干粉培養(yǎng)基在禽多殺性巴氏桿菌病活疫苗培養(yǎng)中的應(yīng)用

張芷寧

（遼寧省錦州市農(nóng)業(yè)信息中心，遼寧 錦州 121000）

干粉培養(yǎng)基在禽多殺性巴氏桿菌病活疫苗培養(yǎng)中的應(yīng)用

張芷寧

（遼寧省錦州市農(nóng)業(yè)信息中心，遼寧 錦州 121000）

商品化干粉培養(yǎng)基在培養(yǎng)中應(yīng)用越來越廣泛，給細菌培養(yǎng)提供充分營養(yǎng)需求，簡化培養(yǎng)基制備過程，并可使批間次差異減少。

1　菌種及原材料

1.1菌種禽多殺性巴氏桿菌G190E40弱毒株，效檢用禽多殺性巴氏桿菌C48-1強毒株。

1.2培養(yǎng)基青島海博公司，巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基，批號：201512

1.3試驗動物3～4月齡的健康易感雞

2　菌種制備

2.1基礎(chǔ)種子G190E40株凍干菌種用滅菌2～5mL pH7.4馬丁湯進行溶解，接入血液馬丁瓊脂斜面1～2支，置37℃培養(yǎng)18～22h。培養(yǎng)完成后血液馬丁瓊脂斜面放2～8℃普通冰箱保純，繼代時間不超過14d，在培養(yǎng)基上傳代連續(xù)不能超過5代。

2.2一級菌種制備及純粹檢驗用火焰消毒過的鉑金耳將菌落混勻后接種于pH7.4加血液馬丁肉湯中，置37℃培養(yǎng)18～22h，經(jīng)純粹檢驗合格后作為一級種子，保存在2～8℃普通冰箱備用。

2.3二級種子制備及純粹檢驗取檢驗合格一級種子瓶，采用無菌方法接種到pH7.4含0.5%裂解全血的馬丁湯中，然后放37℃溫室培養(yǎng)24h，在此期間振蕩2～3次，經(jīng)純粹檢驗合格為二級種子，種子瓶放置2～8℃冰箱保存，限時48h用完。

3　菌液培養(yǎng)

3.1制苗用培養(yǎng)基將巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基用注射用水溶解后調(diào)節(jié)pH值，導入發(fā)酵罐進行121℃，30min滅菌。

3.2發(fā)酵培養(yǎng)將檢驗合格的二級菌種接入到滅菌后冷卻的培養(yǎng)內(nèi)，發(fā)酵罐設(shè)置成培養(yǎng)狀態(tài)，溫度，轉(zhuǎn)數(shù)，pH值設(shè)置成自動狀態(tài)（溫度：37℃、轉(zhuǎn)數(shù)：100轉(zhuǎn)、pH值：7.5）。

3.3半成品檢驗純粹檢驗培養(yǎng)結(jié)束后，取樣涂片鏡檢，應(yīng)無雜菌，用馬丁瓊脂作純粹檢查，應(yīng)純粹生長。

4　配苗分裝

培養(yǎng)菌液及滅菌后的明膠蔗糖保護劑按7：1進行混合，使其明膠含量為2%、蔗糖含量4%，配苗結(jié)束后，立即進行分裝。

5　凍干

分裝后迅速進行冷凍真空干燥，禽多殺性巴氏桿菌病活疫苗凍干曲線：

5.1預(yù)凍接段-45℃ 3h；

5.2升華階段（一期干燥）-45℃～20℃ 13h（板層溫度，溫度均勻分布）；

5.3解析干燥（二期干燥）20℃～32℃ 6h（板層溫度）。

6　菌數(shù)測定（見表1、表2?。?/h2>

表1　使用巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基培養(yǎng)批次菌數(shù)情況（每羽份含活菌數(shù)用應(yīng)為2000萬個）

表2　使用常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)批次菌數(shù)情況（每羽份含活菌數(shù)用應(yīng)為2000萬個）

7　安全檢驗（見表3、表4　）

用20%鋁膠生理鹽水稀釋為1mL含100羽份，用3～4月齡的健康易感雞4只，各肌肉注射1mL，觀察10～14d，應(yīng)全部健活。

表3　使用巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基培養(yǎng)批次安檢情況

表4　使用常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)批次安檢情況

8　免疫原性（見表5、表6?。?/h2>

用3～4月齡的健康易感雞4只，各肌肉注射用20%鋁膠生理鹽水稀釋的2000萬個活菌，14d后，連同條件相同的對照雞2只，各肌肉注射致死量的C48-1強毒菌液，觀察10～14d，對照雞全部死亡，免疫雞至少保護3只為合格。

表5　使用巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基培養(yǎng)批次效檢情況

表6　使用常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)批次效檢情況

9　結(jié)論

通過對比試驗，不管是在活菌培養(yǎng)，還是在安檢、效檢方面，商品化干粉培養(yǎng)基對于禽多殺性巴氏桿菌活疫苗的培養(yǎng)均與常規(guī)培養(yǎng)基無明顯差異，可以推廣使用。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.09.011