不同產(chǎn)地澤瀉鹽炙前后水提液中成分及其利尿作用分析

陳中文（肇慶市端州區(qū)華佗醫(yī)院藥劑科　肇慶　526040）

不同產(chǎn)地澤瀉鹽炙前后水提液中成分及其利尿作用分析

陳中文（肇慶市端州區(qū)華佗醫(yī)院藥劑科肇慶526040）

目的：探討不同產(chǎn)地澤瀉鹽炙前后水提液中成分及其利尿作用的差異。方法：抽選福建、江西、四川、廣西四個地方的澤瀉為研究材料，使用薄層色譜法定性實驗以及高效液相色譜法定量試驗分析上述產(chǎn)地的澤瀉在鹽炙前后水提液成分的差異。同時本次研究以SD系列大鼠為研究對象，將其隨機分為4組使用不同產(chǎn)地的澤瀉生品、炙品對大鼠進行代謝籠法實驗，測定大鼠尿量變化差異。結果：相較于空白對照組，同一時間廣西生品給藥后1～3h、6h可促使大鼠排尿量明顯增加（P＜0.05），而四川生品只是在給藥之后的1h促使大鼠排尿量增加，江西生品對大鼠排尿量沒有明顯的影響（P＞0.05），福建生品給藥1～2h后可促使大鼠排尿量明顯減少（P＜0.05）。廣西澤瀉鹽炙品可促使大鼠排尿量增加，四川澤瀉鹽炙品可促使大鼠排尿量明顯增加，而江西與福建澤瀉鹽炙品可促使大鼠排尿量明顯減少（P＜0.05）。結論：不同產(chǎn)地的澤瀉生品均無長時間的利尿效果，但不同產(chǎn)地的澤瀉鹽炙品則具有不同的利尿效果。

不同產(chǎn)地 HPLC澤瀉 鹽炙 水提液 利尿作用

澤瀉是一種常年生長在水中或者沼澤中的草本植物，味甘、淡且性寒，需要注意的是，澤瀉全株有毒且以地下塊莖毒性最為嚴重，但其同時也能用來治療腎炎水腫、腸炎泄瀉、小便不利等臨床癥狀，而不同的澤瀉制法在臨床效果、主治癥狀上有所不同［1］。臨床研究顯示［2］，澤瀉生品、酒炙澤瀉、麩炒澤瀉均具有不同程度的利尿作用，但鹽炙澤瀉的利尿作用未經(jīng)證實。本次研究將探討不同產(chǎn)地澤瀉鹽炙前后水提液中成分及其利尿作用的差異，現(xiàn)報道如下：

1　材料與方法

1.1儀器和試藥：材料：澤瀉（產(chǎn)地：福建、江西、四川、廣西，批號分別為006009、007004、008005、006003。通過廣西中醫(yī)學院藥用植物教研室鑒定為澤瀉科植物澤瀉的干燥塊莖）。呋塞米片（上海朝暉藥業(yè)有限公司，批號：國藥準字H31021074，規(guī)格：20mg×100s）。

儀器：薄層層析硅膠G（青島海洋化工有限公司，化學純，批號000727）、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、乙腈（均為分析純級別）、1100型高效液相色譜儀、AEU-20電子天平、LG16-W型高速微量離心機以及電熱恒溫鼓風干燥箱、自制大鼠代謝籠等諸多器具設備。

大鼠：普通級SD系列大鼠（廣西醫(yī)科大學實驗動物中心，許可證號為SCXK（桂）2003-0003）。

1.2方法和結果

1.2.1澤瀉鹽炙：取100kg澤瀉并為其置入2kg食鹽鹽水，攪拌均勻后將其悶潤，觀察澤瀉中鹽水被吸盡后將其置于炒制容器中給予文火加熱并炒至微黃色，取出成品晾干后使用篩子祛除碎屑。將不同產(chǎn)地的澤瀉生品、澤瀉鹽炙品分別加水煎煮2次，合并生品與鹽炙品的提取液并對其進行濃縮處理，置于4℃下冷藏過夜，最終給予離心后取上層清澈液體并置于4℃冰箱內(nèi)保存。上述操作均依照《中國藥典》［3］中相關操作流程標準進行。

