水中糞大腸菌群檢測(cè)方法的研究

張綺純，劉森林，李 燕，林建華

(廣東省深圳市龍崗區(qū)環(huán)境監(jiān)測(cè)站，廣東 深圳 518172)

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水中糞大腸菌群檢測(cè)方法的研究

張綺純，劉森林，李 燕，林建華

(廣東省深圳市龍崗區(qū)環(huán)境監(jiān)測(cè)站，廣東 深圳 518172)

運(yùn)用多管發(fā)酵法和濾膜法對(duì)水庫水、自來水、井水糞大腸菌群進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明：多管發(fā)酵法檢測(cè)水樣，過程耗時(shí)費(fèi)力。濾膜法檢測(cè)水樣，過程快速簡(jiǎn)便。兩種方法所得檢測(cè)結(jié)果具有可比性，準(zhǔn)確可靠。

糞大腸菌群；多管發(fā)酵法；濾膜法；比較研究

1　引言

糞大腸菌群系指在44 ℃下能生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的一組微生物。2001年國家衛(wèi)生部在《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的基礎(chǔ)上，重新修定頒布了《生活飲用水衛(wèi)生規(guī)范》，新增加了糞大腸菌群為常規(guī)必檢項(xiàng)目。主要以該菌群的檢出情況來表示檢樣中是否有有機(jī)物污染。糞大腸菌群數(shù)的高低也預(yù)示了其對(duì)人體健康危害性的大小。

2　材料與方法

2.1材料

乳糖蛋白胨培養(yǎng)基、EC肉湯培養(yǎng)基、M-FC培養(yǎng)基、MilliflexPlusPump過濾器、MILLIPORE濾膜0.45 μm、滅菌蒸餾水、超凈工作臺(tái)、高壓蒸汽滅菌器，恒溫培養(yǎng)箱，恒溫水浴箱，移液管、酒精燈、發(fā)酵管。采集的水庫水、自來水、井水放入冰箱保存，5 h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

2.2方法

2.2.1多管發(fā)酵法

多管發(fā)酵法檢測(cè)糞大腸菌群是指將待測(cè)水樣按照3個(gè)不同的接種量，接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中培養(yǎng)，每個(gè)接種量5支發(fā)酵管，分為初發(fā)酵和復(fù)發(fā)酵兩步進(jìn)行。

初發(fā)酵試驗(yàn)：將水樣充分混勻，水庫水、自來水、井水樣接種量分別是10 mL，1 mL和10-1mL，再分別接種到接種體積為10 mL盛有3倍濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中，接種量體積為1 mL或少于1 mL接種到普通濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，每個(gè)接種量樣品各接種5只發(fā)酵管。將上述發(fā)酵管放入37±0.5 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24±2 h。若培養(yǎng)液由原來的紫色變?yōu)辄S色，則證明產(chǎn)酸；若小倒管產(chǎn)生氣泡，則說明產(chǎn)氣，對(duì)各個(gè)管產(chǎn)酸產(chǎn)氣陽性情況做好記錄。

復(fù)發(fā)酵試驗(yàn): 將初發(fā)酵試驗(yàn)陽性發(fā)酵管搖勻，用 3 mm接種環(huán)將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接至EC培養(yǎng)液內(nèi)。在44.5±0.5 ℃水浴中培養(yǎng)24±2 h，(水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培養(yǎng)基液面)，接種后所有EC培養(yǎng)液發(fā)酵管比需在30 min內(nèi)放進(jìn)水浴箱中，培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣證實(shí)為糞大腸菌群陽性。

糞大腸菌結(jié)果，根據(jù)不同接種量發(fā)酵管所出現(xiàn)陽性管數(shù)，從糞大腸菌群數(shù)測(cè)定方法中的糞大腸菌群( MPN ) 檢數(shù)表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，按糞大腸菌群計(jì)算方法計(jì)算每升水中糞大腸菌群的MPN值。

