烏雞白鳳丸治療原發(fā)性痛經(jīng)的實(shí)驗(yàn)研究

郭起岳，吳清和，操紅纓，茹　麗，劉　嬋，吳　君，郭重儀，黃　萍*

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技產(chǎn)業(yè)園，廣州　510445；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州　510006；3.山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，煙臺　264100；4.暨南大學(xué)，廣州　510632)

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烏雞白鳳丸治療原發(fā)性痛經(jīng)的實(shí)驗(yàn)研究

郭起岳1，吳清和2，操紅纓2，茹麗1，劉嬋1，吳君3，郭重儀4，黃萍2*

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技產(chǎn)業(yè)園，廣州510445；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州510006；3.山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，煙臺264100；4.暨南大學(xué)，廣州510632)

目的探討烏雞白鳳丸治療原發(fā)性痛經(jīng)的作用機(jī)制。方法利用縮宮素所致SD雌性大鼠痛經(jīng)模型，觀察烏雞白鳳丸不同劑量對大鼠扭體潛伏期、30min內(nèi)扭體發(fā)生率和扭體次數(shù)、子宮組織中PGF2α和PGE2含量的影響；采用常規(guī)方法制備大鼠離體子宮標(biāo)本，通過BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，以大鼠子宮平滑肌條的平均張力和收縮頻率作為評價(jià)指標(biāo)，觀察不同劑量烏雞白鳳丸對大鼠子宮肌收縮活動及縮宮素所致子宮痙攣的作用。結(jié)果烏雞白鳳丸能明顯延長痛經(jīng)模型大鼠扭體潛伏期，降低30min內(nèi)扭體發(fā)生率，減少扭體次數(shù)(P<0.01)；能明顯降低痛經(jīng)模型大鼠子宮組織中PGF2α的含量(P<0.01)，升高PGE2的含量(P<0.05)，降低PGF2α/PGE2比值(P<0.01)；可顯著降低大鼠正常子宮和縮宮素引起的痙攣?zhàn)訉m平滑肌條的平均張力和收縮頻率(P<0.01)。結(jié)論烏雞白鳳丸對原發(fā)性痛經(jīng)造成的疼痛具有良好的改善作用，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)子宮組織內(nèi)PGF2α和PGE2含量及抑制子宮收縮相關(guān)。

烏雞白鳳丸；原發(fā)性痛經(jīng)；大鼠痛經(jīng)模型；前列腺素；離體

原發(fā)性痛經(jīng)又稱功能性痛經(jīng)，是指月經(jīng)前后或月經(jīng)期在生殖器官無器質(zhì)性病變存在時(shí)發(fā)生的下腹疼痛、墜脹及其他不適感，臨床主要表現(xiàn)為下腹部痙攣性疼痛。流行病學(xué)研究表明，原發(fā)性痛經(jīng)是目前婦科最常見的疾病之一，根據(jù)疼痛強(qiáng)度、對工作能力的影響和對鎮(zhèn)痛藥的需求程度可將痛經(jīng)分為輕度、中度和重度[1]。國內(nèi)抽樣調(diào)查表明，我國婦女痛經(jīng)發(fā)生率為33.1%，其中原發(fā)性者占53.2%[2]，主要發(fā)生群體為青春期少女和未婚或未育的年輕婦女[3]。烏雞白鳳丸是傳統(tǒng)婦科良藥，全方配伍，藥性平和，不寒不躁；具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、調(diào)經(jīng)止帶之功效；臨床上用于氣血兩虛、身體虛弱、腰膝酸軟、月經(jīng)不調(diào)和崩漏帶下等癥。近年來，其治療價(jià)值在臨床上得到肯定，其作用機(jī)制被現(xiàn)代藥理學(xué)研究所證實(shí)[4-6]，但用于治療原發(fā)性痛經(jīng)的報(bào)道卻不多。本研究以原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病因素為著眼點(diǎn)，旨在通過觀察烏雞白鳳丸對痛經(jīng)模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用和前列腺素含量的影響，同時(shí)觀察對大鼠離體子宮平滑肌收縮功能和縮宮素引起的大鼠離體子宮平滑肌收縮功能的作用，探討烏雞白鳳丸治療原發(fā)性痛經(jīng)的作用機(jī)制，為臨床用藥提供藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器RT-2100C酶標(biāo)儀(深圳雷社生命科學(xué)股份有限公司)；BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),HW-400S恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)。

