腎結(jié)石患者叢生蛋白和相關(guān)炎癥指標(biāo)的表達(dá)

彭泳涵， 劉　敏， 施曉磊， 陳　銳， 李　凌， 高小峰， 周　鐵

第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院泌尿外科，上?！?00433

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·論著·

腎結(jié)石患者叢生蛋白和相關(guān)炎癥指標(biāo)的表達(dá)

彭泳涵△， 劉敏△， 施曉磊， 陳銳， 李凌， 高小峰*， 周鐵*

第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院泌尿外科，上海200433

目的： 探討腎結(jié)石患者體內(nèi)叢生蛋白(clusterin)的表達(dá)及炎癥反應(yīng)水平。方法： 收集2015年7月—9月在第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院泌尿外科住院的腎結(jié)石成人患者及在體檢中心健康體檢成人的臨床資料，分別作為結(jié)石組和對(duì)照組。結(jié)石組納入47例，中位年齡43.00(33.50～50.00)歲；對(duì)照組納入56例，中位年齡38.50(32.50～53.00)歲。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)兩組血液和尿液中叢生蛋白水平以及血液中炎癥反應(yīng)指標(biāo)，并進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果： 兩組間年齡和性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)石組患者血液叢生蛋白水平低于對(duì)照組[156.85(140.07～173.62)ng/mLvs171.48(151.51～195.09)ng/mL，P<0.01]，兩組間尿液叢生蛋白水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[52.76(42.66～57.37)ng/mLvs53.37(44.40～68.07)ng/mL]。結(jié)石組患者血液白介素1β(interleukin-1β，IL-1β)水平高于對(duì)照組[17.92(16.26～19.18)ng/Lvs13.55(12.06～17.76)ng/L，P<0.01]，結(jié)石組患者血液IL-6水平高于對(duì)照組[53.22(46.04～71.46)ng/Lvs46.58(42.34～52.63)ng/L，P<0.01]。結(jié)論： 腎結(jié)石患者血液叢生蛋白水平降低，炎癥反應(yīng)水平升高。

腎結(jié)石；炎癥反應(yīng)；叢生蛋白；白介素

最近一項(xiàng)全國(guó)性的橫斷面研究[1]顯示，我國(guó)成人泌尿系結(jié)石患病率為6.06%，廣東省患病率超過(guò)10%。腎結(jié)石是泌尿系結(jié)石的主要種類，其中草酸鈣和磷酸鈣結(jié)石約占80%[2]。腎結(jié)石的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，已知與氧化應(yīng)激介導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡和腎臟組織的炎癥反應(yīng)等相關(guān)[3]。叢生蛋白(clusterin)大量存在于人體血液、尿液、腦脊液和精液等體液中，具有分子伴侶活性，可與多種分子結(jié)合并發(fā)揮多種功能[4-5]。叢生蛋白與細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等密切相關(guān)。在胰腺炎、阿爾茲海默癥、心肌損傷等疾病中，叢生蛋白有抗凋亡和抗炎作用[6-7]，也可對(duì)抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[8]。目前，叢生蛋白在腎結(jié)石發(fā)病中的作用鮮有報(bào)道。本研究對(duì)腎結(jié)石患者與健康人群血液和尿液中的叢生蛋白、血液炎癥指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)和分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2015年7月—9月在第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院泌尿外科住院治療的腎結(jié)石患者47例，作為腎結(jié)石組，其中男性39例，女性8例；中位年齡43.00(33.50～50.00)歲。將同期在第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院體檢中心進(jìn)行體檢的健康成人56例作為對(duì)照組，其中男性40例，女性16例；中位年齡38.50(32.50～53.00)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡<18歲、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、特發(fā)性高鈣血癥、痛風(fēng)等風(fēng)濕免疫疾病、腎結(jié)石合并嚴(yán)重腎積水、腎功能衰竭、泌尿系統(tǒng)感染、合并腫瘤等。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集及儲(chǔ)存腎結(jié)石組患者入院后次晨6:00留取血液和尿液各20 mL；對(duì)照組標(biāo)本取自本院體檢中心檢測(cè)后剩余的血液和尿液。血液標(biāo)本室溫自然凝固15 min，然后2 000 ×g離心20 min，收集上清，將標(biāo)本分裝至1.5 mL試管中并做好標(biāo)記，儲(chǔ)存于-80℃冰箱中備檢。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

