黔產(chǎn)羊耳菊藥材中的重金屬殘留分析*

熊荻菲菲， 熊　珂， 伍　萍， 鞏仔鵬,2， 陳思穎,2， 蘭燕宇， 王愛(ài)民***

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽(yáng)　550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng)　550004； 3.貴州醫(yī)科大學(xué) 民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心， 貴州 貴陽(yáng)　550004)

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·基礎(chǔ)研究·

黔產(chǎn)羊耳菊藥材中的重金屬殘留分析*

熊荻菲菲1**， 熊珂1， 伍萍1， 鞏仔鵬1,2， 陳思穎1,2， 蘭燕宇2,3， 王愛(ài)民2,3***

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽(yáng)550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng)550004； 3.貴州醫(yī)科大學(xué) 民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心， 貴州 貴陽(yáng)550004)

目的： 測(cè)定10批黔產(chǎn)羊耳菊藥材中的重金屬汞、砷、鉛、鎘及銅的含量，評(píng)價(jià)黔產(chǎn)羊耳菊藥材的質(zhì)量及安全性。方法： 10批不同產(chǎn)地(黔產(chǎn))羊耳菊藥材，采用石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定藥材中鉛、鎘、銅的含量，原子熒光光度法測(cè)定藥材中砷、汞的含量，以《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)10批藥材中重金屬含量進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果： 被測(cè)定的10批黔產(chǎn)羊耳菊藥材中鉛、銅、砷的含量均未超出限定標(biāo)準(zhǔn)，有1批羅甸藥材中汞的含量超出限定標(biāo)準(zhǔn)；除1批惠水藥材及1批羅甸藥材外，其余藥材中鎘的含量均超出限定標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論： 貴州省內(nèi)不同產(chǎn)地的羊耳菊藥材中重金屬的含量存在較大差異，鎘含量超標(biāo)較為嚴(yán)重。

羊耳菊； 中藥材； 重金屬； 質(zhì)量控制； 原子吸收光譜法； 限定標(biāo)準(zhǔn)； 貴州

羊耳菊又名白牛膽，為菊科旋覆花屬植物的新鮮或干燥全草，屬南方民間草藥，性辛、微苦，具有解毒消腫，疏風(fēng)散熱、祛痰定喘的功效[1-2]。以羊耳菊為主藥研制的中藥新藥有“菊黃上清含片”及“蓮菊感冒膠囊”等[3-4]，羊耳菊是這些制劑的主要成分之一，其產(chǎn)地及質(zhì)量關(guān)系到這些中藥制劑的療效及安全性。中藥材在生長(zhǎng)過(guò)程中易受到土壤環(huán)境的影響，土壤中的重金屬元素鉛、鎘及銅等可從中草藥的根部吸收，當(dāng)殘留過(guò)量會(huì)產(chǎn)生毒性，影響用藥的安全性[5-6]。檢測(cè)中藥材中重金屬的含量對(duì)用藥安全具有重要的意義。為綜合評(píng)價(jià)黔產(chǎn)羊耳菊藥材的質(zhì)量及安全性，本研究收集了10批貴州省不同產(chǎn)地的羊耳菊藥材，分別測(cè)定藥材中鉛、鎘、銅、砷及汞的含量，評(píng)價(jià)黔產(chǎn)羊耳菊藥材的質(zhì)量及安全性，為進(jìn)一步提高黔產(chǎn)羊耳菊為原料的相關(guān)制劑的質(zhì)量和安全性提供參考。

