征相關(guān)[5-6]。關(guān)于Galectin-3 在宮頸病變中的研究較少。本研究觀察宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、CIN及正常宮頸組織中Galectin-3蛋白表達(dá)水平，為研究宮頸癌的發(fā)生機(jī)制提供參考。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2013年1月～2015年1月宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本80例、CIN標(biāo)本60例以及正常宮頸組織標(biāo)本20例。80例宮頸鱗狀細(xì)胞患者， 39～59歲，平均(46.3±6.9)歲；癌細(xì)胞高分化10例，中分化21例，低分化49例；臨床分期為Ⅰ期35例，Ⅱ期29例，Ⅲ期16例。60例CIN組患者，33～57歲，平均(44.6±9.0)歲；CINⅠ級26例，Ⅱ級22例，Ⅲ級12例。20例正常宮頸組織人群， 35～57歲，平均(46.1±7.2)歲。宮頸鱗癌組織、CIN組織均來源于手術(shù)后標(biāo)本，宮頸鱗癌患者術(shù)前均未接受放化療及免疫治療； 正常宮頸組織來源于常規(guī)婦科檢查獲取的正常宮頸組織；納入研究對象的各項(xiàng)資料完整。

1.2方法

1.2.1組織標(biāo)本處理采用石蠟切片脫蠟至水，切片厚度3 mm，3% H2O2室溫孵育 5 min，去離子水沖洗3次， 3 min/次，采用濃度為10% 牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL純水)封閉，室溫孵育5 min，加入Galectin-3抗體(鼠來源，南京碧云天生物科技有限公司)， 37 ℃ 孵育 2 h，PBS緩沖液沖洗3次，5 min/次，滴加HRP標(biāo)記的二抗(兔來源，購自羅氏檢測公司)，37 ℃ 孵育 30 min，PBS 沖洗3次，5 min/次，加入 NBT/BCIP色劑顯色 5 min，復(fù)染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。OLIPICS電子顯微鏡購自上海精密儀器有限公司，配套試劑購自南京泰康生物科技有限公司。

1.2.2結(jié)果判定及評分Galectin-3蛋白的陽性主要著色于細(xì)胞漿，在細(xì)胞核及細(xì)胞表面也有少量表達(dá)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。(1)根據(jù)著色強(qiáng)度進(jìn)行評分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色或黑色。(2)根據(jù)陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分：陽性細(xì)胞數(shù)<10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩種積分相乘總分<3分為陰性，≥3分為陽性。

1.3觀察指標(biāo)

比較3組被檢者組織中Galectin-3蛋白表達(dá)陽性率，按年齡、癌細(xì)胞分化程度、病灶大小、臨床分期、是否有淋巴轉(zhuǎn)移對宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者進(jìn)行分組，記錄各組間的Galectin-3蛋白陽性表達(dá)病例數(shù)，分析不同細(xì)胞分化程度、病灶大小、是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移、年齡及臨床分期與Galectin-3蛋白表達(dá)的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

2.1Galectin-3蛋白表達(dá)

3組組織中均有Galectin-3蛋白表達(dá)，細(xì)胞漿中均可見黃色、棕黃色、褐色顆粒(圖1)，3組Galectin-3蛋白陽性表達(dá)率比較，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織顯著的高于CIN組織和正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=37.144、χ2=18.316，P<0.05)，CIN組織和正常宮頸組織差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.076，P>0.05)。見表1。

表1　3種子宮頸組織標(biāo)本中Galectin-3蛋白表達(dá)

注：為A為宮頸鱗癌組織，B為CIN組織，C為正常宮頸組織圖1　3種組織子宮頸標(biāo)本中Galectin-3的表達(dá)(SP，×200)Fig.1　SP staining of 3 tissue samples

2.2不同CIN分級組織中Galectin-3蛋白表達(dá)

不同CIN分級組織中Galectin-3蛋白表達(dá)陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2　不同CIN分級子宮頸組織中Galectin-3蛋白表達(dá)(n，%)

2.3Galectin-3蛋白表達(dá)與子宮頸鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系

宮頸鱗癌組織中Galectin-3蛋白陽性表達(dá)率在低分化、病灶≥2 cm及癌細(xì)胞未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移患者顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在不同年齡和不同臨床分期患者間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

