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    亳州疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分及抗氧化與抑菌活性研究

    2016-09-21 01:19:47劉超祥丁銳
    關(guān)鍵詞:羅勒藥學(xué)院亳州

    劉超祥,丁銳

    (亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,安徽 亳州 236800)

    王珊

    (亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,安徽 亳州 236800;安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,安徽 合肥 230000)

    丁連峰

    (安徽濟(jì)人藥業(yè)有限責(zé)任公司,安徽 亳州 236800)

    劉耀武

    (亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,安徽 亳州 236800)

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    亳州疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分及抗氧化與抑菌活性研究

    劉超祥,丁銳

    (亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,安徽 亳州 236800)

    王珊

    (亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,安徽 亳州 236800;安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,安徽 合肥 230000)

    丁連峰

    (安徽濟(jì)人藥業(yè)有限責(zé)任公司,安徽 亳州 236800)

    劉耀武

    (亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,安徽 亳州 236800)

    疏毛羅勒(OcimumbasilicumL);揮發(fā)油(;抗氧化性;抑菌活性

    疏毛羅勒(OcimumbasilicumL)為唇形科羅勒屬一年生全草植物,別名蘭香、九層塔等。其味辛甘、性溫,有疏風(fēng)解表、行氣活血、解毒消腫之功效。主治感冒頭痛、發(fā)熱咳嗽、食積不化、中暑等癥[1,2],還可用于蛇蟲咬傷和濕疹騷癢,且無毒副作用。近年來,羅勒的化學(xué)成分及生物活性研究引起國內(nèi)外科研工作者關(guān)注,疏毛羅勒藥理學(xué)研究主要集中在降低血糖活性、抗應(yīng)激活性、驅(qū)蟲活性、治療腹瀉、抗真菌活性和抗輻射引起的染色體損傷等領(lǐng)域[3,4]。

    對亳州疏毛羅勒(羅勒變種,俗稱香花子)的實(shí)地調(diào)研和臨床觀察,發(fā)現(xiàn)亳州疏毛羅勒揮發(fā)油成分對蚊蟲叮咬引起的痛癢和炎癥具有特殊療效[5]。基于此,本研究對亳州地區(qū)疏毛羅勒揮發(fā)油的化學(xué)成分分析、抗氧化及抑菌活性進(jìn)行了研究,試圖找到疏毛羅勒揮發(fā)油成分對蚊蟲叮咬引起的痛癢與抑菌活性、抗氧化活性之間的聯(lián)系,為亳州地區(qū)疏毛羅勒的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1材料

    樣品:采自安徽省亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥用植物園,經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定。

    主要儀器:RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(亞榮生化儀器廠產(chǎn)品),F(xiàn)A2004N電子天平(菁海儀器有限公司產(chǎn)品),752紫外可見分光光度計(jì)(菁華科技儀器有限公司產(chǎn)品),SHZ-(Ⅲ)循環(huán)水式多用真空泵(河南省予華儀器有限公司產(chǎn)品),HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋(晶波實(shí)驗(yàn)儀器廠產(chǎn)品),456-GC型氣相色譜(Bruker公司生產(chǎn)),SCION單四級桿質(zhì)譜儀(Bruker公司生產(chǎn)),SPX-150B生化培養(yǎng)箱、MJX-160B霉菌培養(yǎng)箱、HPX -9082MBE電熱恒溫培養(yǎng)箱(均為上海博迅實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品),AR5120電子分析天平(美國奧豪斯國際貿(mào)易有限公司產(chǎn)品)。

    試劑:羥甲基氨基甲烷、DPPH·、抗壞血酸(Vc)、鄰苯三酚、0.9%無菌氯化鈉溶液、丙酮等,所用試劑均為分析純。

    菌株及培養(yǎng)基:大腸埃希菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁(瓊脂)培養(yǎng)基、氯化鈉蛋白胨緩沖液(pH 7.0)均由安徽濟(jì)人藥業(yè)有限責(zé)任公司檢測中心提供。

    1.2方法

    1.2.1揮發(fā)油的提取

    取疏毛羅勒200g,剪碎,裝入500mL的圓底燒瓶中,水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油[6],乙醚萃取,使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醚后,得到淡黃色透明油狀物0.9g,揮發(fā)油得率0.45%,具有特殊香味,低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2化學(xué)成分分析

    采用氣-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對疏毛羅勒揮發(fā)油成分進(jìn)行分析。

    氣相色譜條件:彈性毛細(xì)管色譜柱(BR-17型,奧嵩科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品,0.25μm×250μm×30m),載氣:高純氦氣(南京上元工業(yè)氣體廠產(chǎn)品),純度大于99.99%,柱流量1.0mL/min,采用分流進(jìn)樣,分流比 10∶1,進(jìn)樣量1.0μL,進(jìn)樣口溫度為 220℃;程序升溫條件:初始溫度為40℃(2min),以2℃/min的速度升溫至100℃(保持2min),再以5℃/min的速度升溫至250℃。

    質(zhì)譜條件:EI離子源,電子能量70eV,離子源溫度為220℃,傳輸線溫度為260℃,四級桿溫度 為150℃;全掃描模式,掃描周期 1s,質(zhì)譜檢索標(biāo)準(zhǔn)庫:NIST 11.L。

