金銀花注射液抗流感病毒作用的實驗研究

陳　麗，顧　燕（.江蘇省中醫(yī)院，南京009；.江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇南京）

金銀花注射液抗流感病毒作用的實驗研究

陳麗1，顧燕2（1.江蘇省中醫(yī)院，南京210029；2.江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇南京211112）

目的考察金銀花注射液的抗流感病毒作用。方法觀察感染流感病毒的小鼠模型注射或灌胃給予不同劑量金銀花注射液后的死亡情況、肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率。結果金銀花注射液不同劑量組（6.6、13.2、26.4 g/kg）能明顯降低流感病毒感染小鼠死亡率，減輕流感病毒感染小鼠肺部病變，金銀花注射液注射給藥3個劑量組存活時間、肺指數(shù)抑制率與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或0.01）；注射給藥效果優(yōu)于灌胃給藥，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），抗流感病毒作用呈劑量依賴性，高劑量組注射給藥效果優(yōu)于陽性對照藥雙黃連注射液，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論金銀花注射液具有抗流感病毒作用。

金銀花；流感，人；注射劑；病毒；抗病毒藥

金銀花具有清熱解毒、疏散風熱的作用，用于臃腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病發(fā)熱等［1］。金銀花富含揮發(fā)油，此外含黃酮類、三萜類及有機酸等成分，具有增強免疫力、止血、利膽、保肝、抗炎、降血脂、溶血和抗生育作用等功效［2-3］，已有銀翹解毒片、銀黃片、銀黃注射液、雙黃連注射液等多種復方制劑廣泛應用于臨床。本研究考察金銀花注射液的抗流感病毒作用，為其臨床應用提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1藥物與試劑金銀花注射液，規(guī)格：每瓶2mL，相當于生藥材10 g，成人日用量為每60千克含40 g生藥量，江蘇省中醫(yī)藥自制，批號：040918；雙黃連注射液，規(guī)格：每支20mL，河南淅川制藥集團有限公司生產(chǎn)，批號：041029；氯化鈉溶液，規(guī)格：500mL∶4.5 g，南京小營制藥廠生產(chǎn)，批號：20040607。乙醚，上海馬陸化工廠生產(chǎn)，批號：020216。

1.1.2動物清潔級美國癌癥研究所（ICR）小鼠317只，由南京醫(yī)科大學提供。

1.1.3病毒及細胞株雞胚接種傳代，雞紅細胞凝集試驗測得效價均為1∶320。流感病毒鼠肺適應株，血凝效價為1∶640，由南京中醫(yī)藥大學溫病教研室提供。

1.1.4主要儀器FA2104上皿電子天平（上海精科天平廠）、凈化工作臺（蘇州凈化設備廠）、孵箱（上海分析儀器廠）。

1.2方法

1.2.1藥物制備用于小鼠的藥物制備：取金銀花注射液，加0.9%氯化鈉注射液（NS）配成0.66、1.32、2.64 g/kg（生藥量）3種質(zhì)量濃度。

1.2.2金銀花注射液對流感病毒鼠肺適應株感染小鼠死亡的保護作用［4-7］

1.2.2.1流感病毒雞胚增毒試驗取9日齡雞，取出胚尿囊，將流感病毒毒株接種于胚尿囊中，37℃培養(yǎng)48 h后取出增毒的尿囊液。再將增毒的尿囊液接種于雞胚尿囊中，重復4次后用于實驗。實驗前做血凝試驗（HA）。

1.2.2.2HA取36孔血凝板，第1孔加入NS 0.9mL，其余孔加NS各0.5mL。精密吸取病毒尿囊液0.1mL加入第1孔內(nèi)，混勻混合后取0.5mL加至第2孔，依次梯度稀釋至第8孔。第9孔不加病毒尿囊液，作空白對照。接著每孔加入0.5%雞紅細胞0.25mL，搖勻，室溫放置2 h。

1.2.2.3流感病毒感染小鼠半數(shù)致死量（LD50）測定取清潔級ICR小鼠56只，13～15 g，雌雄各半，隨機分為七組，每組各8只，取增毒4次的病毒尿囊液，稀釋10倍，每組滴1個病毒濃度。各組小鼠在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液50μL滴鼻，觀察14 d內(nèi)死亡數(shù)。按Reed-Muench法計算LD50。

1.2.2.4對流感病毒感染小鼠死亡的保護作用取清潔級ICR小鼠171只，體質(zhì)量13～16 g，雌雄各半，隨機分為九組，每組各19只。（1）空白對照組：等量NS10mL/kg靜脈給藥；（2）模型組：等量NS 10mL/kg靜脈給藥；（3）雙黃連注射液組 （陽性對照藥組）：10mL/kg靜脈給藥。金銀花注射液Ⅰ組（6.6 g/kg）、Ⅱ組（13.2 g/kg）、Ⅲ組（26.4 g/kg）為靜脈給藥。金銀花注射液Ⅳ組（6.6 g/kg）、Ⅴ組（13.2 g/kg）、Ⅵ組（26.4 g/kg）為灌胃給藥，容量為10mL/kg。各組每天給藥1次，連續(xù)給藥5 d。末次給藥1 h后除空白對照組外，其余各組在乙醚淺麻醉下，以尿囊液30μL（20個LD50）給小鼠滴鼻感染，觀察14 d內(nèi)不同組小鼠感染后發(fā)病及死亡情況，通過比較存活時間考察金銀花注射液對流感病毒感染小鼠死亡的保護作用。