1　材料與方法

1.1樣品、儀器及試劑

實(shí)驗(yàn)所用羊耳菊藥材采自貴州省內(nèi)的不同產(chǎn)地，由貴州省食品藥品檢驗(yàn)所李楊主管中藥師鑒定為羊耳菊Inulacappa(Buch.-Ham.ex D.Don)干燥全草，產(chǎn)地及編號(hào)見(jiàn)表1。儀器及試劑為AAnalyst 800原子吸收光譜儀(美國(guó)PerkinElmer公司)，AFS-8220原子熒光光度計(jì)(北京吉天儀器有限公司)，Agilent 7890A氣相色譜儀， EH 20A plus 電子溫控加熱板(北京萊伯泰科儀器股份有限公司)，聚四氟乙烯高壓消解罐(南京瑞尼克科技開發(fā)有限公司)，BUHCI R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士BUCHI公司)。鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 μg/L，GSB04-1742-2004)、鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 μg/L，GSB04-1721-2004)、汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 μg/L，GSB04-1729-2004)、砷標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 μg/L，GSB04-1714-2004)、銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 μg/L，GSB04-1725-2004)，均購(gòu)自國(guó)家有色金屬及電子材料分析中心；硝酸、鹽酸為優(yōu)級(jí)純，其余試劑為分析純。

表1　10批黔產(chǎn)羊耳菊藥材的編號(hào)及產(chǎn)地

1.2對(duì)照品溶液的制備

汞、砷標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別吸取汞、砷標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL用水定容至100 mL，得到汞、砷儲(chǔ)備液；分別吸取汞、砷儲(chǔ)備液1.0 mL及5.0 mL分別用水定容至100 mL和50 mL，得到汞、砷使用液。分別吸取汞使用液0、0.1、0.2、0.4、0.8及1.0 mL，各加入濃鹽酸2.5 mL搖勻，用水定容至50 mL，得0.0、0.1、0.2、0.4、0.8及1.0 μg/L汞標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；分別吸取砷使用液0、0.1、0.2、0.5、1.0及2.0 mL，各加入濃鹽酸2.5 mL和10%硫脲溶液5 mL中搖勻，用水定容至50 mL得0.0、1.0、2.0、5.0、10.0及20.0 μg/L砷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。鉛、鎘及銅標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：分別吸取鉛、鎘、銅標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、0.5及1.0 mL用水定容至100 mL，分別得到鉛、鎘及銅儲(chǔ)備液，分別吸取鉛、鎘儲(chǔ)備液各0.5 mL，分別加入濃鹽酸0.5 mL，用水定容至100 mL，得到50 μg/L鉛和25 μg/L鎘使用液；分別吸取銅儲(chǔ)備液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及4.0 mL，分別加入濃鹽酸0.5 mL，用水定容至50 mL，得0.0、0.1、0.2、0.4、0.6及0.8 μg/L銅標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.3供試品溶液的制備

羊耳菊藥材干燥粉碎后過(guò)40目篩，稱取0.5 g置于高壓消解罐內(nèi)罐中，加硝酸7 mL，將內(nèi)罐放入不銹鋼套擰緊密封放入電熱鼓風(fēng)干燥箱180 ℃、3 h，取出冷卻至室溫后，將內(nèi)罐取出置于控溫電熱板上150 ℃加熱至消解液約揮至1 mL，冷卻后用水少量多次轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，汞、鉛、鎘、銅供試品溶液中加濃鹽酸2.5 mL，用水定容至25 mL即得；砷供試品溶液中加濃鹽酸2.5 mL與10%硫脲5 mL，用水定容至25 mL即得。測(cè)定參數(shù)：汞、砷儀器工作參數(shù)的設(shè)定見(jiàn)表2，鉛、鎘、銅儀器工作參數(shù)的設(shè)定見(jiàn)表3。

1.4方法學(xué)考察

1.4.1線性關(guān)系考察取“1.2”項(xiàng)下制備的重金屬標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，分別按表2及表3參數(shù)檢測(cè)，以吸收度或熒光值(A)為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸，得回歸方程及相關(guān)系數(shù)(r)見(jiàn)表4，表明線性關(guān)系良好。

1.4.2精密度試驗(yàn)取同一批羊耳菊藥材，按“1.3”項(xiàng)下方法制備供試品，按表2及表3參數(shù)檢測(cè)，連續(xù)測(cè)定熒光值及吸光度6次，汞、砷、鉛、鎘及銅含量RSD值范圍為0.85%～3.78%，表明儀器精密度良好。

