頂空-氣相色譜法測定舒肝寧注射液4種提取物中乙醇的殘留量*

何　峰， 張　昀

(1.貴州醫(yī)科大學， 貴州 貴陽　550004； 2.貴州瑞和制藥有限公司， 貴州 貴陽　550004)

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頂空-氣相色譜法測定舒肝寧注射液4種提取物中乙醇的殘留量*

何峰1， 張昀2**

(1.貴州醫(yī)科大學， 貴州 貴陽550004； 2.貴州瑞和制藥有限公司， 貴州 貴陽550004)

目的： 建立頂空-氣相色譜法測定舒肝寧注射液中茵陳、梔子、板藍根及靈芝提取物中乙醇殘留量的方法。方法： 采用ZB-624石英毛細管柱(30.0 m×0.53 mm×3 μm)，柱溫采取程序升溫的方法，載氣為氮氣，進樣口溫度為200 ℃，檢測器溫度為250 ℃，測定舒肝寧注射液上述4種提取物中乙醇殘留量，探討乙醇殘留量檢測的線性范圍，回收率及最低檢測限。結果： 乙醇在15.46～773 mg/L(r=0.999 3) 范圍內線性關系良好，4種提取物的回收率均良好，最低檢測限為 11 ng。結論: 所建立的方法簡單、靈敏、準確，可用于舒肝寧4種提取物中乙醇殘留量的測定。

色譜法，氣相; 舒肝寧注射液; 乙醇； 殘留量

[Abstract]Objective: To determine the residual quantity of ethanol in four extracts(wormwood,fructuscardeniae,radixisatidis,andganodermalucidum) in Shuganning injection by headspace gas chromatographic method. Methods: ZB-624 (30.0 m×0.53 mm×3 μm) column was used. The temperature programming was adopted for column temperature with carrying gas as nitrogen. Inlet temperature and FID detector were 200 ℃ and 250 ℃, respectively. The residual quantity of ethanol above-mentioned 4 extracts in Shuganning injection was detected, and he linear range, recovery rate and the lowest detection limit of ethanol residue were discussed. Results: The result showed good linearity in the ethanol content range of 15.46～773 μg·mL-1(r=0.999 3), recovery of four kinds of extracts were good and the detection limit was 11ng. Conclusion: This method is rapid, sensitive and accurate for detecting the residual ethanol in four extracts of Shuganning injection．

[Key words]chromatography,gas; Shuganning injection; ethanol; residual

近年來，中藥注射劑等高風險產品中殘存有機溶劑的毒性和致癌作用日益引起各方面的關注，因此對中藥注射劑生產過程中引入有機溶劑殘留物進行有機溶劑殘留量測定變得非常必要。舒肝寧注射液是由茵陳、梔子、板藍根、及靈芝等提取物為原料制備而成的純中藥注射劑，臨床常用于治療黃疸，急、慢性病毒性肝炎[1-2]。茵陳、梔子、板藍根及靈芝這4種提取物的生產工藝均為水提取、兩次乙醇醇沉，按《中國藥典》2010年版規(guī)定, 乙醇為Ⅲ類有機溶劑。為了有效控制產品質量和保證用藥安全，本研究嘗試建立一種采用頂空-氣相色譜法檢測舒肝寧注射液中茵陳、梔子、板藍根、及靈芝4種提取物中乙醇殘留的分析方法，為舒肝寧注射液質量標準的提升提供可行的質檢方法。

1　儀器與試藥

Agilent 7820A氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器(FID)，Agilent 7694E頂空進樣器， MS d=0.01 mg電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司生產)，無水乙醇(批號20101025，重慶川東化工有限公司)，注射用水，茵陳提取物(批號T-Y20120524、T-Y20120823及T-Y20120829)、梔子提取物(批號T-Z20130114、T-Z20120807及T-Z20121212)、板藍根提取物(批號T-B20121108、T-B20120118及T-B20121106)、靈芝提取物(T-L20121120、T-L20121112及T-L20121114)，以上12批提取物均為貴州瑞和制藥公司生產。

2　方法與結果

2.1對照品溶液及供試品溶液的制備

吸取1 mL恒溫至25 ℃的無水乙醇置于100 mL容量瓶，定容至100 mL，搖勻，吸取1 mL轉入50 mL容量瓶，定容至50 mL，搖勻，即得對照品溶液。吸取各提取物2 mL，置于25 mL容量瓶，定容至50 mL，搖勻，即得供試品溶液。