1.2.2薄層色譜法：①制備樣品：精密稱取5g不同產(chǎn)地澤瀉生品、鹽炙品，加入12倍水，煮沸1h后放冷，將失去的水補足。稱取澤瀉生品、鹽炙品各40mL，在分液漏斗內(nèi)置入后加入25mL乙酸乙酯，搖振并靜置。用水洗2次乙酸乙酯層，水浴揮干乙酸乙酯后易甲醇2mL溶解，可得樣品。②采取樣品并在100mm× 200mm硅膠G板上點樣，展開液為石油醚：乙酸乙酯：乙醇為9：7：1，上行展開并用80℃的5%硫酸乙醇噴后顯色，觀察。采取樣品并在100mm×200mm硅膠G板上點樣，展開液為石油醚：乙酸乙酯：乙醇為9：7：2，上行展開后以80℃的5%的香草醛硫酸液顯色，觀察。

1.2.3高效液相色譜法操作：①色譜條件為：色譜柱Hypersili 0DS25μmC18柱（4.6mm×250mm，5μm）、流動相乙腈-水則為5-95；流動速度為1mL/min，同時波長為540mm、溫度20℃。②供試品溶液制備：精密稱定各個產(chǎn)地的澤瀉生品、鹽炙品10g，置于精密稱量12倍的水量后持續(xù)煮沸1h，放冷后再次稱量并加入冷水補足重量，上述液體混合均勻后使用紗布進行過濾、靜置處理，取上層清澈液體為水提液。精密稱量各個產(chǎn)地的澤瀉生品、鹽炙品水提液60mL，對其進行水浴濃縮至5mL后得到澤瀉提取液。將各個產(chǎn)地的澤瀉生品、鹽炙品提取液1mL置于高速微量離心機中進行離心旋轉(zhuǎn)10min，旋轉(zhuǎn)速度為10000r/min，而后靜置處理并再次以10000r/min的速度離心處理15min后靜置成為供試品溶液。最終得到不同產(chǎn)地的澤瀉生品、鹽炙品溶液10ug在同一色譜條件下進行測定。

1.2.4大鼠測驗：取健康大鼠60只，編號后以隨機數(shù)字表法分組，分為空白對照組（蒸餾水）、陽性對照組（呋塞米）、各產(chǎn)地澤瀉生品組、各產(chǎn)地澤瀉鹽炙組，給予大鼠臨床擬人用藥劑量的11.2倍劑量作水負荷以及代謝籠實驗，持續(xù)8h后記錄各組大鼠尿量。

1.3統(tǒng)計學方法：本次研究中所有數(shù)據(jù)使用SPSS18.0進行統(tǒng)計處理，表達方式包括計量資料（）與計數(shù)資料（%）兩種類型，以t檢驗和X2檢驗，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1成分分析：薄層色譜法結果顯示，以F狀斑點為例，各個產(chǎn)地的澤瀉生品均出現(xiàn)F狀斑點且以四川產(chǎn)地最高，福建產(chǎn)地的澤瀉生品在鹽炙后F狀斑點消失；以C狀斑點為例，四川產(chǎn)地的澤瀉出現(xiàn)了特有的C狀斑點，廣西、江西產(chǎn)地的澤瀉生品則在鹽炙后出現(xiàn)C狀斑點；以A、B狀斑點為例，廣西、四川、福建產(chǎn)地的澤瀉生品均出現(xiàn)A、B狀斑點，江西產(chǎn)地的澤瀉生品則在鹽炙后出現(xiàn)A、B狀斑點，鹽炙品中以廣西產(chǎn)地的含量最高；以D狀斑點為例，四川、江西、福建產(chǎn)地的澤瀉生品、鹽炙品均存在D狀斑點，四川產(chǎn)地含量最高；以E狀斑點為例，四川、江西產(chǎn)地的澤瀉生品、鹽炙品均存在E狀斑點，鹽炙后含量有所增加。上述結果說明四川澤瀉鹽炙后種類、含量無變化；江西澤瀉鹽炙后種類、成分有所增加；福建澤瀉鹽炙后種類無變化、含量有所降低；廣西澤瀉鹽炙后種類無變化、含量有所增加。高效液相色譜法檢測結果顯示上述四個產(chǎn)地的澤瀉鹽炙前后均無明顯變化。

2.2尿量影響：相較于空白對照組，同一時間廣西生品給藥后1～3h、6h可促使大鼠排尿量明顯增加（P＜0.05），而四川生品只是在給藥之后的1h促使大鼠排尿量增加，江西生品對大鼠排尿量沒有明顯的影響（P＞0.05），福建生品給藥1～2h后可促使大鼠排尿量明顯減少（P＜0.05）。廣西澤瀉鹽炙品可促使大鼠排尿量增加（P＜0.05），四川澤瀉鹽炙品可促使大鼠排尿量明顯增加（P＜0.05），而江西與福建澤瀉鹽炙品可促使大鼠排尿量明顯減少（P＜0.05），見表1-表4。

