ICU和EICU高頻接觸物表分離的金黃色葡萄球菌耐藥性及毒力基因檢測(cè)

劉鵬，陳琳，許兆軍，許小敏，梁珊燕

ICU和EICU高頻接觸物表分離的金黃色葡萄球菌耐藥性及毒力基因檢測(cè)

劉鵬，陳琳，許兆軍，許小敏，梁珊燕

目的 了解ICU和EICU高頻接觸物表分離的金黃色葡萄球菌的耐藥性及毒力基因的攜帶情況。方法

重癥監(jiān)護(hù)病房；急診重癥監(jiān)護(hù)病房；金黃色葡萄球菌；耐藥性；毒力基因

金黃色葡萄球菌是重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）、急診重癥監(jiān)護(hù)病房（EICU）常見分離到的病原菌[1]，可導(dǎo)致嚴(yán)重感染。其高發(fā)病率和病死率，是醫(yī)療團(tuán)隊(duì)在救治過程中面臨的重大挑戰(zhàn)問題?；颊咧車h(huán)境物體表面的金黃色葡萄球菌，通常可以在其上面存活數(shù)周，甚至數(shù)月，同樣污染的環(huán)境物表可以傳播病原體。本研究旨在了解ICU和EICU高頻接觸物表分離的金黃色葡萄球菌耐藥性及毒力基因攜帶情況，并對(duì)耐甲氧西林發(fā)生率和殺白細(xì)胞基因（PVL）和超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst）進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 2015年1—3月每月1次采集ICU和EICU高頻接觸的物表；床欄、床上用品、床邊桌、血壓計(jì)、靜脈注射泵、護(hù)士呼叫按鈕、尿液收集袋共計(jì)312份。在清潔消毒前，采用采樣棉簽采樣100 cm2，7.5%NaCl增菌6～8 h，接種金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基篩查，35℃孵育24 h，如不明顯延長(zhǎng)至48 h，紫紅色菌落，再進(jìn)行染色和凝固酶試驗(yàn)確認(rèn)，共收集54株菌株。

1.2 菌種鑒定及藥敏試驗(yàn) 篩查陽(yáng)性的菌株，采用PCR擴(kuò)增作spa基因。同時(shí)參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)推薦標(biāo)準(zhǔn)（CLSI）確認(rèn)MRSA。VITEK-2 compact GPS-16卡片進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。金黃色葡萄球菌ATCC25923標(biāo)準(zhǔn)菌株。

1.3 基因檢測(cè)和測(cè)序 蛋白酶K裂解法制備細(xì)菌DNA模板。全部基因檢測(cè)均為PCR法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。檢測(cè)項(xiàng)目為殺白細(xì)胞基因（PVL），20種超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst），PCR產(chǎn)物用3730全自動(dòng)熒光法測(cè)序（美國(guó)，ABI公司）。用Chromas直接作BLAST Search網(wǎng)上比對(duì)。

2 結(jié)果

2.1 金黃色葡萄球菌對(duì)各種抗菌藥物的耐藥性 312份標(biāo)本分離出54株金黃色葡萄球菌，分離率17.31%。檢出耐甲氧西林菌株31株，MRSA發(fā)生率為57.41%。分離株對(duì)萬(wàn)古霉素、替考拉寧、利奈唑烷、替加環(huán)素、喹奴普汀/達(dá)福普汀、呋喃妥因均敏感，慶大霉素、紅霉素、綠潔霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星的耐藥率均超過 75.00%。莫西沙星和復(fù)方新諾明耐藥57.41%。見表1。

表1 54株金黃色葡萄球菌對(duì)各種抗菌藥物的敏感率和耐藥率 株（%）

2.2 金黃色葡萄球菌超抗原基因檢測(cè)組合模式 金黃色葡萄球菌超抗原基因35株有陽(yáng)性檢出（即超抗原基因總檢出率達(dá)64.81%），其中sea、seq各24株（44.44%），seb、sem、sep 各 3 株（5.56%），sek19株（35.19%），seg、sei、sen、seo各6株（11.11%），sec、sed、see、seh、sej、sel、eta、eta、eta、tst未檢出。PVL基因檢出10株（14.81%）。見表2。

表2 54株金黃色葡萄球菌超抗原

3 討論

金黃色葡萄球菌易引起醫(yī)院獲得性和社區(qū)性感染。患者攜帶的金黃色葡萄球菌可頻繁污染周圍環(huán)境物體表面，由于ICU、EICU患者氣管插管和鼻胃管使用率高，像許多其他病原菌一樣能夠在其表面形成生物膜，導(dǎo)致細(xì)菌的持續(xù)釋放，同樣污染的環(huán)境物表可以傳播病原體。本組312份高頻接觸的物表標(biāo)本分離出54株金黃色葡萄球菌，分離率17.31%，與其他研究報(bào)告相一致[2-3]，高分離率與病房的終末清潔不徹底、患者感染同源細(xì)菌（直接來源于環(huán)境表面；醫(yī)務(wù)人員污染的手）有關(guān)。多項(xiàng)研究表明，實(shí)施改善環(huán)境物表的清潔與消毒，可以減少病原體的傳播。