1.2.3金銀花注射液對流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響取清潔級ICR小鼠90只，體質(zhì)量13～16 g，雌雄各半。隨機分為九組，每組各10只。分組及給藥方式均同1.2.2.4項。各組每天給藥1次，連續(xù)給藥5 d。除空白對照組外，其余各組于給藥第1天，在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液30μL（15個LD50）滴鼻感染小鼠，繼續(xù)給藥4 d。末次給藥后將小鼠禁食（不禁飲），第2天稱質(zhì)量后脫頸處死，解剖，取全肺稱質(zhì)量，計算各鼠肺指數(shù)值（g/10 g體質(zhì)量）和肺指數(shù)抑制率［（藥物組-模型組）/模型組×100%］。

1.3統(tǒng)計學處理應用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1　金銀花注射液對流感病毒感染小鼠死亡的保護作用（按生藥量計算）

表2　金銀花注射液對流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響（按生藥量計算）

2　結　果

2.1金銀花注射液對流感病毒鼠肺適應株感染小鼠死亡的保護作用HA結果為1∶640。LD50測定為10.00～2.11 g/kg。模型組小鼠存活時間顯著短于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。金銀花注射液靜脈注射給藥的3個劑量組（Ⅰ～Ⅲ組）均可顯著降低流感病毒感染小鼠死亡率，明顯延長流感病毒感染小鼠的存活時間，其存活時間分別與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。注射給藥中、高劑量組（Ⅱ、Ⅲ組）小鼠存活時間長于陽性對照藥雙黃連注射液組；同劑量下靜脈注射給藥小鼠存活時間長于灌胃給藥，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2金銀花注射液對流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響模型組小鼠肺指數(shù)顯著高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。金銀花注射液靜脈注射給藥3個劑量組（Ⅰ～Ⅲ組）均可明顯降低流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)值，與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05 或0.01）；金銀花注射液靜脈注射給藥3個劑量組（Ⅰ～Ⅲ組）肺指數(shù)抑制率分別為12.7%、22.3%和32.8%，效果優(yōu)于灌胃給藥高、中、低3個劑量組（Ⅳ～Ⅵ組），差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

3　討　論

金銀花經(jīng)提取純化工藝后制得富含有機酸（綠原酸）和黃酮類成分的提取物。金銀花注射液是由金銀花提取物加適量輔料制備而成，金銀花中的有機酸為抗病毒作用的有效成分之一，對常見呼吸道病毒有抑制作用［8-9］，綠原酸與神經(jīng)酰胺酶的2個活性腔均有作用力發(fā)生，具有抗流感病毒H5N1的作用［10］。

本研究結果表明，金銀花注射液3個劑量組（6.6、13.2、26.4 g/kg）能降低感染流感病毒小鼠的死亡率，劑量越高，作用越強，注射給藥中、高劑量組作用強于對照藥雙黃連注射液；同劑量下注射給藥的作用強于灌胃給藥。表明金銀花注射液靜脈注射給藥對流感病毒感染小鼠具有明顯的保護作用。各劑量組能減輕小鼠的肺部病變，作用趨勢同前。本研究為金銀花提取物制成注射劑及在臨床上用于病毒性感冒提供了理論支持。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：221.

［2］徐冰，代俊彥.淺析金銀花的藥理作用與臨床應用［J］.黑龍江科技信息，2012（15）：71.

［3］趙梅英，李莉.抗病毒中藥在臨床中的應用及優(yōu)勢［J］.實用醫(yī)技雜志，2007，14（23）：3218-3219.

［4］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：239-378.

［5］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：1649-1723.

［6］中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.新藥（西藥）臨床前研究指導原則匯編［M］.北京：中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局，1993：51.

［7］季志平，朱萱萱，倪文澎，等.金銀花提取物抗病毒的作用研究［J］.中國醫(yī)藥導刊，2009，11（1）：92-93.

［8］胡克杰，孫考祥，王璟璐，等.氯原酸體外抗病毒作用研究［J］.哈爾濱醫(yī)科大學學報，2001，35（6）：430-432.

［9］郭承軍，石俊英.金銀花抗小鼠流感作用的譜效關系研究［J］.中藥藥理與臨床，2009，25（4）：50-52.

［10］沈霞，羅旋，李娜.金銀花抗流感病毒H5N1的分子機理研究［J］.陜西中醫(yī)，2012，33（9）：1247-1248.

Experimentalstudy on anti-influenza viruseffectof Honeysuckle Injection

Chen Li1，Gu Yan2（1.Jiangsu ProvincialHospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjiang，Jiangsu 210029，China；2.Jiangsu Ruibo Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanjiang，Jiangsu 211112，China）

ObjectiveTo investigate the effectof the anti-influenza virusofHoneysuckle Injection.MethodsThemortality，lung index and inhibiting rate of lung index were observed in the influenza virus infected micemodel by giving different dosesofHoneysuckle Injectionwith injection orgavage.ResultsThe differentHoneysuckle Injection doses（6.6，13.2，26.4 g/kg）groups could significantly reduce themortality ofmice infected by influenza virusand alleviated the lung lesion inmice infected by influenza virus，the survival time，inhibiting rate of lung index had statisticaldifferencesbetween 3 dosesgroupsand themodel group（P＜0.05 or 0.01）；the effectof injectionwasbetter than thatof gavage，the differencewas statistically significant（P＜0.05）. The effectofanti-influenza virus showed the dose-dependence，the effectof the high dose by injection administration was superior to thatof the positive control Shuanghuanglian Injection，the differencewas statistically significant（P＜0.05）.ConclusionHoneysuckle Injection has the effectofantiinfluenza virus.

Flos lonicerae；Influenza，human；Injectio；Virus；Antiviralagents

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.02.006

A

1009-5519（2016）02-0175-03

陳麗（1982-），本科，主要從事藥劑調(diào)配工作。

2015-08-26）