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    豬巴氏桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

    2016-10-09 01:52:17吳艷萍山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局256500
    關(guān)鍵詞:小白鼠氏桿菌耐藥性

    吳艷萍 山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局 256500

    豬巴氏桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

    吳艷萍山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局256500

    2015年10月,山東省博興某豬場飼養(yǎng)的仔豬發(fā)生一種以呼吸嚴(yán)重困難和敗血癥為主要特征的疫病。無菌采集病死豬的肺臟等組織進(jìn)行病原分離,通過分離菌株的菌落特征、形態(tài)特征和生化特性等鑒定,分離菌株為豬巴氏桿菌,致病性試驗(yàn)顯示分離菌株具有較強(qiáng)的致病性,藥敏試驗(yàn)顯示分離菌株對青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考和卡那霉素5種藥物敏感。

    豬巴氏桿菌;分離鑒定;藥敏試驗(yàn)

    豬巴氏桿菌病是由豬多殺性巴氏桿菌引起的一種以出血性敗血病、咽喉炎和肺炎為主要特征的急性、繼發(fā)性、細(xì)菌性傳染?。?.2]。該病的發(fā)生無明顯季節(jié)性,但秋冬氣候劇變、飼養(yǎng)條件改變和長途運(yùn)輸?shù)热菀渍T發(fā),故該病在我國一直呈散發(fā)性和地方性流行[3-4]。2015年10月,山東省博興某豬場飼養(yǎng)仔豬發(fā)生以精神沉郁、體溫升高、呼吸困難、口鼻流白色泡沫、氣管內(nèi)有大量泡沫黏液和肺臟充血、出血、淤血等為主要特征的疫病。本研究進(jìn)行了病原的分離鑒定與藥敏試驗(yàn),篩選出了針對該致病菌的敏感性藥物,為發(fā)病豬場防治措施的制定提供了參考。

    1 材料與方法

    無菌采集病死豬的肺臟、脾臟、肝臟、腎臟和淋巴結(jié)等組織。細(xì)菌微量生化反應(yīng)管購自杭州天和微生物試劑有限公司,潔級昆明系小白鼠購自山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,藥敏紙片購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。將采集的臨床病料樣品劃線接種于血液瓊脂平板,37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后,挑取生長良好的單菌落劃線接種于平板進(jìn)行純化,連續(xù)傳3代,觀察菌落的生長特征。挑取純化后的單菌落涂片,革蘭氏染色、鏡檢,觀察分離菌株的形態(tài)特征。將分離菌株分別接種于生化反應(yīng)管,18小時(shí)后觀察生化試驗(yàn)結(jié)果。將分離菌株腹腔注射昆明系小白鼠5只,0.2mL/只,同時(shí)取5只小白鼠腹腔注射培養(yǎng)基作為對照。隔離飼養(yǎng),觀察小白鼠的發(fā)病和死亡情況,對死亡小白鼠進(jìn)行解剖,觀察病理變化。利用K-B菌液涂布法分別測定分離菌株對青霉素等12種常見藥物的敏感性,篩選出針對分離菌株的高敏藥物。判定標(biāo)準(zhǔn)為:當(dāng)抑菌環(huán)直徑在15mm以上判為高敏,抑菌環(huán)直徑在10~15mm之間判為中敏,抑菌環(huán)直徑在10mm以下判為耐藥。

    2 結(jié)果與分析

    (1)病原菌分離培養(yǎng)與純化結(jié)果。培養(yǎng)24小時(shí)后的血液瓊脂平板上可見露珠狀菌落,無溶血現(xiàn)象。經(jīng)連續(xù)3代純化后,得到大小均一、半透明、光滑濕潤和邊緣整齊的露珠狀菌落。

    (2)分離菌株形態(tài)特征觀察結(jié)果。革蘭氏染色后鏡檢可見革蘭氏陰性菌,呈短桿狀。

    (3)分離菌株生化特性鑒定結(jié)果。分離菌株的生化特性如表1所示,其與豬巴氏桿菌的生化特性相符。

    表1 分離菌株的生化特性

    (4)致病性試驗(yàn)結(jié)果。接種分離菌株的5只小白鼠在接種后1小時(shí),開始出現(xiàn)精神沉郁等不適反應(yīng),在接種后12小時(shí)內(nèi)全部死亡。解剖死亡小鼠可見肝臟、肺臟和心臟等臟器組織均具有出血點(diǎn),取死亡小鼠的肝臟、肺臟和心臟等組織可再次分離出巴氏桿菌。同時(shí)接種培養(yǎng)基的5只小白鼠均生長正常,無不適反應(yīng)。

    (5)藥敏試驗(yàn)結(jié)果。如表2所示,分離菌株對青霉素等12種藥物表現(xiàn)出了不同程度的敏感性,其中高敏藥物5種(青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考、卡那霉素),中敏藥物3種(氧氟沙星、慶大霉素、諾氟沙星),耐藥藥物4種(環(huán)丙沙星、四環(huán)素、土霉素、復(fù)方新諾明)。

    表2 分離菌株對12種藥物的敏感性

    3 討論

    豬巴氏桿菌在豬群中屬于條件性致病菌,即該菌在豬群中廣泛存在,當(dāng)豬的免疫力和抗病力下降,該病原菌可大量增殖并侵入機(jī)體發(fā)生內(nèi)源性感染,進(jìn)而引起發(fā)病。故該病的綜合防治措施應(yīng)采取以加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生為主的預(yù)防方法,采取“防重于治”的原則,從源頭上控制該病的發(fā)生和流行。

    目前,臨床上控制豬巴氏桿菌病最有效、最快速的方法是使用抗菌藥物進(jìn)行治療,但是隨著抗菌藥物大量、盲目的濫用,細(xì)菌的耐藥性亦越來越嚴(yán)重,給食品安全和人類健康造成潛在的威脅。張顯浩等[5]研究表明,豬巴氏桿菌分離株對青霉素、氨芐西林和頭孢類藥物均產(chǎn)生了一定的耐藥性。馬增軍等[6]研究表明,豬巴氏桿菌部分分離株對復(fù)方新諾明、慶大霉素和卡那霉素3種藥物耐藥。本研究中的分離菌株雖然對青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考和卡那霉素5種藥物高度敏感,為發(fā)病豬場篩選出了治療性藥物,但是本研究中的分離菌株已對環(huán)丙沙星、四環(huán)素、土霉素和復(fù)方新諾明4種藥物產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。綜合以上研究結(jié)果可以看出,豬巴氏桿菌不同地域分離株對不同藥物均已產(chǎn)生了一定的耐藥性,其整體耐藥性的發(fā)展趨勢不容樂觀,應(yīng)加強(qiáng)重視。

    [1]朱俠.豬巴氏桿菌病及其防控措施[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2015,31(11):132-133.

    [2]王炎炎,黃坤英,丁孟建.豬多殺性巴氏桿菌病的診治[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2013,(1):101-102.

    [3]史正明.仔豬巴氏桿菌病病原的分離與鑒定[J].山東畜牧獸醫(yī),2015,36(9):32-33.

    [4]范靈霞.豬巴氏桿菌病的診斷與防治[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2014,30(12):117.

    [5]張顯浩,陳敏鴻,李冰,等.豬A型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及耐藥性分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2016(1):110-112.

    [6]馬增軍,芮萍,張軍輝,等.豬源多殺性巴氏桿菌分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J].畜牧與獸醫(yī),2015,47(7):93-95.

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