2.2色譜條件

色譜柱為Agilent ZB-624石英毛細管柱(30.0 m×0.53 mm×3 μm，美國安捷倫公司生產)，柱溫為程序升溫：初始溫度為40 ℃保持 7 min，以30 ℃/min的速率升溫至240 ℃，保持5 min，進樣口溫度為200 ℃，檢測器溫度為250 ℃。分流進樣，分流比為10∶1，載氣為氮氣，柱流速2.8 mL/min；檢測器氫氣流速30 mL/min，氧氣流速300 mL/min。頂空條件：樣品瓶溫度80 ℃，樣品環(huán)溫度100 ℃，傳輸線溫度120 ℃，樣品瓶加熱平衡時間10 min，進樣時間0.3 min，頂空進樣1 mL。

2.3專屬性實驗

精密量取對照樣品、供試品溶液及空白溶液各5 mL分別置于頂空瓶中，加蓋，密封，按2.2項下色譜條件測定，記錄色譜圖[3-6]。結果表明，供試品與對照品在相應的保留時間均顯示相應色譜峰，空白試劑在與對照品出峰時間點上無吸收峰，方法專屬性良好。見圖1。

注：A為空白溶液， B為對照品溶液，C為茵陳提取物， D為梔子提取物，E為板藍根提取物，F(xiàn)為靈芝提取物；a為乙醇峰圖1　提取物中乙醇殘留檢測方法的專屬性實驗色譜結果Fig.1　Specific experimental results of the determination of ethanol residue in the extracts

2.4線性關系考察

精密吸取恒溫至25 ℃的無水乙醇，置100 mL容量瓶中，依次逐級稀釋，定容，制得濃度梯度依次為：0.773 00、0.309 20、0.154 60、0.077 30、0.038 65、0.015 46 g/L的6個對照品溶液，再分別精密量取上述各濃度對照品溶液5.0 mL，置于頂空進樣瓶中，加蓋，密封，按按2.2項下的色譜條件測定，以各溶液濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸分析，繪制線性關系圖，計算回歸方程及相關系數(shù)(r)，得到回歸方程為Y=5 713.7X-31.591，r=0.999 3。由線性關系圖得出在15.46～773 mg/L的范圍內呈良好的線性關系，最低檢測限為11 ng。

圖2　提取物中乙醇殘留檢測方法的線性關系Fig.2　The linear relationship of the method for the determination of ethanol in the extract

2.5重復性實驗

精密量取批號為T-Y20120524的茵陳提取物2 mL(2.069 6 g、2.069 2 g、2.069 2 g、2.069 5 g、2.069 3 g、2.069 6 g)共6份，按2.1項下要求，制備供試品，分別置于6支頂空進樣瓶中進樣分析[8-9]，試驗結果表明重復性良好，保留時間RSD為0.1%，峰面積RSD為0.7%。

2.6中間精密度試驗

試驗中由2名有資質的檢驗人員分別獨立對同一批次茵陳提取物(T-Y20120524)平行進行2次檢測，以考察隨機變動因素、試驗誤差因素對精密度的影響。兩人所測結果的RSD為5.0%，符合中間精密度的要求。

2.7穩(wěn)定性試驗

精密量取6份茵陳提取物2 mL(T-Y201205

24)，按2.1項下程序制備供試品，分別精密量取5 mL置于6支頂空進樣瓶中，密封，分別于0、1、2、3、4及5 h進行乙醇量測定，計算峰面積，結果不同時間點乙醇峰面積RSD為0.6%，樣品溶液在5 h內穩(wěn)定性良好。

2.8回收率試驗

分別取1 mL已準確測定乙醇殘留量的4種提取物(茵陳提取物T-Y20120524，梔子提取物T-Z20120807，板藍根提取物T-B20121108，靈芝提取物T-L20121112)各6份，精密稱定，加入1 mL 濃度為38.65 mg/L的乙醇溶液，按2.1項下程序制備樣品，按上述色譜條件測定回收率[10]。測得乙醇平均回收率為：茵陳提取物99.85%(RSD=1.62%)，梔子提取物 99.81%(RSD=1.01%)，板藍根提取物99.92%(RSD=1.12%)，靈芝提取物99.65%(RSD=0.98%)。

