丹參在炮制大生產(chǎn)過(guò)程中丹酚酸B的損失情況研究

方歡樂(lè)，陳衍斌，盧新義，孫寶平

(1.西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院，西安　710125；2.陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，西安　710075)

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丹參在炮制大生產(chǎn)過(guò)程中丹酚酸B的損失情況研究

方歡樂(lè)1，陳衍斌2，盧新義2，孫寶平2

(1.西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院，西安710125；2.陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，西安710075)

目的考察丹參藥材炮制大生產(chǎn)過(guò)程中指標(biāo)性成分丹酚酸B的含量變化及損耗情況。方法進(jìn)行10批次丹參飲片炮制生產(chǎn)，應(yīng)用HPLC法，在生產(chǎn)過(guò)程各主要工藝點(diǎn)進(jìn)行跟蹤取樣，測(cè)定丹酚酸B的含量并計(jì)算損耗；同時(shí)在其中一個(gè)批次藥材炮制大生產(chǎn)過(guò)程中，檢測(cè)每個(gè)工藝環(huán)節(jié)對(duì)丹酚酸B的含量的影響。結(jié)果原藥材、水洗藥材、潤(rùn)透藥材和切片4個(gè)取樣點(diǎn)丹酚酸B的平均含量分別為6.83%，4.72%，4.46%和3.55%，相對(duì)原藥材的損失情況分別為30.84%，34.59%和47.99%。水洗工藝直接導(dǎo)致丹酚酸B損失22.11%，最終損失高達(dá)47.48%。結(jié)論嚴(yán)格控制(優(yōu)化)水洗工藝，可有效保留丹酚酸B的含量，提高丹參的炮制效率。

丹酚酸B；丹參；炮制；損耗

丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根莖；具有活血調(diào)經(jīng)、涼血消癰和養(yǎng)血安神的功效[1]；用于胸痹心痛、脘腹脅痛、瘕瘕積聚、熱痹疼痛、心煩不眠、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)經(jīng)閉和瘡瘍腫痛等癥狀。丹參的化學(xué)成分包括脂溶性有效成分、水溶性有效成分及其他成分，丹酚酸B是主要的水溶性有效成分，被《中國(guó)藥典》列為丹參含量測(cè)定指標(biāo)之一。丹酚酸B是丹參治療心血管疾病的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)成分之一[2]，具有抗氧化、抗凝血、抗血栓形成、調(diào)血脂及細(xì)胞保護(hù)等藥理作用，同時(shí)還具有保護(hù)心血管系統(tǒng)、肝臟、腎臟和肺等組織器官、防治糖尿病并發(fā)癥及抗腫瘤等藥理作用[3]。

丹參片是常用的炮制品，《中國(guó)藥典》[4]規(guī)定其加工過(guò)程為：除去雜質(zhì)和殘莖，洗凈，潤(rùn)透，切厚片，干燥。在飲片炮制時(shí)，存在于根皮中的水溶性有效成分丹酚酸B極易損失，李慧芬等[5]對(duì)丹參炮制前后丹酚酸B的含量變化進(jìn)行了研究，陸小華[6]考察了不同炮制方法對(duì)丹參藥材中丹酚酸B的影響，李懿[7]、閆東暉[8]通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)研究考察了炮制對(duì)丹參有效成分含量的影響，不同炮制品中丹酚酸B的含量均明顯降低，張喜鋒等[9]在建立丹參飲片炮制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，丹參片、酒丹參和醋炙丹參中水溶性成分轉(zhuǎn)移率偏低。在工業(yè)化大生產(chǎn)過(guò)程中，受到炮制設(shè)備、炮制時(shí)間等多種因素影響，飲片中有效成分變化情況更為復(fù)雜，目前針對(duì)丹參飲片工業(yè)化大生產(chǎn)中丹酚酸B的含量變化情況還未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)跟蹤10批丹參片產(chǎn)業(yè)化大生產(chǎn)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)(水洗、浸潤(rùn)和切制工藝)，通過(guò)大量數(shù)據(jù)測(cè)定及分析，累積多批次丹參飲片中丹酚酸B的含量變化數(shù)據(jù)，確定丹參藥材炮制過(guò)程中丹酚酸B的損耗變化規(guī)律，為丹參飲片大生產(chǎn)提供理論依據(jù)和炮制方法改進(jìn)建議。

1　儀器與試藥

1.1儀器GZX-GFC.101-1-BS型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；FW200A型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，HSYZ-SP型電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；MA30型快速水分測(cè)定儀(德國(guó)賽多利斯公司)；AR1140型電子天平(美國(guó)梅特勒奧豪斯公司)；LC-2010AHT型高效液相色譜儀(日本島津公司)；ZSX-PD-3004型切藥機(jī)(江陰市奔達(dá)藥化機(jī)械設(shè)備廠)；010411型帶式干燥機(jī)(常州市一新干燥設(shè)備有限公司)。