3　討論

近年來性生活紊亂、性伴侶的頻繁更換以及過早地進(jìn)行性生活等，均可促進(jìn)宮頸CIN以及宮頸癌的發(fā)生，相關(guān)研究證實(shí)CINI的發(fā)病率在年齡18～28歲可達(dá)2.5%以上，CINII-III級的發(fā)病率也可達(dá)0.7%以上[7-8]。宮頸HPV病毒感染通過整合E6/E7病毒基因進(jìn)入柱狀上皮，經(jīng)不斷的擴(kuò)增繁殖，促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖周期失調(diào)，細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力均明顯增加，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡、分化、血管侵襲以及早期腫瘤細(xì)胞的浸潤。Galectin-3作為凝集素家族成員，由2個(gè)糖識(shí)別結(jié)構(gòu)區(qū)域以及膠原蛋白和纖維蛋白C5融合結(jié)構(gòu)，14號染色體的相關(guān)Galectin-3基因編碼和翻譯成功后，Galectin-3蛋白可以通過其氨基末端的巰基多重功能區(qū)域，進(jìn)入宿主細(xì)胞核發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞增殖和分化等生物學(xué)活性作用[9-10]。有研究發(fā)現(xiàn)，Galectin-3在乳腺癌以及卵巢癌中的平均陽性表達(dá)率可分別達(dá)45%、37%，且隨臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移率增高、細(xì)胞分化的降低， Galectin-3的陽性表達(dá)率升高[11-12]。然而迄今為止對于Galectin-3在宮頸CIN以及宮頸癌中的研究報(bào)道較少，僅有部分學(xué)者認(rèn)為Galectin-3的表達(dá)與宮頸癌的病死率有一定的關(guān)系[13]。

表3　Galectin-3蛋白表達(dá)與子宮頸鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組患者中Galectin-3的陽性表達(dá)率可達(dá)80%以上，明顯高于CIN組以及正常對照組，免疫組化切片分析可見Galectin-3主要表達(dá)于宮頸鱗狀上皮增殖較為活躍的區(qū)域，且細(xì)胞的異型性越為明顯，Galectin-3的表達(dá)強(qiáng)度越高，提示Galectin-3蛋白的異常表達(dá)在宮頸癌早期發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用。但正常對照組以及宮頸CIN組患者中并未發(fā)現(xiàn)Galectin-3表達(dá)的差異，考慮在正常宮頸上皮發(fā)展至宮頸CIN的過程中，HPV感染可能發(fā)揮了主導(dǎo)作用，而Galectin-3的生物學(xué)活性作用不明顯，另一方面也可能與本次研究納入的低級別的CINI級病例數(shù)量較多有關(guān)。對于不同分級的CIN中Galectin-3表達(dá)陽性率的分析發(fā)現(xiàn)，Galectin-3的表達(dá)并未隨著CIN病變等級的上升的升高，表明CIN分期并不影響Galectin-3的表達(dá)，其表達(dá)率基本維持在15%左右，持續(xù)性地維持在較低的水平。本研究重點(diǎn)探討Galectin-3與宮頸癌患者相關(guān)臨床特征間的關(guān)聯(lián)，結(jié)果提示，低分化的宮頸癌患者Galectin-3陽性率達(dá)到了70%，而腫瘤病灶>2 cm以及發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者Galectin-3的陽性率也可達(dá)60%左右，明顯高于低分化組、病灶<2 cm組以及未轉(zhuǎn)移組，表明Galectin-3的表達(dá)與宮頸癌患者的臨床病理特征具有密切的關(guān)系。腫瘤病灶>2 cm的患者，其對于宮旁組織的浸潤率較高，浸潤程度較深，而Galectin-3可以通過增加宮頸癌細(xì)胞的同型聚集能力，增強(qiáng)其侵襲和轉(zhuǎn)移的能力，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤病灶的擴(kuò)大，另外Galectin-3可以增加宮頸癌細(xì)胞對于淋巴管內(nèi)皮的粘附，進(jìn)而增加淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。徐美容等[14-15]也認(rèn)為，在低分化宮頸鱗狀細(xì)胞癌中，Galectin-3的陽性率較高，并認(rèn)為Galectin-3可以增加HPV病毒對于宿主細(xì)胞的整合能力，進(jìn)而進(jìn)一步增加宮頸癌細(xì)胞的溢出和脫落，增加淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。但本次研究的局限性在于未能探討Galectin-3在CINII-III級患者宮頸錐切術(shù)后的改變， 宮頸錐形切除術(shù)后切緣Galectin-3陽性率對于指導(dǎo)臨床工作更具指導(dǎo)意義。

綜上所述，雖然Galectin-3在不同CIN分級中并無顯著差異性表達(dá)，但宮頸癌組織中的Galectin-3蛋白表達(dá)陽性率較高，且與患者細(xì)胞分化程度、病灶大小、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，臨床上通過檢測宮頸癌術(shù)后標(biāo)本的Galectin-3表達(dá)水平，可為指導(dǎo)臨床預(yù)后提供一定的參考。

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(2016-01-31收稿，2016-07-09修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 趙毅

Expression and Significance of Galectin-3 in CIN and Cervical Squamous Cell Carcinoma

TANG Yao, HE Li, LI Jueshan

(DepartmentofGynaecology,ChengduCenterHospitalofWomenandChildren,Chengdu610000,SichuanProvince,China)

R737.33

A

1000-2707(2016)08-0967-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.08.025

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-08-23網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160823.1343.022.html