2.9樣品乙醇含量測定

分別精密吸取各提取物2 mL，按“2.1” 項下方法制備樣品，按“2.4” 項下方法色譜條件進樣分析，試驗結果(表1)表明，樣品中乙醇峰的理論塔板數(shù)均>8 000，乙醇含量均<0.5%(g/g)。

表1　樣品乙醇含量測定結果

3　討論

課題組前期研究參照《中國藥典》2010年版附錄ⅧP殘留溶劑測定法[11]，對舒肝寧注射液及其4種提取物中可能含有的溶劑進行了篩選，對其中的乙醇、三氯甲烷與正丁醇等殘留溶劑進行測定，均未檢出三氯甲烷和正丁醇，而甲醇的含量也很低，幾乎未檢出，由于各提取物的制備方法均為水提醇沉法，因此本研究僅將提取物的乙醇殘留溶劑列入內控標準中。

根據(jù)本研究中采用頂空-樣氣相色譜法建立了舒肝寧注射液4種提取物中乙醇殘留量的測定方法，結果發(fā)現(xiàn)乙醇在15.46～773 mg/L(r=0.999 3) 范圍內線性關系良好，4種提取物的回收率均良好，最低檢測限為 11 ng，成功建立了檢測舒肝寧注射液4種提取物中乙醇殘留量的測定方法，且利用此方法測定所測樣品的乙醇殘留量均<0.5%，符合ICH乙醇量不得超過0.5%的規(guī)定，進一步證實本研究所涉及的12批提取物樣品中乙醇量未超標，但是考慮到注射液的安全性，因此建議企業(yè)將提取物的乙醇殘留量作為企業(yè)內控質量標準，對其進行監(jiān)控。

[1]關妮. 舒肝寧注射液臨床應用進展[J].醫(yī)學理論與實踐, 2014 (10): 1291-1295.

[2]王云, 羅天永. 舒肝寧注射液治療黃疸型肝炎的臨床效果觀察[J]. 護士進修雜志, 2010 (8): 744-745.

[3]田智慧, 田志磊, 趙菊梅, 等. 頂空毛細管氣相色譜法測定頭孢米諾鈉中三種有機溶劑殘留量[J]. 生化與醫(yī)藥, 2007(13):50.

[4]蔣曄, 徐智儒, 康麗娟, 等. 頂空氣相色譜法測定阿德福韋酯中4種有機溶劑殘留量[J]. 中國新藥雜志， 2004 (12):1359-1361.

[5]姜玲黎, 吳明琿, 李高, 等. 頂空氣相色譜法測定穿心蓮注射液中氯仿殘留量[J]. 醫(yī)藥導報, 2007 (3):295-296.

[6]方繼輝, 李晨輝. 頂空氣相色譜法測定佐匹克隆中有機溶劑殘留量[J]. 廣東藥學, 2005 (5):1-3.

[7]程壽峰, 張明時, 夏品華. 30種黔產中藥材飲片中11種有機氯農藥殘留的污染調查與研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2013 (9):2288-2290.

[8]郭波紅, 程怡, 吳衛(wèi). 甘草次酸脂質體中乙醇殘留量的頂空氣相色譜法測定[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2012 (3):692-693.

[9]帥放文, 章家偉, 王向峰,等. 依達拉奉標準物質中乙醇殘留的測定[J].廣東化工,2014 (16):178-179.

[10]孔霽虹, 臧恒昌, 王彥厚. 氣相色譜法測定阿莫西林克拉維酸鉀片中的乙醇殘留量[J].食品與藥品,2014 (2):120-122.

[11]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄Ⅷ.

(2016-02-31收稿，2016-06-30修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 劉華

Determination of Residual Ethanol in Four Extraction of Shuganning Injection by Headspace Gas Chromatography

HE Feng1, ZHANG Yun2

(1.SchoolofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China;2.GuizhouRuihePharmaceuticalCo.,Ltd,Guiyang550004,Guizhou,China)

貴州省科技重大專項項目[黔科合重大專項字(2011)6019號]

Email:838396231@qq.com

R917.7

A

1000-2707(2016)08-0911-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.08.011

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網(wǎng)絡出版時間：2016-08-23網(wǎng)絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160823.1343.024.html