1.2試藥丹參藥材，產(chǎn)地山東，按照2010年版《中國(guó)藥典》檢驗(yàn)，全部合格，批號(hào)：20120202，20120203，20120204，20120205，20120206，20120301，20120302，20120303，20120304，20120305，每批5kg；丹酚酸B對(duì)照品，批號(hào)111562-201110，含量測(cè)定用，中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純；水為高純水；其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1丹參飲片炮制方法參照2010年版《中國(guó)藥典》一部[4]丹參炮制項(xiàng)下方法進(jìn)行操作：將丹參藥材中的雜質(zhì)和殘莖去除，將去除了雜質(zhì)和殘莖的丹參藥材置于洗藥機(jī)中，迅速用水沖洗藥材表面的泥土，沖洗過(guò)程約1min，將洗凈的藥材置于中轉(zhuǎn)物料槽中，加蓋，悶潤(rùn)，至藥材全部潤(rùn)透，將潤(rùn)透藥材用切藥機(jī)ZSX-PD-3004切厚片，干燥，得丹參飲片。

2.2丹酚酸B含量測(cè)定方法

2.2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)為流動(dòng)相；流速為1mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。理論板數(shù)按照丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B對(duì)照品74.1mg，置于50mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為1.482mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液；精密吸取2mL，置于20mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.148 2mg·mL-1的對(duì)照品溶液，。

2.2.3供試品溶液的制備樣品在60±5 ℃干燥后用FW200A高速萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，過(guò)3號(hào)篩，作為供試藥粉。取供試藥粉0.2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇50mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1h，放冷，再稱定質(zhì)量，用體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.4對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取質(zhì)量濃度為1.482mg·mL-1的丹酚酸B對(duì)照品儲(chǔ)備溶液2，2，5，2，2和5mL，分別置于200，100，100，20，10和10mL量瓶中，配制成質(zhì)量濃度分別為0.014 82，0.029 64，0.074 1，0.148 2，0.296 4和0.741mg·mL-1的丹酚酸B對(duì)照品，按照上述色譜條件，依次精密吸取對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，得回歸方程：Y=12 891 035 X-19 687(r=0.999 9)。結(jié)果表明，進(jìn)樣量為0.148 2～7.41μg時(shí)，丹酚酸B呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5精密度實(shí)驗(yàn)取丹參藥材，按照2.2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行操作，精密吸取質(zhì)量濃度為0.148 2mg·mL-1的對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算丹酚酸B的含量，RSD值為0.52%(n=6)，表明精密度良好。

2.2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取丹參藥材，按照2.2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行操作，分別在0，3，6，9，12和18h測(cè)定峰面積，計(jì)算丹酚酸B的含量，RSD值為1.02%(n=6)。表明供試品溶液在18h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取丹參藥材(批號(hào)20120202) 粉末6份，每份0.2g，精密稱定，按照2.2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行操作，計(jì)算丹酚酸B的含量，結(jié)果丹酚酸B的平均含量為6.58%，RSD值為1.09%(n=6)，表明重復(fù)性良好。2.2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)取丹參藥材(批號(hào)20120202)粉末6份，每份0.1g，精密稱定，加入質(zhì)量濃度為1.482mg·mL-1的丹酚酸B對(duì)照品儲(chǔ)備液3，4和5mL各2份，按照2.2.3項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，測(cè)定丹酚酸B的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果丹酚酸B的平均回收率為99.55%，RSD值為1.23%(n=6)，表明回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.9樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算丹酚酸B的含量。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.310批丹參炮制生產(chǎn)丹酚酸B的損耗情況跟蹤10批丹參飲片大生產(chǎn)，按照2.2項(xiàng)下方法，在4個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行取樣。第1個(gè)點(diǎn)為打開包裝后取樣，即原藥材；第2個(gè)點(diǎn)為丹參藥材除去雜質(zhì)和殘莖，快速洗凈后取樣，即水洗藥材；第3個(gè)點(diǎn)為潤(rùn)透的丹參藥材，即潤(rùn)透藥材；第4個(gè)點(diǎn)為切厚片、干燥后取樣，即丹參飲片。處理4個(gè)取樣點(diǎn)的樣品，測(cè)定丹酚酸B的含量，計(jì)算相對(duì)原藥材的累計(jì)損失率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1Resultsofrecoverytest