MRSA感染的治療變得越來越困難，由于MRSA菌株耐 -內(nèi)酰胺類抗生素及其他抗菌藥物。MRSA的感染過去的十年中在ICU增加逐年增加。本研究54株 ICU和EICU高頻接觸物表分離的菌株對(duì)常見抗菌藥物耐藥率均較高，這與國(guó)內(nèi)、外的其他研究報(bào)告相一致[4-5]。金黃色葡萄球菌具有廣泛的毒力因子。

金黃色葡萄球菌感染的嚴(yán)重程度可能與這些毒素的產(chǎn)生。外毒素可以促使組織的破壞、逃避宿主的免疫反應(yīng)。本研究在PVL檢出率14.81%，低檢出率可能與分離的細(xì)菌均為院內(nèi)獲得相關(guān)。金黃色葡萄球菌至少有20個(gè)不同血清學(xué)的超抗原已被描述，包括SEA-Q和TSST-1。本研究中SEA的檢出率44.44%。產(chǎn)腸毒素的金黃色葡萄球菌菌株，結(jié)合不同的SE基因也可以促進(jìn)的發(fā)生率和嚴(yán)重程度，在本項(xiàng)研究中seq檢出24株（44.44）和sek19檢出株（35.19%）。

ICU和EICU高頻接觸物表金黃色葡萄球菌的高分離率、高耐藥率分離及廣泛的毒力因子，需要臨床強(qiáng)化清潔/消毒，減少污染物表傳播疾病。

[1] 胡付品,朱德妹,汪復(fù),等.2013年中國(guó)CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J].中國(guó)感染與化療雜志,2014,14(5):365-370.

[2] Adhikari RP,Ajao AO,Aman MJ,et al. Lower antibody levels to Staphylococcus aureus exotoxins are associated with sepsis in hospitalized adults with invasive S. aureus infections[J].J Infect Dis,2012, 206:915-923.

[3] Dinic M,Vukovic S,Kocic B,et al.Nasal carriage of Staphylococcus aureus in healthy adults and in school children[J].Acta Fac Med Naiss,2013,30:31-36.

[4] Lozano C,Gomez-Sanz E,Benito D,et al. Staphylococcus aureus nasal carriage, virulencetraits,antibiotic resistance mechanisms,and genetic lineages in healthy humans in Spain,with detection of CC398 and CC97strains[J].Int J Med Microbiol, 2011,301:500-505.

[5] 糜祖煌,金輝,秦玲.葡萄球菌屬連續(xù)分離株毒力與耐藥基因研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2008,18(4):454-456.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.01.012

R446.6

A

1671-0800(2016)01-0025-02

2015-08-20（本文編輯：孫海兒）

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014KYA197）；寧波市科技局社發(fā)擇優(yōu)委托項(xiàng)目（2011C51002）

315010寧波，寧波市第二醫(yī)院

許小敏，Email:xjl199908 02@sina.com

2015年1—3月每月1次采集ICU和EICU高頻接觸物表檢測(cè)分離金黃色葡萄球菌，用vitek2-compact上機(jī)及葡萄球菌A蛋白PCR基因表達(dá)鑒定菌株，GPS-16卡片進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，通過PCR方法分析殺白細(xì)胞基因（PVL）和超抗原基因（sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、eta、etb、etd、tst）的表達(dá)情況。結(jié)果 312份標(biāo)本分離出54株金黃色葡萄球菌，分離率17.31%。MRSA發(fā)生率為57.41%。對(duì)萬(wàn)古霉素、替考拉寧、利奈唑烷、替加環(huán)素、喹奴普汀/達(dá)福普汀、呋喃妥因均敏感，慶大霉素、紅霉素、綠潔霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星的耐藥率均超過75.00%。莫西沙星和復(fù)方新諾明耐藥57.41%；超抗原基因總檢出率達(dá)64.81%，其中sea 、seq各24株（44.44%），seb、sem、sep各3株（5.56%），sek19株（35.19%），seg、sei、sen、seo各6株（11.11%），sec、sed、see、seh、sej、sel、eta、eta、eta、tst未檢出。PVL基因檢出10株（14.81%）。結(jié)論 ICU和EICU高頻接觸物表金黃色葡萄球菌的高分離率、高耐藥率分離及廣泛的毒力因子，需要臨床強(qiáng)化清潔/消毒，減少污染物表傳播疾病。