1.2.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)ELISA試劑盒由上海逸晗生物科技有限公司提供。按照說(shuō)明書進(jìn)行操作，步驟如下：分別設(shè)置空白孔、陰性對(duì)照孔、陽(yáng)性對(duì)照孔及待測(cè)樣品孔，每孔加樣量為50 μL，于37℃孵育1 h后洗滌3次；每孔中加入酶標(biāo)抗體50 μL，37℃孵育1 h，洗滌3次；配置顯色液，每孔中加入100 μL，37℃避光顯色15 min，加入50 μL終止液終止。以空白孔調(diào)零，用Labsystems Multiskan MS 352型酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定光密度(D)值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中叢生蛋白和IL-1β、IL-6濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)比較。檢驗(yàn)水準(zhǔn)(α)為0.05。

2　結(jié)　果

2.1兩組間基本資料比較結(jié)石組中位年齡(43.00 歲)與對(duì)照組(38.50 歲)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組均以男性居多，性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2兩組叢生蛋白和白介素水平比較ELISA檢測(cè)結(jié)果(表1)顯示：結(jié)石組血液叢生蛋白水平低于對(duì)照組(P<0.01)，兩組間尿液叢生蛋白水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)石組IL-1β和IL-6水平均高于對(duì)照組(P<0.01)。

表1　結(jié)石組和對(duì)照組叢生蛋白和炎癥指標(biāo)表達(dá)水平　中位數(shù)(四分位距)

3　討　論

人體血液中富含叢生蛋白。研究[9]顯示，叢生蛋白可以調(diào)節(jié)補(bǔ)體活性、負(fù)向調(diào)控核因子-κB(NF-κB)以及雙向調(diào)控主要的炎癥促進(jìn)因子[如腫瘤壞死因子-α(TNF-ɑ)、IL-6]，從而直接或間接發(fā)揮對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。叢生蛋白不僅可降低炎癥因子表達(dá)水平，發(fā)揮對(duì)臟器的保護(hù)作用，也可以減少氧化應(yīng)激損傷和促進(jìn)細(xì)胞存活[10-11]。

若草酸鈣晶體或磷酸鈣晶體沉積或在高草酸尿癥中，腎臟上皮細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的活性氧物質(zhì)(reactive oxygen species，ROS)，其介導(dǎo)細(xì)胞損傷和炎癥反應(yīng)[12-13]。線粒體內(nèi)的ROS平衡對(duì)維持細(xì)胞代謝功能至關(guān)重要，過(guò)量的ROS導(dǎo)致氧化應(yīng)激，降低單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的抗炎能力，促使受損組織或血循環(huán)中炎癥反應(yīng)發(fā)展。Williams等[14]發(fā)現(xiàn)，草酸鈣腎結(jié)石患者血液中單核細(xì)胞線粒體功能較健康人明顯降低，血液中IL-6水平升高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[15]顯示，草酸鈣晶體在腎臟沉積導(dǎo)致小鼠腎小管上皮細(xì)胞損傷及IL-1β水平升高，而抑制IL-1β等因子可使炎癥反應(yīng)和腎臟病變減輕。蛋白質(zhì)組學(xué)研究[16]也表明，腎臟結(jié)石基質(zhì)中的蛋白種類繁多，功能涉及免疫和炎癥反應(yīng)、組織損傷和修復(fù)等。上述研究表明，炎癥反應(yīng)參與腎結(jié)石發(fā)病過(guò)程，腎結(jié)石發(fā)病過(guò)程中白介素等炎癥指標(biāo)升高。