1.2試藥烏雞白鳳丸(干膏粉)(廣州陳李濟(jì)藥廠)，臨床口服，1次3.5g，每日2次；阿司匹林(印尼拜耳公司)，批號為BTA6EA，0.1g/片;月月舒(沖劑)(河南省宛西制藥股份有限公司)，每袋10g，臨床劑量為每次1袋，每日2次；己烯雌酚注射液(廣州白云山明興制藥有限公司)，1mL/支，1mL∶2mg；縮宮素(上海第一生化藥業(yè)有限公司)，10u/支。大鼠前列腺素F2α酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,大鼠前列腺素E2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(上海卓康生物科技有限公司)。

1.3動物SD大鼠，SPF級，體質(zhì)量180～220g，雌性，由廣東省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK(粵)2003-0002，動物飼料也由該中心提供。

2　方法

2.1對縮宮素致痛經(jīng)模型大鼠的影響選取70只雌性SD大鼠，隨機(jī)分為空白對照組、模型對照組、阿司匹林組、月月舒組和烏雞白鳳丸低、中、高劑量組，每組10只。從第1天開始，連續(xù)皮下注射己烯雌酚注射液10d(人工造成動物處于相同的動情期，以便提高子宮平滑肌對藥物的敏感性)，每日1次，第1天每只大鼠 0.8mg，第2～9天每只大鼠0.4mg，第10天每只大鼠0.8mg。從第5天開始對大鼠按照20mL·kg-1的體質(zhì)量灌胃給藥，空白對照組與模型對照組分別給予等體積的蒸餾水，每日1次，連續(xù)7d。末次注射己烯雌酚24h、給藥(蒸餾水)1h后，腹腔注射縮宮素2U/只，觀察30min內(nèi)大鼠的疼痛反應(yīng)，以扭體反應(yīng)(大鼠腹部收縮內(nèi)凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側(cè)肢體內(nèi)旋)為子宮強(qiáng)烈收縮(痛經(jīng))的指標(biāo)，包括扭體發(fā)生率、潛伏期及次數(shù)。扭體發(fā)生率=發(fā)生扭體動物數(shù)/10×100%。觀察30min后，處死大鼠，剝離大鼠子宮，用精密儀器稱取0.5g，加1mL生理鹽水，勻漿，離心，取上清液，采用大鼠前列腺素F2α酶聯(lián)免疫檢測試劑盒、大鼠前列腺素PGE2酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測PGF2α和PGE2含量[7-8]。

2.2對大鼠離體子宮肌收縮活動的影響取成年未孕正常雌性SD大鼠8只，實(shí)驗(yàn)前皮下注射己烯雌酚0.5mg·kg-1，連續(xù)3d，以促其處于動情前期或動情期，提高子宮對藥物的敏感性。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用頸椎脫臼法處死大鼠，迅速剪開腹腔，輕輕剝離子宮周圍脂肪組織，穿線結(jié)扎陰道端，剪取長約2cm的子宮，立即置于盛有洛氏液的玻璃平皿中，小心清除殘留的結(jié)締組織和脂肪，陰道端固定于盛有洛氏液浴槽的L形通氣管小鉤上，另一端與肌力換能器相連。恒溫水浴保持工作溫度為37±0.5 ℃，并不斷向工作液中通入氧氣，記錄肌條的等長收縮。待子宮舒縮穩(wěn)定后，記錄一段正常活動曲線作為對照。然后采取累積給藥方式，向浴槽中加入烏雞白鳳丸藥液，使其終質(zhì)量濃度分別達(dá)到0.5，1.0和2.0mg·mL-1，記錄每次給藥后10min內(nèi)子宮收縮曲線，觀察大鼠子宮平滑肌條的平均張力(g)和收縮頻率(次·10min-1)。藥物劑量指浴槽中的終質(zhì)量濃度。洛氏液實(shí)驗(yàn)前配制：氯化鈉9g，氯化鉀 0.42g，氯化鈣0.21g，碳酸氫鈉0.1～0.3g，葡萄糖1.0～2.5g，加蒸餾水至1 000mL[9-10]。2.3對縮宮素所致離體子宮痙攣的影響取成年未孕正常雌性SD大鼠8只，實(shí)驗(yàn)前皮下注射己烯雌酚0.5mg·kg-1，連續(xù)3d，以促其處于動情前期或動情期，提高子宮對藥物的敏感性。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用頸椎脫臼法處死大鼠，迅速剪開腹腔，輕輕剝離子宮周圍脂肪組織，穿線結(jié)扎陰道端，剪取長約2cm的子宮，立即置于盛有洛氏液的玻璃平皿中，小心清除殘留的結(jié)締組織和脂肪，陰道端固定于盛有洛氏液浴槽的L形通氣管小鉤上，另一端與肌力換能器相連。恒溫水浴保持工作溫度為37±0.5 ℃，并不斷向工作液中通入氧氣，記錄肌條的等長收縮。子宮舒縮穩(wěn)定后，記錄一段正?；顒忧€，然后加入縮宮素0.1u(終濃度為0.005u·mL-1)，待曲線收縮平衡，記錄10min內(nèi)子宮收縮曲線后，采取累積給藥，向浴槽中加入烏雞白鳳丸藥液，使其終質(zhì)量濃度分別達(dá)到0.5，1.0和2.0mg·mL-1，記錄每次給藥后10min內(nèi)子宮收縮曲線，觀察大鼠子宮平滑肌條的平均張力(g)和收縮頻率(次·10min-1)。藥物劑量指浴槽中的終質(zhì)量濃度。洛氏液實(shí)驗(yàn)前配制：氯化鈉 9g，氯化鉀0.42g，氯化鈣0.21g，碳酸氫鈉0.1～0.3g，葡萄糖1.0～2.5g，加蒸餾水至1 000mL[9-10]。