表1　廣西澤瀉生品及鹽炙品不同時間對大鼠尿量的影響對比（，mL）

表1　廣西澤瀉生品及鹽炙品不同時間對大鼠尿量的影響對比（，mL）

空白對照組呋塞米陽性組澤瀉生品組澤瀉鹽炙組組別　1h　2h　3h　4h　5h　6h　7h　8h 3.9±1.1 6.9±2.0 5.5±1.3 5.2±2.0 4.8±1.3 9.6±3.3 6.2±1.4 6.7±1.9 5.4±1.1 10.9±3.4 6.8±1.8 7.1±2.6 6.0±1.2 10.9±3.2 7.3±1.6 7.9±3.6 6.1±1.2 10.9±3.4 7.2±1.8 8.4±3.5 6.6±1.5 10.9±3.3 8.6±2.1 8.8±4.3 7.3±1.8 11.3±3.4 8.6±2.3 9.4±4.0 7.6±2.1 11.6±3.6 8.7±2.4 9.6±4.7

表2　四川澤瀉生品及鹽炙品不同時間對大鼠尿量的影響對比（，mL）

表2　四川澤瀉生品及鹽炙品不同時間對大鼠尿量的影響對比（，mL）

空白對照組呋塞米陽性組澤瀉生品組澤瀉鹽炙組組別　1h　2h　3h　4h　5h　6h　7h　8h 3.9±0.9 8.7±1.8 5.8±1.2 6.2±2.2 4.8±1.3 13.6±3.6 5.8±1.2 6.4±2.1 5.4±1.3 16.5±2.5 6.3±1.3 6.7±2.6 6.1±1.2 17.9±2.6 6.6±1.6 6.8±2.6 6.3±1.5 18.4±3.4 6.6±1.5 7.9±3.2 6.6±1.4 19.1±3.5 7.6±2.6 7.7±3.1 7.2±1.8 19.3±3.2 8.1±2.2 8.4±2.6 7.6±2.2 19.5±3.4 8.9±1.5 9.2±2.8

表3　江西澤瀉生品及鹽炙品不同時間對大鼠尿量的影響對比（，mL）

表3　江西澤瀉生品及鹽炙品不同時間對大鼠尿量的影響對比（，mL）

空白對照組呋塞米陽性組澤瀉生品組澤瀉鹽炙組組別　1h　2h　3h　4h　5h　6h　7h　8h 3.9±1.1 7.1±1.7 3.2±1.4 1.1±0.8 4.8±1.3 9.3±2.6 3.9±2.0 1.8±1.2 5.4±1.2 11.5±2.4 4.9±2.4 2.6±1.7 6.1±1.4 12.6±2.3 5.7±1.6 3.2±2.0 6.2±1.5 13.4±2.3 5.7±1.6 3.3±1.0 6.6±1.6 14.5±2.5 7.2±1.8 4.8±1.7 7.2±1.8 14.7±2.8 7.5±1.8 5.1±1.9 7.6±2.2 15.5±3.0 8.5±2.0 6.4±2.4

表4　福建澤瀉生品及鹽炙品不同時間對大鼠尿量的影響對比（，mL）

表4　福建澤瀉生品及鹽炙品不同時間對大鼠尿量的影響對比（，mL）

空白對照組呋塞米陽性組澤瀉生品組澤瀉鹽炙組組別　1h　2h　3h　4h　5h　6h　7h　8h 3.9±1.1 6.3±2.4 2.3±1.6 1.6±1.0 4.8±1.1 8.2±4.0 3.0±1.6 4.3±1.5 5.4±1.3 9.4±4.0 4.4±1.8 4.3±1.5 6.1±1.5 10.9±4.1 5.0±1.8 5.3±2.0 6.2±1.5 11.5±4.3 5.6±2.4 5.7±2.3 6.6±1.6 11.9±3.7 5.6±2.4 5.2±2.3 7.1±1.8 12.6±3.8 5.9±3.0 5.9±2.5 7.6±2.0 12.6±3.5 6.9±3.0 7.2±3.4