本研究顯示，結(jié)石組血液叢生蛋白水平顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，尿液中叢生蛋白水平亦略低于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；結(jié)石組血液IL-1β和IL-6水平顯著高于對(duì)照組，提示腎結(jié)石患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)程度較高。腎結(jié)石患者體內(nèi)叢生蛋白水平的降低，可能導(dǎo)致其對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用減弱，進(jìn)而促進(jìn)患者炎癥反應(yīng)的發(fā)展，進(jìn)一步損傷腎臟功能。既往研究[17]證實(shí)，腎結(jié)石發(fā)病過(guò)程中炎癥反應(yīng)及纖維化可造成腎臟功能的慢性損害，增加慢性腎臟疾病和終末期腎臟疾病的發(fā)病率。

腎結(jié)石患者血液中叢生蛋白下降的機(jī)制目前尚不明確。研究認(rèn)為，胰島素可上調(diào)肝臟細(xì)胞內(nèi)叢生蛋白的表達(dá)水平[18]，甲狀腺激素可下調(diào)血液叢生蛋白水平[19]。高鈣血癥和高草酸血癥等是腎結(jié)石生成的重要病因。流行病學(xué)研究[20]顯示，腎結(jié)石與高血壓、糖尿病以及代謝綜合征關(guān)系密切。其中，代謝綜合征與甲狀腺疾病有相關(guān)性，代謝綜合征患者促甲狀腺激素水平相對(duì)較高[21]。因此，代謝以及激素水平等的變化可能是腎結(jié)石患者叢生蛋白水平降低的原因，但有待進(jìn)一步研究明確。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)腎結(jié)石患者血液叢生蛋白水平降低，炎癥反應(yīng)水平升高。臨床上治療腎結(jié)石時(shí)，應(yīng)檢查患者有無(wú)合并代謝疾病和激素水平異常，從而給予全面治療。此外，針對(duì)白介素的抗炎治療可能成為預(yù)防和減輕腎結(jié)石損傷的輔助手段。

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[本文編輯]廖曉瑜， 賈澤軍

Expression levels of clusterin and related in flammatory markers in patients with nephrolithiasis

PENG Yong-han△, LIU Min△, SHI Xiao-lei, CHEN Rui, LI Ling, GAO Xiao-feng*, ZHOU Tie*

Department of Urology, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China

Objective： To investigate the level of clusterin expression and inflammatory response in patients with nephrolithiasis. Methods： Clinical data, blood and urine samples of in patients with nephrolithiasis and healthy adults physical examination center were collected from July to September, 2015 in Changhai Hospital, Second Military Medical University. Fourty-seven cases with median age of 43.00 (33.50-50.00) years and 56 cases with median age of 38.50 (32.50-53.00) years were recruited in the stone and control group, respectively. ELISA tests were conducted to detect serum and urine clusterin level as well as serum inflammatory markers to make comparison between two groups. Results： There were no significant differences between two groups in age and sex. Serum clusterin level was lower in the stone group than that in the control group (156.85 [140.07-173.62] ng/mLvs171.48 [151.51-195.09] ng/mL,P<0.01), while urine clusterin level had no significance compared with the control group (52.76[42.66-57.37] ng/mLvs53.37[44.40-68.07]ng/mL). Serum IL-1β level was higher in the stone group than that in the control group (17.92 [16.26-19.18] ng/Lvs13.55 [12.06-17.76] ng/L,P<0.01), and serum IL-6 level was also higher in the stone group than that in the control group (53.22 [46.04-71.46] ng/Lvs46.58[42.34-52.63] ng/L,P<0.01). Conclusions： Serum clusterin level decreased and the level of inflammatory response increased in patients with nephrolithiasis.

nephrolithiasis; inflammatory response; clusterin; interleukin

2016-06-02[接受日期]2016-07-29

國(guó)家自然科學(xué)基金(81370806)，上海市衛(wèi)生局局級(jí)科研項(xiàng)目(2010173). Supported by National Natural Science Foundation of China(81370806), Scientific Research Project of Shanghai Health Bureau(2010173).

彭泳涵，博士，講師、主治醫(yī)師. E-mail: yonghanyhtl@163.com; 劉敏, 碩士生.E-mail:68747124@qq.com

Corresponding authors). Tel: 021-31161732, E-mail: gxfdoc@sina.com; Tel: 021-31161718, E-mail: wenzhoutie@163.com

10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20160666

R 692.4

A

△共同第一作者(Co-first authors).