    1.2.3抗氧化活性測定

    抑制率 (I)={[(△D/△t)對照- (△D/△t)]/ (△D/△t)對照}× 100%

    2)清除DPPH·自由基能力測定參考文獻(xiàn)[10,11]的方法測試目標(biāo)化合物清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的能力。向1mL DPPH·乙醇溶液中加入不同濃度的疏毛羅勒揮發(fā)油使總體積達(dá)到2mL。振蕩器混勻后,室溫,避光放置30min后,在518nm波長處測定光密度D1,DPPH·乙醇溶液在518nm波長處測定光密度D0,平行測定3次,按下式計(jì)算清除率。用Vc進(jìn)行空白對照。

    清除率=[(D0-D1)/D0]×100%

    1.2.4抑菌活性測定

    采用杯碟法[12],檢測疏毛羅勒揮發(fā)油對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的抑制作用。樣品設(shè)5個(gè)濃度,分別為1050、525、262.5、131.25、65.625 μg/mL。

    2 結(jié)果與分析

    2.1疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分

    采用GC/MS分析對疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行分析,共檢測出27個(gè)峰。對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖,經(jīng)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索按各色譜峰的質(zhì)譜裂片圖并結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)對峰質(zhì)荷比和相對豐度等進(jìn)行直觀比較,同時(shí)還對一些主要成分采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照,分別對各色譜峰加以確認(rèn),鑒定了疏毛羅勒揮發(fā)油組分中的化學(xué)成分,按面積歸一法確定各組分相對含量,分析結(jié)果見表1。

    表1 疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分的GC/MS的分析結(jié)果

    由表1可知,疏毛羅勒揮發(fā)油成分鑒定出27種化合物,主要成分為萜類物質(zhì),占揮發(fā)油成分的60.61%。相對含量較高的是十六酸乙酸乙酯(44.16%)、酸松油酯(17.01%)、(s)-2,5,5,8-四甲基-1,2,3,6-四氫化薁-4-酮(9.92%)、香葉醇(3.05%)、3-(1,3-丁間二烯基)-2,4,4-三甲基-環(huán)己烯(2.42%)、肉桂酸甲酯(2.35%)、香樹烯(1.35%)、1,2,3,4,5,6,7,8,8a-八氫-1,4-二甲基-7-(1-異丙烯基)-甘菊環(huán)烴(1.52%)、莰烯(1.32%)及B-瑟林烯(1.09%),其他成分含量較少。結(jié)合植物生源代謝途徑分析,認(rèn)為疏毛羅勒揮發(fā)油成分主要通過甲戊二羥酸代謝合成途徑、莽草酸代謝合成途徑和乙酰-丙酮酸代謝合成途徑完成,沒有發(fā)現(xiàn)氨基酸代謝合成途徑產(chǎn)物。

    2.2疏毛羅勒揮發(fā)油的抗氧化活性

    表2 疏毛羅勒揮發(fā)油抗氧化活性

    2.3 疏毛羅勒揮發(fā)油的抑菌活性

    從表3結(jié)果可以看出,疏毛羅勒揮發(fā)油樣品有一定抑菌活性,對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌均有一定的抑菌作用并成濃度依賴,濃度越高,抑菌作用越明顯;但是對枯草芽孢桿菌的抑菌效果最差。

    表3 疏毛羅勒揮發(fā)油抑菌活性的結(jié)果分析

    3 結(jié)論

    現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)諸多疾病的發(fā)生和發(fā)展與自由基導(dǎo)致的機(jī)體細(xì)胞氧化損傷密切相關(guān),從天然產(chǎn)物中尋找安全有效的抗氧化劑成為近年來的研究熱點(diǎn)之一。本研究以抗DPPH·自由基能力為指標(biāo),評價(jià)疏毛羅勒揮發(fā)油成分的抗氧化能力;發(fā)現(xiàn)疏毛羅勒揮發(fā)油所含化學(xué)成分有較好的抗氧化性[13,14];其揮發(fā)油對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌3株菌種隨濃度升高抑菌效果越明顯。試驗(yàn)過程中還將其制成液體溶劑用于蚊蟲叮咬實(shí)驗(yàn),止癢效果也較明顯。此外,課題組從疏毛羅勒揮發(fā)油組分中分離純化到一個(gè)具有驅(qū)蚊活性的單體化合物和一個(gè)具有止癢效果的單體化合物,對2個(gè)化合物的藥理活性正在進(jìn)一步研究和開發(fā)。

    [1]劉勇民.維吾爾藥志[M].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社,1999:336~338.

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    2016-04-18

    安徽省質(zhì)量工程—藥學(xué)專業(yè)省級教學(xué)團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2013jxtd067);安徽省質(zhì)量工程—藥品質(zhì)量檢測技術(shù)特色專業(yè)項(xiàng)目(2014tszy055);安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)研究項(xiàng)目重點(diǎn)課題(KJ2015A358);亳州市中藥科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(BZ2014zzb21)。

    劉超祥(1972-),男, 博士, 副教授, 主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)成分及生物活性研究,cxliu888@163.com。

    Q949.777.6

    A

    1673-1409(2016)21-0034-04

    [引著格式]劉超祥,丁銳,王珊,等.亳州疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分及抗氧化與抑菌活性研究[J].長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版) ,2016,13(21):34~37.

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