2.4統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，多組間比較采用方差分析法。

3　結(jié)果

3.1對縮宮素致痛經(jīng)模型大鼠的影響與正常對照組比較，模型對照組大鼠扭體發(fā)生率增加(P<0.01)，扭體潛伏期縮短(P<0.01)；30 min內(nèi)扭體次數(shù)增多(P<0.01)；子宮組織PGF2α含量增加(P<0.01)，PGE2含量降低(P<0.05)，PGF2α/PGE2比值增高(P<0.01)。與模型對照組比較，烏雞白鳳丸中、高劑量和月月舒及阿司匹林對縮宮素所致大鼠的扭體潛伏期和30 min內(nèi)扭體次數(shù)具有明顯的抑制作用，可降低PGF2α/PGE2比值(P<0.01)；烏雞白鳳丸高劑量、月月舒及阿司匹林可降低大鼠子宮內(nèi)膜中的PGF2α含量(P<0.05～0.01)，增加大鼠子宮內(nèi)膜中PGE2含量(P<0.05)。見表1～2。

表1烏雞白鳳丸對縮宮素所致大鼠疼痛扭體反應(yīng)的影響

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與空白對照組比較▲P<0.05，▲▲P<0.01。

表2烏雞白鳳丸對大鼠子宮組織PGF2α和PGE2的影響

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01;與空白對照組比較▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3.2對大鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響烏雞白鳳丸中、高劑量可降低大鼠子宮平滑肌條的平均張力(P<0.05)；烏雞白鳳丸低、中、高劑量可降低大鼠子宮平滑肌條的收縮頻率(P<0.05)。見表3。

3.3對縮宮素所致離體子宮痙攣的影響大鼠子宮平滑肌條在加入縮宮素后的平均張力和收縮頻率升高(P<0.01)；烏雞白鳳丸中、高劑量可降低大鼠子宮平滑肌條在加入縮宮素后的平均張力(P<0.01)；烏雞白鳳丸低、中、高劑量可降低大鼠子宮平滑肌條在加入縮宮素后的收縮頻率(P<0.01)。見表4。