取樣量/g樣品中量/mg加入量/mg測(cè)得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%0.09906.514.44611.03101.5899.551.230.10436.864.44611.2498.440.10757.075.92812.9699.400.10707.045.92812.99100.250.09706.387.41013.7599.390.10056.617.41013.9098.27

圖1HPLC圖

A.對(duì)照品；B.供試品；1.丹酚酸B

Fig.1HPLCchromatograms

A.referencesubstance；B.sample；1.salvianolicacidB

表2丹酚酸B的損耗實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.2LosstestresultsofsalvianolicacidB

批次原藥材含量/%水洗藥材含量/%累計(jì)損失率/%潤(rùn)透藥材含量/%累計(jì)損失率/%丹參飲片含量/%累計(jì)損失率/%201402026.924.4735.404.0841.043.9143.50201402038.175.4832.934.5544.313.7953.61201402046.525.889.825.6713.043.9439.57201402055.944.4525.084.4225.592.8851.52201402066.553.7642.604.2035.883.2051.15201403016.264.0135.944.7024.923.7140.73201403026.504.8924.774.3233.543.7542.31201403037.134.3538.993.3353.303.0157.78201403047.554.6138.944.8935.233.6851.26201403056.715.3021.014.4833.233.6345.90x±s6.82±0.654.72±0.6730.55±10.164.46±0.6034.01±11.193.55±0.3847.73±6.15

注：累計(jì)損失率=(原藥材含量-樣品含量)/原藥材含量×100%。

由表2可知，在水洗、潤(rùn)透、切片和干燥的炮制大生產(chǎn)過(guò)程中，丹參原藥材、水洗藥材、潤(rùn)透藥材和丹參飲片中丹酚酸B的含量呈遞減趨勢(shì)，同原藥材相比丹酚酸B的累計(jì)損失量不斷增加。由表2可知，4個(gè)取樣點(diǎn)10批樣品的平均含量分別為6.83%，4.72%，4.46%和3.55%。水洗藥材、潤(rùn)透藥材和丹參飲片與原藥材比較，丹酚酸B的損失情況分別為30.84%，34.59%和47.99%。由此可見(jiàn)，在丹參飲片炮制大生產(chǎn)過(guò)程中，水洗工藝使丹酚酸B損失量最大。

2.4大生產(chǎn)條件下按照工藝步驟多次隨機(jī)抽取樣品實(shí)驗(yàn)跟蹤20140305批藥材生產(chǎn)過(guò)程，針對(duì)每個(gè)工藝環(huán)節(jié)進(jìn)行多次取樣，考察在大生產(chǎn)過(guò)程中，各個(gè)環(huán)節(jié)丹酚酸B的損耗情況。

打開商品包裝后，按照《中國(guó)藥典》取樣原則直接取原藥材，為1#樣品；原藥材揀凈雜質(zhì)，經(jīng)洗藥機(jī)清洗后取樣，為2#樣品；洗凈藥材悶潤(rùn)1h取樣，為3#樣品；洗凈藥材悶潤(rùn)2h取樣，為4#樣品；洗凈藥材悶潤(rùn)3h取樣，為5#樣品；悶潤(rùn)3h，藥材潤(rùn)透，開始用切藥機(jī)切厚片，經(jīng)帶式干燥機(jī)在70±5 ℃干燥后取樣，為6#樣品；悶潤(rùn)4h，切厚片，干燥后取樣，為7#樣品；悶潤(rùn)5h，切厚片，干燥后取樣，為8#樣品。每個(gè)取樣點(diǎn)取樣3份，處理各取樣點(diǎn)的樣品，測(cè)定丹酚酸B的含量，計(jì)算損耗率，其含量變化見(jiàn)表3。

表3按照工藝步驟多次取樣測(cè)定結(jié)果

Tab.3Testresultsformultiplesamplingbyprocesssteps

取樣點(diǎn)丹酚酸B含量/%樣1樣2樣3平均含量/%累積損耗率/%1#6.716.726.806.74±0.05—2#5.305.185.275.14±0.0622.11±1.003#4.674.714.824.73±0.0829.82±0.644#4.484.414.394.43±0.0534.27±1.105#4.124.164.234.17±0.0538.13±0.416#4.254.224.274.25±0.0236.94±0.317#3.883.823.933.88±0.0542.43±0.568#3.633.453.543.54±0.0947.48±1.43

由表3可知，水洗工藝直接導(dǎo)致22.11%的丹酚酸B損失，3#～5#為浸潤(rùn)工藝過(guò)程的樣品、6#～8#為切制工藝過(guò)程的樣品。由數(shù)據(jù)可見(jiàn)，在水洗過(guò)程中丹酚酸B的含量損失較大，浸潤(rùn)和切制工藝中丹酚酸B的含量隨時(shí)間推移而不斷損失，隨著炮制大生產(chǎn)的進(jìn)行，最終丹酚酸的累積損耗率高達(dá)47.48%。