表2　原子熒光光度法工作參數(shù)表

表3　原子吸收光譜法儀器工作參數(shù)

表4　各元素標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)

1.4.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一批羊耳菊藥材6份，按“1.3”項(xiàng)下方法制備供試品，按表2及表3參數(shù)檢測(cè)，分別測(cè)定各樣品的熒光值及吸光度值，汞、砷、鉛、鎘及銅的RSD值分別為3.17%、2.19%、2.85%、5.49%及4.13%，表明該方法的重復(fù)性良好。

1.4.4回收率試驗(yàn)取羊耳菊藥材9份，分成高、中、低3組，每組分別精密加入一定量的汞、砷、鉛、鎘及銅標(biāo)準(zhǔn)溶液，每份樣品按“1.3”項(xiàng)下方法制備供試品，按表2及表3參數(shù)檢測(cè)，計(jì)算回收率。汞、砷、鉛、鎘及銅的回收率分別為99.5%～101.4%、97.4%～103.5%、98.4%～100.3%、98.7%～105.8%及99.1%～101.9%，汞、砷、鉛、鎘及銅的RSD值分別為1.38%～1.47%、0.45%～2.23%、1.43%～3.64%、2.12%～5.67%及1.21%～6.87%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2　結(jié)果

依據(jù)《藥用植物及制劑進(jìn)出口行業(yè)綠色標(biāo)準(zhǔn)》(WM/T 2-2004)[7]中各元素的限量指標(biāo)：汞≤ 0.2 ng/g、砷≤ 2 ng/g、鉛≤ 5 ng/g、鎘≤ 0.3 ng/g、銅≤ 20 ng/g，本次檢測(cè)的貴州省10批羊耳菊藥材中鉛、銅、砷的含量均未超出限定標(biāo)準(zhǔn)，只有1批羅甸藥材中汞的含量超出限定標(biāo)準(zhǔn)；除1批惠水藥材及 1批羅甸藥材外，其余藥材中鎘的含量均超出限定標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表5。

表5　貴州省不同產(chǎn)地羊耳菊藥材中重金屬含量測(cè)定結(jié)果

注：(1)為超出限定標(biāo)準(zhǔn)

3　討論

中藥材中重金屬超標(biāo)不僅成為中藥材質(zhì)量的安全隱患，還關(guān)系到中藥飲片及中成藥的用藥安全，也制約了中藥材及其制劑的出口。發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)重金屬超標(biāo)而形成的“貿(mào)易壁壘”已成為我國(guó)中藥出口創(chuàng)匯的一大障礙，同時(shí)也導(dǎo)致眾多國(guó)家對(duì)中醫(yī)藥的療效和安全性產(chǎn)生質(zhì)疑。中藥材作為中藥飲片和中成藥的原料，是中藥重金屬殘留的直接來(lái)源，對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并加以控制，是解決中藥重金屬殘留問(wèn)題的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一[8]。目前為止只有云南、四川、貴州3個(gè)省區(qū)對(duì)羊耳菊制定過(guò)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[10]，并且收錄在《中國(guó)藥典》中，但也僅有1977版進(jìn)行了收錄，并且現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)羊耳菊藥材的質(zhì)量控制方法都較為簡(jiǎn)單，且都沒(méi)有重金屬的檢測(cè)及限量標(biāo)準(zhǔn)。 因此，本研究通過(guò)對(duì)貴州不同產(chǎn)地的10批羊耳菊藥材的5種重金屬進(jìn)行測(cè)定，以期為羊耳菊藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)、臨床用藥安全以及制定該藥材中重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