表3烏雞白鳳丸對大鼠正常離體子宮的影響

注：*與給藥前正常值比較P<0.05。

表4烏雞白鳳丸對縮宮素誘發(fā)大鼠離體子宮收縮的影響

注：**與給縮宮素前正常值比較P<0.01；▲▲與縮宮素組比較P<0.01。

4　討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，子宮內(nèi)膜產(chǎn)生和釋放的PGF2α過多，導(dǎo)致PGF2α/PGE2比值過度升高，高濃度的PGF2α作用于螺旋小動脈壁上的PGF2α受體，引起子宮平滑肌痙攣性收縮，表現(xiàn)為子宮平滑肌張力增高、收縮幅度增加等，導(dǎo)致子宮血流減少、子宮缺血及骨盆神經(jīng)末梢對化學(xué)、物理刺激痛閾降低等。子宮異常收縮、缺血及缺氧，酸性代謝產(chǎn)物堆積于肌層而導(dǎo)致痛經(jīng)[11-14]。由實(shí)驗(yàn)可知，烏雞白鳳丸能很好地抑制痛經(jīng)模型大鼠的扭體發(fā)生率、扭體潛伏期和30min內(nèi)扭體次數(shù)。拮抗縮宮素誘發(fā)大鼠子宮肌痙攣所致疼痛反應(yīng)，降低大鼠子宮內(nèi)膜中PGF2α的含量，升高子宮內(nèi)膜中PGE2的含量，進(jìn)而引起PGF2α/PGE2比值的升高；同時(shí)，烏雞白鳳丸還對正常大鼠離體子宮平滑肌具有明顯的抑制作用，能明顯對抗縮宮素所致的子宮平滑肌強(qiáng)烈收縮，使收縮頻率顯著減少，子宮平均張力顯著減弱，能緩解子宮平滑肌的痙攣性收縮。由此可知，烏雞白鳳丸可抑制原發(fā)性痛經(jīng)引起的子宮痙攣疼痛，這與其本身可抑制子宮異常收縮的作用有關(guān)，同時(shí)與其降低子宮內(nèi)膜中PGF2α的含量和升高子宮內(nèi)膜中PGE2的含量、升高PGF2α/PGE2比值的作用相關(guān)。

烏雞白鳳丸作為中醫(yī)傳統(tǒng)名貴中成藥，近些年來，其治療價(jià)值在婦科領(lǐng)域進(jìn)一步得到肯定，在內(nèi)科、骨科、傳染科和男科諸多領(lǐng)域也得到廣泛地證實(shí)和應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)通過驗(yàn)證烏雞白鳳丸對實(shí)驗(yàn)性痛經(jīng)的治療作用，初步探討其作用機(jī)制，從而為烏雞白鳳丸臨床上用于治療原發(fā)性痛經(jīng)提供了一定的藥效學(xué)依據(jù)。

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Study on the treatment on primary dysmenorrhea with Wujibaifeng Pills

GUO Qiyue1，WU Qinghe2，CAO Hongying2，RU Li1，LIU Chan1，WU Jun3，GUO Zhongyi4，HUANG Ping2*

(1.Sci-tech Industrial Park，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510445，China；2.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China；3.Shandong College of Traditional Chinese Medicine，Yantai 264100，China；4.Jinan University，Guangzhou 510632，China)

ObjectiveToexplorethetherapeuticmechanismofWujibaifengPills.MethodByusingthedysmenorrheamodelofSDfemaleratsinducedbyoxytocin，theeffectofdifferentdosesofWujibaifengPillsonlatencyperiodoftwistbodyofratswasobserved，theincidenceandnumberoftwistbodyin30minsweremeasured，andthecontentofPGF2αandPGE2ofuteruswasdetected；byroutinemethod,thespecimenofuteruswereprepared，accordingtotheevaluateaveragetensionandcontractilityfrequencyofuterinesmoothmuscle(bybiologicalandfunctionalexperimentalsystem-BL-420E)，thecontractilityandcramping(oxytocin-induced)ofuterusatdifferentdosesofWujibaifengPillswereexplored.ResultAfteradministeredWujibaifengPills，thelatencyperiodoftwistbodyofprimarydysmenorrhearatswasobviouslyextended，theincidenceandnumberoftwistbodyin30minswasmarkedlyreduced(P<0.01)；thecontentofPGF2αofprimarydysmenorrhealrats′uteruswaslargelydecreased(P<0.01)，PGE2increased(P<0.05)andtheratioofPGF2α/PGE2significantlydecreased(P<0.01).Theaveragetensionandcontractionfrequencyofnormalorcramping(oxytocin-induced)uterinesmoothmusclewereremarkablylowered(P<0.01).ConclusionWujibaifengPillscouldvisiblyimprovethepainofprimarydysmenorrhea，andthemechanismislikelyrelatedtoregulatingthecontentofPGF2αandPGE2ofuterusandinhibitingthecontractionofuterus.

WujibaifengPills；primarydysmenorrhea；dysmenorrheamodelofrats；prostaglandin(PG)；uterus

廣東省部產(chǎn)學(xué)研專項(xiàng)資金企業(yè)創(chuàng)新平臺(編號：2013B090800013)

郭起岳，男，碩士，主管中藥師

黃萍，女，教授，博士生導(dǎo)師

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.013

R965

A

1004-2407(2016)05-0482-04

2015-12-20)