3　討論

丹參為常用中藥材，飲片用量非常大，丹參飲片與丹參藥材中丹酚酸B的含量有明顯差異，有效成分的大量損耗導(dǎo)致藥效降低和藥材資源浪費(fèi)。通過(guò)研究，掌握丹參有效成分在大生產(chǎn)過(guò)程中損失的規(guī)律，有益于提高丹參飲片中有效成分的含量，是一項(xiàng)非常有意義的課題。

丹酚酸B是丹參發(fā)揮療效作用的主要水溶性成分之一，炮制過(guò)程中，成分損失的主要原因有：生產(chǎn)過(guò)程中，水洗和浸潤(rùn)需要大量用水，丹酚酸B溶解在水中，隨洗藥水的排放而流失；丹酚酸B在水中不穩(wěn)定，而大生產(chǎn)批量大、切片時(shí)間長(zhǎng)、未切片藥材的浸潤(rùn)時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)、含量隨分解和氧化等反應(yīng)發(fā)生而不斷降低；切制后藥材需要進(jìn)一步干燥，加熱過(guò)程又導(dǎo)致丹酚酸B的損失。

本研究顯示，丹參在炮制生產(chǎn)過(guò)程中，水洗工藝使丹酚酸B損失量最嚴(yán)重，結(jié)合文獻(xiàn)資料，對(duì)丹參飲片大生產(chǎn)的炮制工藝提出幾條改進(jìn)建議：①采用搶水洗，縮短藥材與水的接觸時(shí)間，同時(shí)減少用水量，以藥材潔凈為度，能夠有效防止有效成分丹酚酸B的流失。②李智等[10]采用氣相置換法進(jìn)行潤(rùn)藥，效果明顯優(yōu)于普通方法，此方法可以快速軟化藥材，軟化效果良好，能夠真正做到藥透水盡。同時(shí)，軟化后藥材的水分低、易控制，有效降低了藥材有效成分的損失，生產(chǎn)自動(dòng)化大大提高了效率。③減少切制工序時(shí)間，從而減少藥材與水的接觸時(shí)間，快速地進(jìn)入干燥工序，防止丹酚酸B的損失。④控制好干燥溫度及干燥時(shí)間，朱靜等[11]、張文芯等[12]研究表明，丹酚酸B對(duì)濕熱不穩(wěn)定，在高于70 ℃時(shí)丹酚酸B水溶液易受熱分解，因此建議應(yīng)用帶式干燥機(jī)等快速干燥設(shè)備，溫度控制在60±5 ℃，縮短干燥時(shí)間，能有效降低丹酚酸B的損耗。

掌握丹參有效成分在大生產(chǎn)過(guò)程中損失的規(guī)律，進(jìn)行炮制工藝優(yōu)化，有益于提高丹參飲片中有效成分的含量，提高丹參的炮制效率，節(jié)約企業(yè)成本，同時(shí)推動(dòng)丹參的產(chǎn)業(yè)化大生產(chǎn)。

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Salvianolic acid B losses of Salvia miltiorrhiza in processing production

FANG Huanle1，CHEN Yanbin2，LU Xinyi2，SUN Baoping2

(1.Medical College of Xi′an Peihua University，Xi′an 710125，China；2.Shannxi Buchang Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710075，China)

ObjectiveToinvestigatethelossesofsalvianolicacidBinSalvia miltiorrhizainprocessingprocedure.Methods10batchesofSalvia miltiorrhizaslicesprocessingprocedurewereanalyzedbyHPLCandthecontentofsalvianolicacidBlosswascalculated.ResultsThesalvianolicacidBaveragecontentoftheoriginalmedicinalherbs，watermedicinalmaterials，nourishesherbs，andthesectionfoursamplingpointswere6.83%，4.72%，4.46%and3.55%，respectively，suggestingoriginalmedicinalmateriallosseswere30.84%，34.59%and47.99%，respectively.MultiplesamplingmeasurementresultsshowedthatthewashingprocesswasthekeyprocedureofsalvianolicacidBloss.Thelosswas22.11%andthefinallosswasashighas47.48%.ConclusionTostrictlycontrol(oroptimize)thewashingprocesscaneffectivelykeepthesalvianolicacidB，andimprovetheprocessingefficiencyofSalvia miltiorrhiza.

salvianolicacidB；Salvia miltiorrhiza；processing；wastagerates

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.005

R284

A

1004-2407(2016)05-0455-05

2015-11-04)