2.2.2濾膜法

用經(jīng)過火焰消毒并冷卻的鑷子夾取一張過濾膜放在沙濾頭上，注意濾膜網(wǎng)格朝上，再取出無菌的漏斗安裝到底座上，從漏斗的上邊緣按下漏斗使之牢靠的套在底座上。分別取水庫水、自來水、井水樣100 mL，50 mL和10 mL，將樣品溶液倒入漏斗中，水樣倒入后，按下Start鍵，設(shè)備即開始抽濾，過濾完成后，按下Start鍵自動(dòng)進(jìn)入Dry out(抽干)模式。該步驟完成后，取下濾杯，按下?lián)軇?dòng)桿，用滅過菌的鑷子夾住濾膜邊緣，將濾膜小心取下來，貼放在M-FC培養(yǎng)基內(nèi)。

將培養(yǎng)皿緊密蓋好后，在44.5±0.5 ℃ 恒溫箱中培養(yǎng) 2 4±2 h。糞大腸菌群菌落在M-FC培養(yǎng)基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色，其他非糞大腸菌群菌落呈灰色、淡黃色或無色。計(jì)數(shù)呈藍(lán)或藍(lán)綠色的菌落，每1 L水樣中的糞大腸菌群數(shù)公式：

糞大腸菌群菌落數(shù)(L)=濾膜上生長的糞大腸菌群數(shù)×1000/ 濾過的樣品量(mL) 。

3　結(jié)果與分析

3.1精密度和準(zhǔn)確度分析

精密度和準(zhǔn)確度是可信性的基礎(chǔ)。多管發(fā)酵法對(duì)不同水樣中糞大腸菌群測(cè)定，不同水樣相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.0%-5.3%之間，屬正常范圍之內(nèi)。使用埃希氏大腸桿菌(Escherichia coli)進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)定實(shí)驗(yàn)，回收率在85%-115%之間，表明準(zhǔn)確度和精確度滿足分析方法的要求。多管發(fā)酵法精密度及準(zhǔn)確度、濾膜法精密度及準(zhǔn)確度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、表2。

表1　多管發(fā)酵法精密度及準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2　濾膜法精密度及準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4　結(jié)論

(1)多管發(fā)酵法檢測(cè)不受濁度和濃度的影響適用于任何條件水樣的檢測(cè)，重復(fù)間穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度、精密度和可信度高。但操作繁瑣，工作量大，發(fā)酵時(shí)間長，初發(fā)酵和復(fù)發(fā)酵至少需要72 h。

(2)濾膜法檢測(cè)較清潔的水樣，再現(xiàn)性較好，準(zhǔn)確度、精密度較高，精確快速提高工作效率是未來環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)的發(fā)展方向。

(3)新檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用普及，不僅與操作技術(shù)的簡(jiǎn)易程度和精確度有關(guān)，也與檢測(cè)設(shè)備和試劑的費(fèi)用高低、對(duì)環(huán)境的影響等方面有關(guān)。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展及原理的運(yùn)用，酶底物法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)、熒光原位雜交技術(shù)、自動(dòng)化檢測(cè)方法等檢測(cè)技術(shù)將在未來結(jié)合傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法、濾膜法等傳統(tǒng)方法，以提高監(jiān)測(cè)能力。

[1]國家環(huán)境保護(hù)總局.水質(zhì)糞大腸菌群的測(cè)定:HJ/T347-2007[S].北京：中國環(huán)境出版社,2007.

[2] 國家環(huán)境保護(hù)總局《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》編委會(huì).水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法[M].北京：中國環(huán)境科學(xué)出版社，2002(10):704～705

[3]中國環(huán)境監(jiān)測(cè)總站《環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)質(zhì)量保證手冊(cè)》編寫組.環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)質(zhì)量保證手冊(cè)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1994(8).

Research on Method of Detecting Fecal Coliform in Water

Zhang Qichun, Liu Senlin, Li Yan, Lin Jianhua

(LonggangDistrictEnvironmentalMonitoringStation,Shenzhen,Guangdong518172,China)

The multiple tube fermentation and membrane filter technique were used to detect the fecal coliform in the reservoir water, tap water and well water，and the testing results showed that: when we used multiple tube fermentation method to test water samples, the process was time-consuming. When we detected water samples using the membrane method, the process was quick and easy. The test results obtained from the two methods were comparable, accurate and reliable.

fecal coliform; multi-tube fermentation method; filter method; comparative study

2016-08-07

張綺純(1977—)，女，工程師，主要從事環(huán)境監(jiān)測(cè)工作。

X832

A

1674-9944(2016)16-0109-02