3　討論

澤瀉的炮制方法包括酒浸后炙、微炒、酒浸后蒸以及鹽水攪拌、鹽水炒焦等多種方法，當前臨床最常使用的澤瀉炮制方法是鹽炙以及麩炒。事實上，有關澤瀉鹽炙的方法已經(jīng)被我國藥典進行試驗并記錄，證實將澤瀉鹽炙、酒浸后微炒能有效起到補益元氣的功效，而將澤瀉浸入鹽水后微炒則能起到滋陰利水的功效［4］。有關研究證實［5］，在諸多澤瀉制品中，澤瀉麩炒、澤瀉酒炙等均有不同程度的利尿效果，而有關澤瀉鹽炙的利尿效果仍然缺乏研究。

本次研究中主要針對廣西、四川、江西、福建4個產(chǎn)地的澤瀉鹽炙、生品的利尿效果進行研究，事實上在羅永東等人［6］的研究結果中就已顯示，四川、江西等不同產(chǎn)地的澤瀉藥材在成分、含量上均存在一定的差異（P＜0.05），這與本次研究中部分結論是一致的，而存在差異的原因可能在于本次研究中所用澤瀉含量較少以及觀察時間較長。同時本次研究發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地在澤瀉生品鹽炙后的利尿效果上存在顯著差異（P＜0.05），江西、福建兩地的澤瀉鹽炙品甚至出現(xiàn)了抗利尿的現(xiàn)象，說明不同產(chǎn)地的澤瀉生品均無長時間的利尿效果，但不同產(chǎn)地的澤瀉鹽炙品則具有不同的利尿效果。

本次研究中有關澤瀉生品、鹽炙品的利尿效果研究依然存在觀察時間長短的問題。

［1］俞燕，鐘瑞建，丁劍虹，等.HPLC法同時測定不同產(chǎn)地車前子生品及鹽炙品中3個主要活性成分的含量 ［J］.藥物分析雜志，2015，35（5）：889-892.

［2］李寅，陳巖松，馬寶東.澤瀉炮制及副作用［J］.實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2013，27（7）：141-142.

［3］趙宇輝，唐丹丹，陳丹倩.利尿藥茯苓、茯苓皮、豬苓和澤瀉的化學成分及其利尿作用機制研究進展［J］.中國藥理學與毒理學雜志，2014，28（4）：594-599.

［4］曾春暉，楊柯，盧國安，等.廣西澤瀉鹽炙前后利尿作用的實驗研究［J］.廣西中醫(yī)藥，2011，34（1）：55-56.

［5］曾春暉，楊柯，劉海燕.不同產(chǎn)地澤瀉鹽炙前后成分差異及利尿作用的研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（2）：148-152.

［6］羅永東，邱麗莉，許文，等.不同產(chǎn)地澤瀉4個三萜類成分含量比較［J］.中藥材，2010，33（12）：1849-1851.

Different regions ze Epsom salt in the water extraction liquid before and after the main ingredients and diuretic effect analysis

Chen Zhongwen（Zhaoqing city hua tuo DuanZhou district hospital pharmacy department）

0bjective：to study the different origin ze Epsom salt in the water extraction liquid ingredients and diuretic effect before and after the main differences.Methods：selected in fujian，jiangxi，sichuan，guangxi four places alisma as research materials，using thin layer chromatography statutory experimental and HPLC quantitative test analysis of the origin of rhizoma alismatis in salt water before and after the main differences of the fluid composition.At the same time，the study of a series of SD rats as the research object，which were randomly divided into 4 way to use a different origin of alisma raw product，main product of metabolic cage method experiment in rats，the determination of variations of urine in rats.Results：compared with blank control group，at the same time in guangxi were 1 to 3h，6 h after the treatment can induce rat urine output increased significantly（P＜0.05），and raw product in sichuan just 1 h after dosing to promote rat urine output increased，Jiang Xisheng product had no obvious effect on rat urine output（P＞0.05），fujian raw product to medicine can induce rats after 1～2h urine output decreased significantly（P＜0.05）.Guangxi ze Epsom salt main product can induce rat urine output increases，the sichuan salt main product can induce rat urine output increased significantly，and jiangxi and fujian salt main product can induce rat urine output decreased significantly（P＜0.05）.Conclusion：the different origin of alisma raw goods no long diuretic effect，but different jersey Epsom salt origin of the goods has diuretic effect of different.

Different regions HPLC Alisma Salt main Water extract Diuretic effect

R285.5

B

1672-8351（2016）09-0126-02