通過(guò)對(duì)貴州省不同產(chǎn)地的10批地羊耳菊藥材中重金屬含量檢測(cè)結(jié)果可看出，不同產(chǎn)地的羊耳菊藥材中重金屬的含量存在著顯著的差異，重金屬汞、鎘有超標(biāo)現(xiàn)象，其中鎘的超標(biāo)尤為嚴(yán)重，被測(cè)定樣品中鎘的殘留量最大的超過(guò)限定標(biāo)準(zhǔn)約6倍。有研究報(bào)道葉國(guó)華等[10]硏究了貴州省11個(gè)中藥材基地的21種中藥材，分析檢測(cè)了其中所含汞、砷、鉛、鎘、銅等5種重金屬元素，結(jié)果中鎘含量高達(dá)63.2%，超標(biāo)率也最為嚴(yán)重。自然界大環(huán)境如空氣、土壤、水質(zhì)等是中藥材重金屬污染的途徑之一，在相同的pH條件下，鎘在土壤中比鉛、銅的溶解度大。土壤對(duì)鎘有很強(qiáng)的吸附力，特別是黏土和有機(jī)質(zhì)多的土壤吸附鎘的能力較強(qiáng)，容易造成鎘的富積[11]。同時(shí)，羊耳菊藥材可能對(duì)鎘有較強(qiáng)的富集能力，這些原因可能是導(dǎo)致貴州不同產(chǎn)地羊耳菊藥材中鎘的殘留量差異較大或超標(biāo)的原因。羊耳菊藥材在抗菌、抗炎等方面有很好的開發(fā)應(yīng)用前景，但目前所用的羊耳菊藥材基本都為野生品種，而從本研究所測(cè)定的結(jié)果中可以看出，自然界大環(huán)境對(duì)該藥材中重金屬含量有較大的影響，且野生品種在生長(zhǎng)過(guò)程中易受到環(huán)境影響而富集有害元素。因此，為了更好的保證該藥材質(zhì)量建議進(jìn)行人工種植，并對(duì)藥材相關(guān)產(chǎn)地的土壤、空氣、水分等環(huán)境影響因素進(jìn)一步分析，為羊耳菊藥材人工種植提供較好的種植方案。同時(shí)建立相應(yīng)的GAP種植基地，以期控制土壤及水質(zhì)等因素所帶來(lái)的重金屬污染，從源頭上避免重金屬污染源的引入，從而保障羊耳菊藥材臨床用藥的安全性。

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(2016-05-28收稿，2016-08-25修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 劉華

Analysis of Residual Heavy Metals inInulacappaProduced in Guizhou Province

XIONG Difeifei1, XIONG Ke1, WU Ping1, GONG Zipeng1,2, CHEN Siying1,2, LAN Yanyu2,3, WANG Aimin2,3

(1.GuizhouProvincialKeyLaboratoryofPharmaceutics,GuizhouMedcialUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.CollegeofPharmacy,GuizhouMedcialUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China； 3.EngineeringResearchCenterfortheDevelopmentandApplicationofEthnicMedicineandTCM,MinistryofEducation,GuizhouMedcialUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

Objective: To determine the amount of heavy metals in 10 different batches ofInulacappaproduced in Guizhou Province and evaluate quality and clinical safety. Methods: The contents of heavy metals of Pb, Cd and Cu were determined by using graphite furnace atomic absorption spectrometry, and As and Hg by atomic fluorescence spectrometry. According toGreenTradeStandardsofImportingExportingMedicinalplantsPreparations, the experimental data of 10 batches ofInulacappawere evaluated. Result: The contents of Pb, Cu and As in herbs did not exceed the limited standard. Hg content exceeded the limited standard in one batch produced in Luodian area. The Cd content in all of batches exceeded the limited standard except for one batch from Huishui and one batch from Luodian. Conclusion: The results shows there is a significant difference of the heavy metals contents inInulacappaproduced among different producing areas in Guizhou Province. And the situation of Cd content exceeding the permitted standard is serious.

Inulacappa; chinese medicinal materials; heavy metals; quality control; atomic absorption spectrometry; limited standard; Guizhou province

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81360664)； 貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目[黔科合LH字(2015)7362]； 貴州省中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目(QZZY-2015-078)

E-mail:gywam100@163.com

R284； RZ273

A

1000-2707(2016)09-1021-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.09.007

**貴州醫(yī)科大學(xué)2013級(jí)碩士研究生

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網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-09-13網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160913.2240.034.html